Summary

Syntetisk Methodology for Asymmetric Ferrocene Avledet Bio-konjugerte systemer via Solid Phase Resin-basert metode

Published: March 12, 2015
doi:

Summary

The synthesis of asymmetric species of ferrocene is challenging using solution techniques. This report focuses on the methods carried out to produce a ferrocene-biotin bioconjugate using facile and clean reactions accomplished via solid-phase synthesis. Incorporation of a thiolate moiety is shown to impart the ability for immobilization on gold surfaces.

Abstract

Tidlig påvisning er nøkkelen til vellykket behandling av de fleste sykdommer, og er spesielt viktig for diagnostisering og behandling av mange typer kreft. De mest vanlige teknikker benyttes er tenkelig modaliteter som Magnetic Resonance Imaging (MRI), Positron Emission Topografi (PET), og computertomografi Topografi (CT) og er optimal for å forstå den fysiske strukturen av sykdommen, men kan kun utføres én gang hver fjerde til seks uker på grunn av bruk av kontrastmidler og totalkostnad. Med dette i bakhodet, utvikling av "point of care" teknikker, slik som biosensorer, som evaluerer den fasen av sykdom og / eller effekt av behandling i behandlerens kontor og gjøre det på en riktig måte, ville revolusjonere behandlingsprotokoller. 1 som et middel for å utforske ferrocen basert biosensorer for påvisning av biologisk relevante molekyler 2, ble metoder utviklet for å produsere ferrocen-biotin bio-konjugater som er beskrevet her. Denne rapporten vil fokusere på en biotin-ferrocen-cystein system som kan bli immobilisert på en gulloverflate.

Introduction

Biosensorer er små enheter som benytter biomolekylære anerkjennelse teknologi som plattform for selektiv analyse og benyttes for deres spesifisitet, hastighet og lave kostnader. Elektrokjemiske biosensorer for påvisning av biomolekyler er i forkant av dette feltet på grunn av sin enkelhet, kostnadseffektivitet, og høy følsomhet. 1,3 Den generelle anatomi av disse sensorene er en elektrode utstyrt med en anerkjennelse molekyl spesifikt for biologisk markør av interesse . Binding av biomarkør av erkjennelsen molekylet resulterer i en lokal endring av potensialet eller strøm som kan påvises ved en enkel måling. Hittil anerkjennelse delen kan variere fra enzymer, 4-8 antistoffer, 9-12 hele celler, 13-16 reseptorer, 17-20 peptider 21-23 og DNA-24 og har i stor grad fokusert på større, biologiske molekyler. 25-28 Forskning innsats i denne arenaen har hovedsakelig konsentrert på immunosensors Where et immunoglobulin er immobilisert med en redoks-aktiv kjerne (slik som ferrocen) og brukes til å påvise et antistoff av interesse. Disse studiene har vært ekskludert fra kliniske applikasjoner på grunn av dårlig presisjon og tidsforbruk som stammer fra de komplikasjoner som følge av bruk av antigen / antistoff. 1,3 Økende oppmerksomhet har fokusert på deteksjon av små molekyler (mindre enn 1 kg / mol) av biomedisinsk , mat og miljø interesse i tillegg til nasjonal sikkerhet. 29 De mest kjente eksemplene på biosensor enheter er selvtest glukose skjermer, som har skjermen trykkes enzym elektroder koblet til en lomme-størrelse amperometrisk meter. Disse systemene benytter vanligvis en kolometrisk metode, hvor den totale mengden av ladning som genereres av glukose oksidasjonsreaksjonen måles over en tidsperiode. Salgbare enheter må være bærbar, robust og håndholdt å gjøre bruk lettvinte for befolkningen for øvrig.

