Summary

Synthetische Methodologie voor Asymmetric Ferroceen Afgeleid Bio-conjugaat Systems via Solid Phase Resin-gebaseerde Methodologie

Published: March 12, 2015
doi:

Summary

The synthesis of asymmetric species of ferrocene is challenging using solution techniques. This report focuses on the methods carried out to produce a ferrocene-biotin bioconjugate using facile and clean reactions accomplished via solid-phase synthesis. Incorporation of a thiolate moiety is shown to impart the ability for immobilization on gold surfaces.

Abstract

Vroege detectie is een sleutel tot een succesvolle behandeling van de meeste ziekten en in het bijzonder noodzakelijk voor de diagnose en behandeling van vele soorten kanker. De meest gebruikte technieken gebruikt worden beeldvormingsmodaliteiten zoals Magnetic Resonance Imaging (MRI), Positron Emissie Topografie (PET) en computertomografie topografie (CT) en zijn optimaal voor het begrijpen van de fysieke structuur van de ziekte, maar slechts eenmaal per vier worden uitgevoerd zes weken door het gebruik van beeldvormende middelen en de totale kosten. Met dit in het achterhoofd, de ontwikkeling van de 'point of care "technieken, zoals biosensoren, die het stadium van de ziekte en / of werkzaamheid van de behandeling in het kantoor van de arts te evalueren en doen dat in een tijdig, zou behandelprotocollen revolutioneren. 1 als een middel voor het verkennen ferroceen gebaseerde biosensoren voor de detectie van biologisch relevante moleculen 2, zijn methoden ontwikkeld om ferroceen biotine-biologische conjugaten die hierin beschreven produceren. Dit rapport zal zich richten op een biotine-ferroceen-cysteïne systeem dat kan worden geïmmobiliseerd op een gouden ondergrond.

Introduction

Biosensoren zijn kleine apparaten die biomoleculaire herkenning technologie in dienst als platform voor selectieve analyse en worden gebruikt voor hun specificiteit, snelheid en lage kosten. Elektrochemische biosensoren voor de detectie van biomoleculen bij het ​​front van dit veld vanwege hun eenvoud, kosteneffectiviteit en hoge gevoeligheid. 1,3 De algemene anatomie van deze sensoren een elektrode is voorzien van een herkenningsmolecuul specifiek voor de biologische merker plaats . Binding van de biomarker van de herkenningsmolecuul resulteert in een lokale verandering van mogelijke of feitelijke die kunnen worden gedetecteerd door meting. Om de herkenningsdeel datum kan variëren van enzymen, 4-8 antilichamen, 9-12 hele cellen, 13-16 receptoren, 17-20 peptiden 21-23 pt DNA-24 en zijn grotendeels gericht op grotere, biologische moleculen. 25-28 Onderzoek inspanningen in deze arena zijn voornamelijk geconcentreerd op immunosensoren wheopnieuw een immunoglobuline wordt geïmmobiliseerd met een redox actieve kern (zoals ferroceen) en gebruikt om een ​​antilichaam van belang te detecteren. Deze studies zijn uitgesloten van klinische toepassingen te wijten aan slechte precisie en tijd het verbruik als gevolg van de complicaties die voortvloeien uit het gebruik van antigeen / antilichamen. 1,3 Groeiende aandacht is gericht op de detectie van kleine moleculen (minder dan 1 kg / mol) van biomedische , voeding en milieu interesse in aanvulling op de nationale veiligheid. 29 De bekendste voorbeelden van biosensor apparaten zijn zelftest glucose monitors, die gezeefdrukt enzym elektroden gekoppeld aan een pocket-size amperometrisch meter hebben. Deze systemen gebruiken typisch een coulometrische werkwijze waarbij de totale hoeveelheid lading die door de glucose oxidatiereactie wordt gemeten over een periode van tijd. Verhandelbare apparaten moeten draagbaar, robuust en met de hand worden gehouden om gebruik facile voor de bevolking te maken in het algemeen.

