哺乳动物耳蜗是高度有序的复杂器官。在小鼠中，从上一天E11耳泡和发育程序完成后，将原始内耳的出现在出生后早期阶段之间，细胞信号转导的多种波和协调的基因表达的变化发生。从基本运行到顶点的蜗管的是声音探测感觉上皮尔蒂的，或器官。柯蒂氏器的发展精美控制，使得通过显影结束时，其将包括内毛细胞的单排，三排外毛细胞的散布有五排支持细胞（两列支柱细胞，三行Deiters'细胞^）1。偏离这个精确的顺序会导致听力下降，heighlighting studye的国税发起源和感官epithemlium ²的图案化的重要性。

在胚胎小鼠COCH的体外培养LEA是研究Corti器的发展机制的一个重要工具。该技术成立于1974年，并在过去的40年中，一直被用来阐明许多由感官上皮规定和Corti器建立³的机制。耳蜗是一个复杂的器官的动态发育过程;一个操作可能需要长达7天的表现^1。例如，添加GSK3β抑制剂在E13耳蜗植体培养时，最佳的潜伏期，观察该化合物的一个健壮效果为6天^4。

显影耳蜗的实时成像可以调查变化的柯蒂氏器的形态，基因表达的变化，跟踪迁移的，增殖或死亡的细胞，并允许实时观察药剂的结果的和信号的中断途径。到现在为止，住耳蜗的摄像已经主要使用共聚焦显微镜对柯蒂氏在短时间内^5-8的脏器图像的小区域进行的，但该技术具有由于外植体存活的局限性。在较长期的操作慢发育过程的影响成像，成像环境是至关重要的。典型的共焦实时成像系统采用的加湿塑料箱，它位于所述的显微镜。热和湿度，可以通过在孵育箱那里它满足显微镜台，通过接入窗，通过铰链孔，并通过围绕microscope-各部分的间隙的间隙逸出，如目标或光源。这不是最优的用于维持健康植超过两三天。

我们定义“孵化显微镜'为倒置显微镜内部的标准的CO ₂培养箱中密封，而不是在显微镜周围建造一个孵化器。孵化器显微镜前趋于实验的寿命，使得而非成像在两三天，样品可以被成像长达两周。培养箱显微镜提供用于细胞生长和分化良好的环境，以最小的干扰外植体培养物和标准控制的条件。在研究，发生在多天里，通常通过从培养箱中取出，并携带它们到一个倒置荧光显微镜诉诸成像样品，每天。虽然这种方法可以工作，从培养箱中取出盘子对其造成的敏感发展组织应力。由于除去从孵化器中的更改培养用培养基和波动的温度的酸度可导致次优的发展和不健康的组织。成象的区域在同一焦平面上，并在相同的取向，在每一个时间点是非常有挑战性的。通过利用恒温箱中的自动化系统，它能够维持健康组织，采集图像，在多个时间点，并确保在同一区域被捕获在每一帧。近年来几个集成显微镜组织培养箱被开发出来，这些不仅在临床实践^9，而且在干细胞和癌症研究^10,11是有用的。

在这里，我们提出了一个协议，用于胚胎小鼠耳蜗外植体的长期实时成像。我们使用自动显微镜系统内部的标准的CO ₂培养箱具有捕获多个样品的图像在设定的时间点的能力。该系统由一个倒置显微镜孵化器内设定的。样品被放置在一个旋转的讲台，允许多个样品的成像在每个时间点。照明，图像采集和讲台的旋转是通过的Metamorph软件操作的自动化系统控制。通过操作软件设置的成像程序，我们可以设置一个实验，运行长达TWØ周以最少的人工干预。在这个例子中我们使用两个亮场和荧光显示大规模增长和耳蜗的重排，并且具体地，prosensory区域。在该实验中，耳蜗将从Sox2的^EGFP报告小鼠解剖胚胎天E13。 在体外培养物将被建立，然后成像五天。