Redox koder som ferrocentilsats er necessary for å gi den elektrokjemiske deteksjon av biomarkører eller små molekyler i løsning som de fleste biomarkører er ikke egentlig elektrokjemisk aktive. 30-38 Ferrocene er en organometallisk molekyl som er en gullstandard for elektrokjemi, noe som gjør det til et utmerket valg for integrering i elektrokjemiske biosensorer. Ferrocene baserte redokse arter har allerede fått stor oppmerksomhet på grunn av sin lille størrelse, god stabilitet, praktisk syntetisk tilgang, enkel kjemisk modifisering, relativ lipofilitet, og enkel Redox tuning. 3,30-42 Små molekyler basert på ferrocen kjerne har blitt brukt mye som detektorer av metallioner og små molekyler. 32-38,43 Systems målretting større arter som biomolekyler har brukt å feste store antistoffer eller immunglobuliner til ferrocene derivater som er innebygd på en elektrokjemisk overflate. 1,3,39 , 44 I hvert tilfelle er potensialet og strømmen intensity til Fe III / Fe-II-redoks-par ble endret ved molekylær kobling, og dermed produsere en ny spektroskopisk håndtak som indikerer tilstedeværelse av analytten molekylet. Denne endringen oppstår fra den omfattende overlapping som oppstår mellom pi-system av syklopentadienyl-ringer og jern d-orbitaler. Hvis pi-systemet blir endret, dvs. derivatisert eller omsatt, deretter orbital interaksjonen vil, i sin tur, endring. Dette vil påvirke Fe kjernen og kan observeres som en endring i potensialet av Fe III / Fe-II-par. 40,45,46 Disse egenskapene gjør et slikt system attraktiv for bruk som en kvantifisering middel i en elektrokjemisk immunologisk eller biosensor.

For å frem ferrocen holdige systemer som er spesifikke for biosensor kapasiteter er det optimalt å modifisere en Cp-ring med bio-reseptoren spesifikk for et målmolekyl, og benytte den andre Cp-ringen som molekyl fortøyningen til den elektrokjemiske avlesning eller elekroden (Figur 1). Syntese av disse asymmetriske ferrocen-derivater er utfordret av sidereaksjoner og dannelse av dimere og polymere arter dannet ved intermolekylær kryssbinding. 47 Imidlertid er koplingskjemi fremstilling av en amidbinding den mest direkte vei for å tilveiebringe enkle derivater av ferrocen involverer biologiske komponenter slike som peptider og deres metabolitter. Derfor kan fastfaseteknikker først utviklet i 1950 av Merrifield for peptidsyntese påføres på metallorganiske forbindelser som inneholder ferrocen. Gjennom bruk av den ortogonalt substituert 1'-Fmoc-amino-ferrocen-1-karboksylsyre-molekyl, en ferrocen-system som kan inneholde en reseptor-del (biotin), elektrokjemisk avlesning (ferrocen), og immobiliserende-sammenkoblende komponent (cystein) har blitt konstruert og beskrevet heri. Syntesen av denne bio-konjugat er omtalt, så vel som bevis for immobilisering på en gulloverflate. Dette arbeidet representantenets første presentasjon av et system bestående av biotin, ferrocen og en aminosyre etter immobilisering på en gulloverflate.

Protocol

1. Syntese av biotin-Fc-cystein (1) Fastfase-metoder for å fremstille harpiks-bundet en. Plasser biotin lastet resin (250 mg, 0,145 mmol) i en frittet sprøyte og svelle harpiksen ved å tegne opp dimetylformamid (5 ml) og risting av sprøyten på en laboratorierister i 20 min. Utdriving av oppløsningen og gjenta dimetylformamid svelling en gang til. Fjern den Fmoc-beskyttende gruppe ved tilsetning av 4-6 ml 20% piperidin i dimetylformamid i sprøyten, etterfulgt av 10-15…

Representative Results

Harpiksen bundet form av en er vist i figur 2. Den kovalente binding av ferrocen komponent gir opphav til en oransje farge i harpiksperlene som er vedvarende med kontinuerlig vasking og indikativ for en immobilisert jernholdige kompleks i motsetning til jern absorpsjon av PEG-komponenten i harpiksperle. Harpiksen frie form av en identisk i fargen til harpikskulene. Etter fjerning av forbindelsen fra den harpiksperler, er renheten og utbytte (68%) som følge av de metode…

Discussion

Syntesen av asymmetriske ferrocene derivater er utfordrende i løsningen. For eksempel har forsøk på å fremstille pt i oppløsning resulterte i lave utbytter av det ønskede produkt (mindre enn 20%). Likeledes reaksjoner som anvender 1'-amino-ferrocen karboksylsyre (sans Fmoc) og harpiks bundet biotin resulterte i uoppløselig produkt i samsvar med den polymeriserte produkt er rapportert av Baristic et al. og minimal produkt. 47 Dette blir ytterligere komplisert ved f…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

KG ble støttet av RA Welch Foundation stipend P-1760, TCU Andrews Institute of Mathematics & Science Education (til KG), TCU Forskning og kreativitet aktivitet Grant (til KG) og TCU SERC Grant (til JHS).

