Summary

Immunotargeted的合成磁等离子团簇

Published: August 22, 2014
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Summary

在这里,我们描述了一个协议,用于合成磁等离激元纳米粒子具有较强的磁矩和强大的近红外(NIR)吸收。该协议还包括抗体缀合,以通过与Fc部分关于各种生物医学应用的需要分子特异性靶向的纳米颗粒。

Abstract

磁性和电浆特性结合在一个单一的纳米颗粒提供了协同作用是有利的,在许多生物医学应用,包括在新的磁成像方式的对比度增强,同时捕获和检测(检验中心)的循环肿瘤细胞,以及多峰分子成像结合光热治疗的癌细胞。这些应用刺激了协议的发展为合成磁电浆纳米颗粒在近红外(NIR)区域的光吸收率和较强的磁矩的显著兴趣。这里,我们提出了一种新的协议,用于合成这种杂化的纳米颗粒是基于一种油包水微乳液的方法。本文所描述的协议的独特特征是合成各种尺寸从主块也具有磁电浆特性的磁 – 等离子体激元纳米颗粒。这种方法产生的纳米颗粒具有高登sity其中在整个所述纳米颗粒体积均匀分布的磁场和等离子官能团。该混合的纳米颗粒可以通过与Fc部分离开Fab部分,它负责抗原结合可用于靶向附着的抗体很容易地官能化。

Introduction

混合纳米粒子由不同的材料具有不同的理化性质,可在医学领域的应用,包括多模式分子影像学,治疗和交付的监控,新的筛选和诊断分析1-3打开新的机会。等离激元和磁特性的单个纳米颗粒的组合是特别感兴趣的,因为它提供了与等离子体激元共振和响应相关联的磁场很强的光散射和吸收截面。例如,磁-等离子体激元纳米颗粒,使用了经由外部电磁铁3-5施加时间信号调制,以增加在标记细胞的暗场成像的对比度。磁光声成像,在磁等离激元纳米粒子能在对比度和信后台大鼠很大的改进 – 最近,类似的原则在新的成像方法的发展施加IO 6,7。它还表明,该混合纳米粒子可用于同时捕获和检测全血中和体内 8,9循环肿瘤细胞。此外,磁-等离子体激元纳米颗粒是有希望的治疗诊断剂,其可用于分子特定的光学和磁共振成像结合癌细胞10的光热治疗。

有几种方法进行了探讨合成磁等离激元纳米粒子。例如,Yu 等人利用分解和Fe(CO)的氧化5金纳米粒子,形成哑铃状的双功能金, 氧化铁纳米粒子11。等人已经用热分解方法12合成的涂覆金的氧化铁纳米颗粒。一些其他方法依赖于涂层聚合物或胺官能分子上磁心纳米颗粒随后AG的沉积旧壳到聚合物表面以产生杂种粒子7,13。此外,氧化铁纳米颗粒通过静电相互作用或发生化学反应14,15连接到金纳米棒。虽然这些方法中,得到磁 – 等离子体激元纳米结构,它们兼顾到磁电浆组合的某种程度的属性,例如光吸收在近红外(NIR)窗口或一个强大的磁力矩这两者都是在生物医学应用中是非常理想的。例如,哑铃金- 氧化铁纳米粒子在520nm处,限制其在体内的效用,由于高浊度的组织在这个光谱范围内的等离子体共振峰。此外,通过当前的协议所产生的磁-等离子体激元纳米颗粒被局限于一个11或少数(小于10),14,15超顺磁性基团( 例如 ,氧化铁纳米颗粒)是显著小于可能是ACHieved在密密麻麻的纳米结构。例如,密密麻麻的直径60纳米的球形纳米颗粒可以包含上千6纳米超顺磁性纳米颗粒的数量级上。因此,存在对于改善混合纳米粒子的磁特性有很大空间。此外,一些先前所描述的协议是相对复杂的,需要以避免合成14,15中粒子的凝集仔细优化。

在这里,我们描述了一个协议,用于合成磁等离激元纳米粒子具有较强的磁矩和强大的近红外吸收,解决了目前先进的主要限制。合成有其油包水微乳液法16渊源。它是基于来自一个更小的一次粒子的纳米粒子所需的尺寸的组件。这种方法已被成功地用于生产由单一材料的纳米结构,例如金,铁氧化物和半导体的pri玛丽颗粒16。我们扩展它来合成磁电浆纳米颗粒的通过,第一,使得6纳米直径的金壳/氧化铁芯颗粒,然后,装配主杂种颗粒进入最后的球形纳米结构。组装一次颗粒的纳米团簇,不仅使增强组分的纳米颗粒,如实现更强的磁力矩,同时保持超顺磁性的特性,但还需要单独的纳米颗粒从而形成从构成的纳米粒子不存在的新的特性,如强之间的相互作用的优点光吸收的近红外窗口。这个协议产生混合纳米粒子与磁场和等离激元的功能的高密度。后一次粒子合成出,我们的方法本质上是一个简单的单罐反应。整体的等离子体共振的强度和磁矩是由一些初级粒子和,疗法的确定安伏,可以根据用途容易地优化。此外,我们还制定了抗体偶联过程的混合纳米粒子的各种生物医学应用程序需要特定的分子靶向。抗体通过与Fc部分离开Fab部分,它负责抗原结合可用于靶向附着。