Redox-tags zoals ferrocene zijn necessary om de elektrochemische detectie van biomarkers of kleine moleculen in oplossing meeste biomarkers zijn niet intrinsiek elektrochemisch actief. 30-38 Ferrocene een organometallische molecule dat een gouden standaard voor elektrochemie, waardoor het een uitstekende keuze voor integratie in elektrochemische biosensoren maakt. -Ferroceen gebaseerde redox-actieve soorten hebben al veel aandacht oogstte vanwege hun kleine formaat, goede stabiliteit, gemakkelijke synthetische toegang, gemakkelijk chemische modificatie, relatieve lipofiliteit, en het gemak van redox-tuning. 3,30-42 Kleine moleculen op basis van de ferrocene kern hebben uitgebreid gebruikt als detectoren van metaalionen en kleine moleculen. 32-38,43 Systems richt grotere soorten zoals biomoleculen hebben de bevestiging van grote antilichamen of immunoglobulinen te ferroceenderivaten die zijn ingebed op een elektrochemische oppervlak benut. 1,3,39 44 In elk geval, de potentiële en actuele intensity van de Fe III / Fe II redoxkoppel werd gewijzigd op moleculaire koppeling, waardoor een nieuwe spectroscopische handgreep die de aanwezigheid van de analyt molecuul. Deze wijziging vloeit voort uit de grote overlap ontstaat tussen de pi-systeem van het cyclopentadienyl ringen en de ijzer d-orbitalen. Als de pi-systeem gemodificeerd, dwz gederivatiseerd of reageerden dan de orbitale interactie beurt verandering. Dit zal de Fe kern beïnvloeden en kan worden waargenomen als een verschuiving in het potentieel van de Fe III / Fe II koppel. 40,45,46 deze eigenschappen dergelijk systeem aantrekkelijk voor gebruik als een van hoeveelheid middel in een immunoassay of elektrochemische biosensor.

Om ferroceen met systemen voor specifieke biosensor capaciteit produceren optimaal een Cp-ring veranderen met de bio-receptor specifiek is voor een doelwitmolecuul en gebruik de andere Cp-ring als moleculaire ketting aan de elektrochemische uitlezing of electrode (Figuur 1). Synthese van deze asymmetrische ferroceenderivaten wordt uitgedaagd door nevenreacties en de vorming van dimere en polymere species gevormd bij intermoleculaire verknoping. 47 echter koppelingschemie produceren van een amidebinding is de meest directe route naar eenvoudige derivaten van ferroceen met biologische componenten bieden peptiden en hun metabolieten. Daarom kan vastefasetechnieken eerst ontwikkeld in de jaren 1950 door Merrifield voor peptidesynthese worden toegepast organometallische verbindingen die ferroceen. Door het gebruik van de orthogonaal gesubstitueerde 1'-Fmoc-amino-ferroceen-1-carbonzuur molecuul, een ferroceen systeem dat een receptor groep (biotine), elektrochemische uitlezing (ferroceen), en immobiliseren-linker component (cysteine) kan bevatten, geconstrueerd en hierin beschreven. De synthese van deze bio-conjugaat wordt besproken, evenals bewijs voor immobilisatie op een gouden ondergrond. Dit werk vertegents de eerste presentatie van een systeem dat bestaat uit biotine, ferroceen en een aminozuur voor immobilisatie op een gouden oppervlak.

Protocol

1. Synthese van biotine-Fc-cysteïne (1) Vaste fase methoden produceren hars-gebonden 1. Plaats biotine geladen hars (250 mg, 0.145 mmol) in een gefrit spuit en zwellen van de hars door het opstellen dimethylformamide (5 ml) en schudden van de spuit op een lab schudder gedurende 20 min. Verdrijf de oplossing en herhaal dimethylformamide zwelling nog een keer. Verwijder de Fmoc beschermende groep door toevoeging van 4-6 ml 20% piperidine in dimethylformamide om de injectiesp…

Representative Results

De hars gebonden vorm 1 wordt getoond in figuur 2. De covalente hechting van het ferroceen component ontstaat een oranje tint aan de harskorrels die persistent met continuwassen en indicatief van een geïmmobiliseerd ijzerhoudend complex tegenover ijzerabsorptie door PEG component van de harsparel. De hars- vorm 1 is identiek in kleur aan de harskorrels. Na verwijdering van de verbinding uit de hars kralen, de zuiverheid en opbrengst (68%) als gevolg van de methode is v…

Discussion

De synthese van asymmetrische ferroceenderivaten is een uitdaging in oplossing. Pogingen produceren 1 in oplossing resulteerde in een lage opbrengst van het gewenste product (minder dan 20%). Ook reacties gebruikmaking 1'-amino-ferroceencarbonzuur (sans Fmoc) en hars gebonden biotine resulteerde in onoplosbaar product in overeenstemming met het gepolymeriseerde product gerapporteerd door Baristic et al. en minimale artikel. 47 Dit wordt verder gecompliceerd door ferrocee…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

KG werd gesteund door de RA Welch Stichting subsidie ​​P-1760, TCU Andrews Instituut voor Wiskunde & Science Education (KG), TCU Onderzoek en Creativiteit Activity Grant (KG) en TCU SERC Grant (tot JHS).