Materials

Biotin Novatag Resin NovaBiochem 8550510001
TORVIQ 10ML LUER LOCK FRITTED SYRINGE Fisher NC9299151
piperdine Acros P/3520/PB05
ninhydrin test Sigma-Aldrich 60017-1ea
1’-Fmoc-amino-ferrocene-1-carboxylic acid Omm Scientific Special Order
1-​Hydroxybenzotriazole hydrate Sigma-Aldrich 157260-25G
N,N′-Diisopropylcarbodiimide Sigma-Aldrich D125407-5G
N,N-​Diisopropylethylamine Sigma-Aldrich 496219-100ML
Fmoc-Cys(Trt)-OH Novabiochem 8520080025
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich T5408
1,2-ethanedithiol Sigma-Aldrich 2930
triisopropyl silane Sigma-Aldrich 233781
Eppendorf tubes (20 mL) any source
methanol any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
dichloromethane any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
dimethylformamide any source dry with molecular sieves prior to use & store in 100 mL media bottle for easy usage.
centrifuge any source

Referências

  1. Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
  2. Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. . Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , (2014).
  3. Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R. Highly sensitive electrochemical detection of immunospecies based on combination of Fc label and PPD film/gold nanoparticle amplification. Biosens Bioelectron. 24 (1), 129-135 (2008).
  4. Gobi, K. V., Mizutani, F. Layer-by-layer construction of an active multilayer enzyme electrode applicable for direct amperometric determination of cholesterol. Sensors and Actuators. 80 (3), 272-277 (2001).
  5. Gobi, K. V., Mizutani, F. Amperometric detection of superoxide dismutase at cytochrome c-immobilized electrodes: Xanthine oxidase and ascorbate oxidase incorporated biopolymer membrane for in-vivo analysis. Analytical Sciences. 17 (1), 11-15 (2001).
  6. Gobi, K. V., Sato, Y., Mizutani, F. Mediatorless superoxide dismutase sensors using cytochrome c-modified electrodes: Xanthine oxidase incorporated polyion complex membrane for enhanced activity and in vivo analysis. Electroanalysis. 13 (5), 397-403 (2001).
  7. Shankaran, D. R., Uehara, N., Kato, T. A metal dispersed sol-gel biocomposite amperometric glucose biosensor. Biosensor.., & Bioelectronics. 18 (5-6), 721-728 (2003).
  8. Yamamoto, K., Xu, F., Shi, G. Y., Kato, T. On-line biosensor for detection of glucose, choline and glutamate simultaneously integrated with microseparation system. Journal of Pharmacological Sciences. 91, 211p-211 (2003).
  9. Luppa, P. B., Kaiser, T., Cuilleron, C. Y. Ligand-binding studies of sex hormone-binding globulin with 17alpha-dihydrotestosterone derivatives as ligands using a surface plasmon resonance biosensor. Clinical Chemistry. 47 (6), A9-A9 (2001).
  10. Luppa, P. B., Sokoll, L. J., Chan, D. W. Immunosensors – principles and applications to clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 314 (1-2), 1-26 (2001).
  11. Mallat, E., Barcelo, D., Barzen, C., Gauglitz, G., Abuknesha, R. Immunosensors for pesticide determination in natural waters. Trac-Trends in Analytical Chemistry. 20 (3), 124-132 (2001).
  12. Pemberton, R. M., Hart, J. P., Mottram, T. T. An electrochemical immunosensor for milk progesterone using a continuous flow system. Biosensor.., & Bioelectronics. 16 (9-12), 715-723 (2001).
  13. Pancrazio, J. J., Whelan, J. P., Borkholder, D. A., Ma, W., Stenger, D. A. Development and application of cell-based biosensors. Annals of Biomedical Engineering. 27 (6), 697-711 (1999).
  14. May, K. M. L., Wang, Y., Bachas, L. G., Anderson, K. W. Development of a whole-cell-based biosensor for detecting histamine as a model toxin. Analytical Chemistry. 76 (14), 4156-4161 (2004).
  15. Taylor, C. J., Bain, L. A., Richardson, D. J., Spiro, S., Russell, D. A. Construction of a whole-cell gene reporter for the fluorescent bioassay of nitrate. Analytical Biochemistry. 328 (1), 60-66 (2004).