Protocol

1,仪器及玻璃制品的制备穿戴适当的防护设备, 即一个白大褂,一次性手套和护目镜。 圆底烧瓶连接到冷凝器和浸在硅油浴与温度计的温度监测。放的热量下的油浴中( 图1)的来源( 例如,热板)。使用能够测量温度高于260℃的温度计。 2,初级合成的混合磁等离激元纳米粒子使磁芯纳米粒子加入353.2毫克(1毫?…

Representative Results

甲方案为合成immunotargeted磁电浆纳米簇的示于图2,首先,磁性的Fe 3 O 4的氧化铁纳米颗粒是通过热分解法合成出。然后,一个薄约 1纳米金壳上沉积通过热分解氧化铁核心颗粒。主约 6纳米杂化的纳米颗粒作为种子,以通过利用一个油包水微乳液的方法制造磁-等离子体激元纳米团簇。纳米团簇被官能化的分子特异性靶向的单克隆抗体。 <p class="jove_content…

Discussion

在成功地合成了磁 – 等离子体激元纳米簇的关键步骤包括:拍摄高度单分散的初级金壳/氧化铁核心纳米颗粒和引导的一次粒子的自组装成纳米团簇。初级粒子和表面活性剂之间的摩尔比在确定的纳米团簇的尺寸分布中起重要作用。初级纳米颗粒的非均匀的粒度分布的磁 – 等离子体激元纳米簇组装期间导致形成大的聚集体。此外,纳米簇形成的微乳状液的方法依赖于两亲性表面活性剂:疏水性尾部…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项工作是由美国国立卫生研究院资助R01 EB008101和R01 CA103830部分支持。

Materials

Name of Material/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
PYREX 50mL Round Bottom Boiling Flask with Short Neck & 24/40 [ST] Joint Corning 4320A-50 Thermal decomposition reaction
PYREX 41 x 300mm 5-Bulb Allihn Condenser with 24/40 [ST] Outer/Inner Joints Corning 2480-300 Thermal decomposition reaction
Silicone Oil Fisher S159-500 Oil bath
Hot Plate Stirrer Corning PC-351 Heat the reacton with stirring function
Thermometer ThermoWorks 221-092 Measure temperature
Iron (III) Acetylacetonate Fisher AC11913-0250 Materials for primary hybrid nanoparticles synthesis
Oleic Acid 99% Fisher A195-500
Gold (III) Acetate Fisher AA3974206
Hexane Fisher H292-1
Phenyl Ether 99% Fisher AC13060-0025
1,2-Hexadecanediol 90% Sigma 213748-50G
Oleylamine 70% Sigma O7805-100G
Sodium Dodecyl Sulfate Fisher BP166-100 Cluster synthesis
Sodium Citrate Dihydrate Sigma W302600
Monoclonal Anti-EGF Receptor Antibody Sigma E2156 Cell labeling specificity test
Monoclonal Anti-HER2 Antibody Sigma AMAB90627 Cell labeling specificity test
Sodium Periodate Sigma 311448 Oxidate Fc region of antibodies
Dithiolaromatic PEG6-CONHNH2 SensoPath Technologies SPT-0014B Heterofunctional linker for antibody conjugation to nanoclusters
Methoxy-PEG-thiol, 5k Creative PEGworks PLS-604 Passivate the remaining gold surface after antibody conjugation
Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Unit with Ultracel-10 membrane Millipore UFC801008 Protien purification
HEPES Sigma H3375 Buffer
PBS, 1X Solution Fisher BP2438-20 Buffer
UV−vis Spectroscopy BioTek  Synergy HT Obtain spectrum
Centrifuge Eppendorf 5810R Separation
Transmission Electron Microscope FEI TECNAI G2 F20 X-TWIN Obtain morphology of nanostructures
Upright microscope Leica DM6000 Obtain dark-field images
Sonicator Branson 1510 Sonication
Carbon Film 300 Mesh Grid EMS CF300-Cu TEM imaging
96-well Plate Corning 09-761-145 UV-vis reading plate

Referências

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Citar este artigo
Wu, C., Sokolov, K. Synthesis of Immunotargeted Magneto-plasmonic Nanoclusters. J. Vis. Exp. (90), e52090, doi:10.3791/52090 (2014).

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