Materials

Biotin Novatag Resin NovaBiochem 8550510001
TORVIQ 10ML LUER LOCK FRITTED SYRINGE Fisher NC9299151
piperdine Acros P/3520/PB05
ninhydrin test Sigma-Aldrich 60017-1ea
1’-Fmoc-amino-ferrocene-1-carboxylic acid Omm Scientific Special Order
1-​Hydroxybenzotriazole hydrate Sigma-Aldrich 157260-25G
N,N′-Diisopropylcarbodiimide Sigma-Aldrich D125407-5G
N,N-​Diisopropylethylamine Sigma-Aldrich 496219-100ML
Fmoc-Cys(Trt)-OH Novabiochem 8520080025
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich T5408
1,2-ethanedithiol Sigma-Aldrich 2930
triisopropyl silane Sigma-Aldrich 233781
Eppendorf tubes (20 mL) any source
methanol any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
dichloromethane any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
dimethylformamide any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
centrifuge any source

Referências

  1. Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
  2. Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. . Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , (2014).
  3. Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R. Highly sensitive electrochemical detection of immunospecies based on combination of Fc label and PPD film/gold nanoparticle amplification. Biosens Bioelectron. 24 (1), 129-135 (2008).
  4. Gobi, K. V., Mizutani, F. Layer-by-layer construction of an active multilayer enzyme electrode applicable for direct amperometric determination of cholesterol. Sensors and Actuators. 80 (3), 272-277 (2001).
  5. Gobi, K. V., Mizutani, F. Amperometric detection of superoxide dismutase at cytochrome c-immobilized electrodes: Xanthine oxidase and ascorbate oxidase incorporated biopolymer membrane for in-vivo analysis. Analytical Sciences. 17 (1), 11-15 (2001).
  6. Gobi, K. V., Sato, Y., Mizutani, F. Mediatorless superoxide dismutase sensors using cytochrome c-modified electrodes: Xanthine oxidase incorporated polyion complex membrane for enhanced activity and in vivo analysis. Electroanalysis. 13 (5), 397-403 (2001).
  7. Shankaran, D. R., Uehara, N., Kato, T. A metal dispersed sol-gel biocomposite amperometric glucose biosensor. Biosensor.., & Bioelectronics. 18 (5-6), 721-728 (2003).
  8. Yamamoto, K., Xu, F., Shi, G. Y., Kato, T. On-line biosensor for detection of glucose, choline and glutamate simultaneously integrated with microseparation system. Journal of Pharmacological Sciences. 91, 211p-211 (2003).
  9. Luppa, P. B., Kaiser, T., Cuilleron, C. Y. Ligand-binding studies of sex hormone-binding globulin with 17alpha-dihydrotestosterone derivatives as ligands using a surface plasmon resonance biosensor. Clinical Chemistry. 47 (6), A9-A9 (2001).
  10. Luppa, P. B., Sokoll, L. J., Chan, D. W. Immunosensors – principles and applications to clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 314 (1-2), 1-26 (2001).
  11. Mallat, E., Barcelo, D., Barzen, C., Gauglitz, G., Abuknesha, R. Immunosensors for pesticide determination in natural waters. Trac-Trends in Analytical Chemistry. 20 (3), 124-132 (2001).
  12. Pemberton, R. M., Hart, J. P., Mottram, T. T. An electrochemical immunosensor for milk progesterone using a continuous flow system. Biosensor.., & Bioelectronics. 16 (9-12), 715-723 (2001).
  13. Pancrazio, J. J., Whelan, J. P., Borkholder, D. A., Ma, W., Stenger, D. A. Development and application of cell-based biosensors. Annals of Biomedical Engineering. 27 (6), 697-711 (1999).
  14. May, K. M. L., Wang, Y., Bachas, L. G., Anderson, K. W. Development of a whole-cell-based biosensor for detecting histamine as a model toxin. Analytical Chemistry. 76 (14), 4156-4161 (2004).
  15. Taylor, C. J., Bain, L. A., Richardson, D. J., Spiro, S., Russell, D. A. Construction of a whole-cell gene reporter for the fluorescent bioassay of nitrate. Analytical Biochemistry. 328 (1), 60-66 (2004).