  16. Philp, J. C., et al. Whole cell immobilised biosensors for toxicity assessment of a wastewater treatment plant treating phenolics-containing waste. Analytica Chimica Acta. 487 (1), 61-74 (2003).
  17. Subrahmanyam, S., Piletsky, S. A., Turner, A. P. F. Application of natural receptors in sensors and assays. Analytical Chemistry. 74 (16), 3942-3951 (2002).
  18. Ryberg, E., et al. Identification and characterisation of a novel splice variant of the human CB1 receptor. Febs Letters. 579 (1), 259-264 (2005).
  19. Cooper, M. A. Advances in membrane receptor screening and analysis. Journal of Molecular Recognition. 17 (4), 286-315 (2004).
  20. Kumbhat, S., et al. A novel receptor-based surface-plasmon-resonance affinity biosensor for highly sensitive and selective detection of dopamine. Chemistry Letters. 35 (6), 678-679 (1246).
  21. Yemini, M., Reches, M., Gazit, E., Rishpon, J. Peptide nanotube-modified electrodes for enzyme-biosensor applications. Analytical Chemistry. 77 (16), 5155-5159 (2005).
  22. Endo, T., Kerman, K., Nagatani, N., Takamura, Y., Tamiya, E. Label-free detection of peptide nucleic acid-DNA hybridization using localized surface plasmon resonance based optical biosensor. Analytical Chemistry. 77 (21), 6976-6984 (2005).
  23. Drummond, T. G., Hill, M. G., Barton, J. K. Electrochemical DNA sensors. Nature Biotechnology. 21 (10), 1192-1199 (2003).
  24. Piunno, P. A. E., Krull, U. J. Trends in the development of nucleic acid biosensors for medical diagnostics. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 381 (5), 1004-1011 (2005).
  25. Dechtrirat, D., et al. Electrochemical displacement sensor based on ferrocene boronic acid tracer and immobilized glycan for saccharide binding proteins and E. coli. Biosensor.., & Bioelectronics. 58, 1-8 (2014).
  26. Lacina, K., et al. Combining ferrocene, thiophene and a boronic acid: a hybrid ligand for reagentless electrochemical sensing of cis-diols. Tetrahedron Letters. 55 (21), 3235-3238 (2014).
  27. Takahashi, S., Anzai, J. Recent Progress in Ferrocene-Modified Thin Films and Nanoparticles for Biosensors. Materials. 6 (12), 5742-5762 (2013).
  28. Liu, L., et al. Amplified voltammetric detection of dopamine using ferrocene-capped gold nanoparticle/streptavidin conjugates. Biosensor.., & Bioelectronics. 41, 730-735 (2013).
  29. Shankaran, D. R., Gobi, K. V. A., Miura, N. Recent advancements in surface plasmon resonance immunosensors for detection of small molecules of biomedical, food and environmental interest. Sensors and Actuators B-Chemical. 121 (1), 158-177 (2007).
  30. Szarka, Z., Kuik, &. #. 1. 9. 3. ;., Skoda-Földes, R., Kollár, L. Aminocarbonylation of 1,1′-diiodoferrocene, two-step synthesis of heterodisubstituted ferrocene derivatives via homogeneous catalytic carbonylation/coupling reactions. Journal of Organometallic Chemistry. 689 (17), 2770-2775 (2004).
  31. Niu, H. T., et al. Imidazolium-based macrocycles as multisignaling chemosensors for anions. Dalton Trans. (28), 3694-3700 (2008).
  32. Qing, G. -. Y., Sun, T. -. L., Wang, F., He, Y. -. B., Yang, X. Chromogenic Chemosensors forN-Acetylaspartate Based on Chiral Ferrocene-Bearing Thiourea Derivatives. European Journal of Organic Chemistry. (6), 841-849 (2009).
  33. Romero, T., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A multiresponsive two-arm ferrocene-based chemosensor molecule for selective detection of mercury. Dalton Trans. (12), 2121-2129 (2009).
  34. Zapata, F., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A selective redox and chromogenic probe for Hg(II) in aqueous environment based on a ferrocene-azaquinoxaline dyad. Inorg Chem. 48 (24), 11566-11575 (2009).
  35. Alfonso, M., Tarraga, A., Molina, P. Ferrocene-based multichannel molecular chemosensors with high selectivity and sensitivity for Pb(II) and Hg(II) metal cations. Dalton Trans. 39 (37), 8637-8645 (2010).
