Здесь мы опишем протокол для синтеза магнитооптических плазмонное наночастиц с сильным магнитным моментом и сильным ближней инфракрасной (NIR) оптической плотности. Протокол также включает антитела сопряжение с наночастицами через фрагмента Fc для различных биомедицинских применений, которые требуют молекулярную специфическое нацеливание.
Магнитные и плазмонных свойства в сочетании в одном наночастицы обеспечивают синергию, которая выгодно в ряде биомедицинских приложений, включая контрастным усилением в новых магнитодвижущих методов визуализации, одновременного захвата и обнаружения циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК), и мультимодальных молекулярной визуализации в сочетании с фототермической терапии раковых клеток. Эти приложения стимулировали значительный интерес к разработке протоколов для синтеза магнитооптических плазмонное наночастиц с оптическим поглощением в ближней инфракрасной (NIR) области и сильного магнитного момента. Здесь мы представляем новый протокол для синтеза таких гибридных наночастиц, основанный на методе микроэмульсии масло-в-воде. Уникальная особенность протокола, описанного здесь является синтез магнито-плазмонное наночастиц разного размера из первичных блоков, которые также имеют магнитно-плазмонных характеристики. Такой подход позволяет получить наночастицы с высокой денплотность магнитного и плазмонных функциональных возможностей, которые равномерно распределены по всему объему наночастиц. Гибридные наночастицы могут быть легко функционализованный путем присоединения антител через фрагмента Fc оставляя часть Fab, который отвечает за связывание антигена доступные для таргетинга.
Гибридный наночастицы, состоящие из различных материалов с различными физико-химическими свойствами может открыть новые возможности в биомедицинских приложениях, включая мультимодальный молекулярной визуализации, доставка терапии и мониторинга, новой скрининга и диагностических тестов 1-3. Сочетание плазмонных и магнитных свойств в одиночной наночастицы представляет особый интерес, поскольку она обеспечивает очень сильные рассеяния и поглощения света сечения, связанные с плазмонных резонансов и отзывчивость к магнитному полю. Например, магнито-плазмонных наночастиц были использованы для увеличения контрастности в темном поле визуализации меченых клеток путем применения временной модуляции сигнала с помощью внешнего электромагнита 3-5. Совсем недавно, аналогичный принцип был применен в разработке нового изображения модальности – магнито-ФА изображений, где магнито-плазмонное наночастицы позволят большие усовершенствования контрастности и сигнал-фон крысыIO 6,7. Было также показано, что гибридные наночастицы могут быть использованы для одновременного захвата и обнаружения циркулирующих опухолевых клеток в цельной крови и в естественных 8,9. Кроме того, магнито-плазмонных наночастицы являются перспективными theranostic агенты, которые могут быть использованы для молекулярной конкретной оптической и МР-томографии в сочетании с фототермической терапии раковых клеток 10.
Несколько подходов были изучены для синтеза магнитооптических плазмонное наночастиц. Например, Ю. и соавт. Использовали разложения и окисления Fe (CO) 5 на золотых наночастиц с образованием гантелевидные бифункциональные Au-Fe 3 O 4 наночастиц 11. Ван и др. Синтезировали с золотым покрытием железа наночастиц оксида с помощью метода термического разложения 12. Некоторые другие подходы опираются на полимерным покрытием или аминов функциональных молекул на магнитных основных наночастиц с последующим осаждением AGстарый оболочки на полимерной поверхности, чтобы создать гибрид частиц 7,13. Кроме того, наночастицы оксида железа были прикреплены к золотых наностержней с помощью электростатических взаимодействий или химической реакции 14,15. Хотя эти подходы дают магнито-плазмонных наноструктур, они ставят под угрозу в некоторой степени свойства магнито-плазмонное комбинации, такие как оптический поглощения в ближней инфракрасной окне (NIR) или сильного магнитного момента оба из которых являются весьма желательно в биомедицинских применений. Например, гантели Au-Fe 3 O 4 наночастицы имеют плазмонного резонанса пик при 520 нм, что ограничивает их применение в естественных условиях в связи с высокой мутности ткани в этой области спектра. Кроме того, магнитооптические плазмонный наночастицы, полученные текущих протоколов ограничиваются только одного или нескольких 11 (менее 10) 14,15 суперпарамагнитных фрагменты (например, наночастиц оксида железа), что значительно меньше, чем можно было бы ACHieved в плотно упакованной наноструктуры. Например, плотно упакованный диаметр 60 нм сферические наночастицы могут содержать порядка тысячи 6 нм суперпарамагнит- наночастиц. Поэтому, есть большая комната для улучшения магнитных свойств гибридных наночастиц. Кроме того, некоторые из описанных выше протоколов являются относительно сложными и требуют тщательной оптимизации, чтобы избежать агрегации частиц в процессе синтеза 14,15.