  16. Philp, J. C., et al. Whole cell immobilised biosensors for toxicity assessment of a wastewater treatment plant treating phenolics-containing waste. Analytica Chimica Acta. 487 (1), 61-74 (2003).
  17. Subrahmanyam, S., Piletsky, S. A., Turner, A. P. F. Application of natural receptors in sensors and assays. Analytical Chemistry. 74 (16), 3942-3951 (2002).
  18. Ryberg, E., et al. Identification and characterisation of a novel splice variant of the human CB1 receptor. Febs Letters. 579 (1), 259-264 (2005).
  19. Cooper, M. A. Advances in membrane receptor screening and analysis. Journal of Molecular Recognition. 17 (4), 286-315 (2004).
  20. Kumbhat, S., et al. A novel receptor-based surface-plasmon-resonance affinity biosensor for highly sensitive and selective detection of dopamine. Chemistry Letters. 35 (6), 678-679 (1246).
  21. Yemini, M., Reches, M., Gazit, E., Rishpon, J. Peptide nanotube-modified electrodes for enzyme-biosensor applications. Analytical Chemistry. 77 (16), 5155-5159 (2005).
  22. Endo, T., Kerman, K., Nagatani, N., Takamura, Y., Tamiya, E. Label-free detection of peptide nucleic acid-DNA hybridization using localized surface plasmon resonance based optical biosensor. Analytical Chemistry. 77 (21), 6976-6984 (2005).
  23. Drummond, T. G., Hill, M. G., Barton, J. K. Electrochemical DNA sensors. Nature Biotechnology. 21 (10), 1192-1199 (2003).
  24. Piunno, P. A. E., Krull, U. J. Trends in the development of nucleic acid biosensors for medical diagnostics. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 381 (5), 1004-1011 (2005).
  25. Dechtrirat, D., et al. Electrochemical displacement sensor based on ferrocene boronic acid tracer and immobilized glycan for saccharide binding proteins and E. coli. Biosensor.., & Bioelectronics. 58, 1-8 (2014).
  26. Lacina, K., et al. Combining ferrocene, thiophene and a boronic acid: a hybrid ligand for reagentless electrochemical sensing of cis-diols. Tetrahedron Letters. 55 (21), 3235-3238 (2014).
  27. Takahashi, S., Anzai, J. Recent Progress in Ferrocene-Modified Thin Films and Nanoparticles for Biosensors. Materials. 6 (12), 5742-5762 (2013).
  28. Liu, L., et al. Amplified voltammetric detection of dopamine using ferrocene-capped gold nanoparticle/streptavidin conjugates. Biosensor.., & Bioelectronics. 41, 730-735 (2013).
  29. Shankaran, D. R., Gobi, K. V. A., Miura, N. Recent advancements in surface plasmon resonance immunosensors for detection of small molecules of biomedical, food and environmental interest. Sensors and Actuators B-Chemical. 121 (1), 158-177 (2007).
  30. Szarka, Z., Kuik, &. #. 1. 9. 3. ;., Skoda-Földes, R., Kollár, L. Aminocarbonylation of 1,1′-diiodoferrocene, two-step synthesis of heterodisubstituted ferrocene derivatives via homogeneous catalytic carbonylation/coupling reactions. Journal of Organometallic Chemistry. 689 (17), 2770-2775 (2004).
  31. Niu, H. T., et al. Imidazolium-based macrocycles as multisignaling chemosensors for anions. Dalton Trans. (28), 3694-3700 (2008).
  32. Qing, G. -. Y., Sun, T. -. L., Wang, F., He, Y. -. B., Yang, X. Chromogenic Chemosensors forN-Acetylaspartate Based on Chiral Ferrocene-Bearing Thiourea Derivatives. European Journal of Organic Chemistry. (6), 841-849 (2009).
  33. Romero, T., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A multiresponsive two-arm ferrocene-based chemosensor molecule for selective detection of mercury. Dalton Trans. (12), 2121-2129 (2009).
  34. Zapata, F., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A selective redox and chromogenic probe for Hg(II) in aqueous environment based on a ferrocene-azaquinoxaline dyad. Inorg Chem. 48 (24), 11566-11575 (2009).
  35. Alfonso, M., Tarraga, A., Molina, P. Ferrocene-based multichannel molecular chemosensors with high selectivity and sensitivity for Pb(II) and Hg(II) metal cations. Dalton Trans. 39 (37), 8637-8645 (2010).