  36. Zapata, F., Caballero, A., Molina, P., Tarraga, A. A ferrocene-quinoxaline derivative as a highly selective probe for colorimetric and redox sensing of toxic mercury(II) cations. Sensors (Basel). 10 (12), 11311-11321 (2010).
  37. Thakur, A., Sardar, S., Ghosh, S. A highly selective redox, chromogenic, and fluorescent chemosensor for Hg2+ in aqueous solution based on ferrocene-glycine bioconjugates). Inorg Chem. 50 (15), 7066-7073 (2011).
  38. Sathyaraj, G., Muthamilselvan, D., Kiruthika, M., Weyhermüller, T., Nair, B. U. Ferrocene conjugated imidazolephenols as multichannel ditopic chemosensor for biologically active cations and anions. Journal of Organometallic Chemistry. 716, 150-158 (2012).
  39. Kwon, S. J., Kim, E., Yang, H., Kwak, J. An electrochemical immunosensor using ferrocenyl-tethered dendrimer. Analyst. 131 (3), 402-406 (2006).
  40. Pinto, A., Hoffmanns, U., Ott, M., Fricker, G., Metzler-Nolte, N. Modification with Organometallic Compounds Improves Crossing of the Blood-Brain Barrier of [Leu(5)]-Enkephalin Derivatives in an In Vitro Model System. Chembiochem. 10 (11), 1852-1860 (2009).
  41. Barisic, L., et al. The first ferrocene analogues of muramyldipeptide. Carbohydr Res. 346 (5), 678-684 (2011).
  42. Brusoski, K., Green, K. N. Novel click derivatives of ferrocene and their applications toward construction of electrochemical biosensors. Abstracts of Papers, 243rd ACS National Meetin.., & Exposition. , (2012).
  43. Bucher, C., Devillers, C. H., Moutet, J. -. C., Royal, G., Saint-Aman, E. Anion recognition and redox sensing by a metalloporphyrin–ferrocene–alkylammonium conjugate. New Journal of Chemistry. 28, 1584-1589 (2004).
  44. Tanaka, S., Yoshida, K., Kuramitz, H., Sugawara, K., Nakamura, H. Electrochemical detection of biotin using an interaction between avidin and biotin labeled with ferrocene at a perfluorosulfonated ionomer modified electrode. Analytical Sciences. 15 (9), 863-866 (1999).
  45. Real-Fernandez, F., et al. Ferrocenyl glycopeptides as electrochemical probes to detect autoantibodies in multiple sclerosis patients’ sera. Biopolymers. 90 (4), 488-495 (2008).
  46. Husken, N., Gasser, G., Koster, S. D., Metzler-Nolte, N. Four-potential’ ferrocene labeling of PNA oligomers via click chemistry. Bioconjug Chem. 20 (8), 1578-1586 (2009).
  47. Barisic, L. . Croatica Chemica Acta. 75, 199-210 (2002).
  48. Kirin, S. I., Noor, F., Metzler-Nolte, N. Manual Solid-Phase Peptide Synthesis of Metallocene–Peptide Bioconjugates. Journal of Chemical Education. 84 (1), 108-111 (2007).
  49. Barisic, L., et al. Helically chiral ferrocene peptides containing 1 ‘-aminoferrocene-1-carboxylic acid subunits as turn inducers. Chemistry-a European Journal. 12 (19), 4965-4980 (2006).
  50. Mahmoud, K., Long, Y. -. T., Schatte, G., Kraatz, H. -. B. Electronic communication through the ureylene bridge: spectroscopy, structure and electrochemistry of dimethyl 1′,1′-ureylenedi(1-ferrocenecarboxylate). Journal of Organometallic Chemistry. 689 (13), 2250-2255 (2004).
  51. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. Synthesis and electrochemical investigation of oligomeric ferrocene amides: Towards ferrocene polyamides. Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials. 16 (3), 201-210 (2006).
  52. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. A bioorganometallic approach for the electrochemical detection of proteins: A study on the interaction of ferrocene-peptide conjugates with papain in solution and on au surfaces. Chemistry-a European Journal. 13 (20), 5885-5895 (2007).
check_url/pt/52399?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Scarborough, J. H., Gonzalez, P., Rodich, S., Green, K. N. Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology. J. Vis. Exp. (97), e52399, doi:10.3791/52399 (2015).

View Video