Здесь мы опишем протокол для синтеза магнитооптических плазмонное наночастиц с сильным магнитным моментом и сильным NIR поглощения, что рассматриваются важнейшие ограничения текущего искусства. Синтез имеет свои истоки в масло-в-воде методом микроэмульсионной 16. Он основан на сборке наночастиц нужного размера из гораздо меньшего первичных частиц. Этот подход был успешно использован для получения наноструктур из одного материала, такие как золото, оксид железа, и полупроводниковой PRIМэри частиц 16. Мы расширили его синтеза магнито-плазмонный наночастиц, прежде всего, что делает сердцевину из оксида частиц 6 нм Диаметр золотой оболочки / железа и, затем, монтаж первичные гибридных частиц в конечном сферической наноструктуры. Сборка первичные частицы в нанокластеров не только позволяет повысить свойства составных наночастиц, таких как обеспечение более тесных магнитный момент при сохранении суперпарамагнитные свойства, но также использует преимущества взаимодействия между отдельными наночастицами создавая тем самым новые характеристики, отсутствующие из учредительных наночастиц, такие как сильный оптического поглощения в окне NIR. Этот протокол дает гибридных наночастиц с высокой плотностью магнитного и плазмонных функциональных возможностей. После первичные частицы синтезируются, наш метод по сути является простая реакция однореакторный. В целом прочность плазмонного резонанса и магнитный момент определяется число первичных частиц и имеет такие дополнительныеEfore, легко можно оптимизировать в зависимости от приложения. Кроме того, мы также разработали процедуру для антител сопряжения для гибридных наночастиц для различных биомедицинских приложений, которые требуют молекулярную специальными программами. Антитела прикрепляются через фрагмента Fc оставляя часть Fab, который отвечает за связывание антигена доступные для таргетинга.
Критические шаги в успешной синтеза магнитооптических плазмонное нанокластеров включают создание высоко монодисперсных первичной золотые оболочки / с железным сердечником наночастиц оксида и направляя самосборку первичных частиц в нанокластеров. Молярное соотношение между первич…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была частично поддержана грантами NIH R01 EB008101 и R01 CA103830.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
PYREX 50mL Round Bottom Boiling Flask with Short Neck & 24/40 [ST] Joint | Corning | 4320A-50 | Thermal decomposition reaction |
PYREX 41 x 300mm 5-Bulb Allihn Condenser with 24/40 [ST] Outer/Inner Joints | Corning | 2480-300 | Thermal decomposition reaction |
Silicone Oil | Fisher | S159-500 | Oil bath |
Hot Plate Stirrer | Corning | PC-351 | Heat the reacton with stirring function |
Thermometer | ThermoWorks | 221-092 | Measure temperature |
Iron (III) Acetylacetonate | Fisher | AC11913-0250 | Materials for primary hybrid nanoparticles synthesis |
Oleic Acid 99% | Fisher | A195-500 | |
Gold (III) Acetate | Fisher | AA3974206 | |
Hexane | Fisher | H292-1 | |
Phenyl Ether 99% | Fisher | AC13060-0025 | |
1,2-Hexadecanediol 90% | Sigma | 213748-50G | |
Oleylamine 70% | Sigma | O7805-100G | |
Sodium Dodecyl Sulfate | Fisher | BP166-100 | Cluster synthesis |
Sodium Citrate Dihydrate | Sigma | W302600 | |
Monoclonal Anti-EGF Receptor Antibody | Sigma | E2156 | Cell labeling specificity test |
Monoclonal Anti-HER2 Antibody | Sigma | AMAB90627 | Cell labeling specificity test |
Sodium Periodate | Sigma | 311448 | Oxidate Fc region of antibodies |
Dithiolaromatic PEG6-CONHNH2 | SensoPath Technologies | SPT-0014B | Heterofunctional linker for antibody conjugation to nanoclusters |
Methoxy-PEG-thiol, 5k | Creative PEGworks | PLS-604 | Passivate the remaining gold surface after antibody conjugation |
Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Unit with Ultracel-10 membrane | Millipore | UFC801008 | Protien purification |
HEPES | Sigma | H3375 | Buffer |
PBS, 1X Solution | Fisher | BP2438-20 | Buffer |
UV−vis Spectroscopy | BioTek | Synergy HT | Obtain spectrum |
Centrifuge | Eppendorf | 5810R | Separation |
Transmission Electron Microscope | FEI | TECNAI G2 F20 X-TWIN | Obtain morphology of nanostructures |
Upright microscope | Leica | DM6000 | Obtain dark-field images |
Sonicator | Branson | 1510 | Sonication |
Carbon Film 300 Mesh Grid | EMS | CF300-Cu | TEM imaging |
96-well Plate | Corning | 09-761-145 | UV-vis reading plate |