  36. Zapata, F., Caballero, A., Molina, P., Tarraga, A. A ferrocene-quinoxaline derivative as a highly selective probe for colorimetric and redox sensing of toxic mercury(II) cations. Sensors (Basel). 10 (12), 11311-11321 (2010).
  37. Thakur, A., Sardar, S., Ghosh, S. A highly selective redox, chromogenic, and fluorescent chemosensor for Hg2+ in aqueous solution based on ferrocene-glycine bioconjugates). Inorg Chem. 50 (15), 7066-7073 (2011).
  38. Sathyaraj, G., Muthamilselvan, D., Kiruthika, M., Weyhermüller, T., Nair, B. U. Ferrocene conjugated imidazolephenols as multichannel ditopic chemosensor for biologically active cations and anions. Journal of Organometallic Chemistry. 716, 150-158 (2012).
  39. Kwon, S. J., Kim, E., Yang, H., Kwak, J. An electrochemical immunosensor using ferrocenyl-tethered dendrimer. Analyst. 131 (3), 402-406 (2006).
  40. Pinto, A., Hoffmanns, U., Ott, M., Fricker, G., Metzler-Nolte, N. Modification with Organometallic Compounds Improves Crossing of the Blood-Brain Barrier of [Leu(5)]-Enkephalin Derivatives in an In Vitro Model System. Chembiochem. 10 (11), 1852-1860 (2009).
  41. Barisic, L., et al. The first ferrocene analogues of muramyldipeptide. Carbohydr Res. 346 (5), 678-684 (2011).
  42. Brusoski, K., Green, K. N. Novel click derivatives of ferrocene and their applications toward construction of electrochemical biosensors. Abstracts of Papers, 243rd ACS National Meetin.., & Exposition. , (2012).
  43. Bucher, C., Devillers, C. H., Moutet, J. -. C., Royal, G., Saint-Aman, E. Anion recognition and redox sensing by a metalloporphyrin–ferrocene–alkylammonium conjugate. New Journal of Chemistry. 28, 1584-1589 (2004).
  44. Tanaka, S., Yoshida, K., Kuramitz, H., Sugawara, K., Nakamura, H. Electrochemical detection of biotin using an interaction between avidin and biotin labeled with ferrocene at a perfluorosulfonated ionomer modified electrode. Analytical Sciences. 15 (9), 863-866 (1999).
  45. Real-Fernandez, F., et al. Ferrocenyl glycopeptides as electrochemical probes to detect autoantibodies in multiple sclerosis patients’ sera. Biopolymers. 90 (4), 488-495 (2008).
  46. Husken, N., Gasser, G., Koster, S. D., Metzler-Nolte, N. Four-potential’ ferrocene labeling of PNA oligomers via click chemistry. Bioconjug Chem. 20 (8), 1578-1586 (2009).
  47. Barisic, L. . Croatica Chemica Acta. 75, 199-210 (2002).
  48. Kirin, S. I., Noor, F., Metzler-Nolte, N. Manual Solid-Phase Peptide Synthesis of Metallocene–Peptide Bioconjugates. Journal of Chemical Education. 84 (1), 108-111 (2007).
  49. Barisic, L., et al. Helically chiral ferrocene peptides containing 1 ‘-aminoferrocene-1-carboxylic acid subunits as turn inducers. Chemistry-a European Journal. 12 (19), 4965-4980 (2006).
  50. Mahmoud, K., Long, Y. -. T., Schatte, G., Kraatz, H. -. B. Electronic communication through the ureylene bridge: spectroscopy, structure and electrochemistry of dimethyl 1′,1′-ureylenedi(1-ferrocenecarboxylate). Journal of Organometallic Chemistry. 689 (13), 2250-2255 (2004).
  51. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. Synthesis and electrochemical investigation of oligomeric ferrocene amides: Towards ferrocene polyamides. Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials. 16 (3), 201-210 (2006).
  52. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. A bioorganometallic approach for the electrochemical detection of proteins: A study on the interaction of ferrocene-peptide conjugates with papain in solution and on au surfaces. Chemistry-a European Journal. 13 (20), 5885-5895 (2007).
check_url/pt/52399?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Scarborough, J. H., Gonzalez, P., Rodich, S., Green, K. N. Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology. J. Vis. Exp. (97), e52399, doi:10.3791/52399 (2015).

View Video