Aquisição de Vídeo de Alta Qualidade Digital de<em> Drosophila</em> Larvais e adultas Comportamentos de uma perspectiva lateral
Summary
Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos mutantes larvais de uma perspectiva lateral.
Abstract
Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso. As mutações genéticas que causam a disfunção do sistema nervoso muitas vezes produzem larvas viáveis e adultos que têm locomoção fenótipos defeituosos que são difíceis de descrever adequadamente com texto ou representar completamente com uma imagem fotográfica única. Atuais modos de publicação científica, no entanto, apoiar a apresentação de mídia de vídeo digital como material suplementar para acompanhar um manuscrito. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de ambos os fenótipos de Drosophila larvas e adultos a partir de uma perspectiva lateral. Vídeo de locomoção das larvas e adultos a partir de uma visão lateral é vantajosa porque permite a observação e análise das distinções sutis e variações nos comportamentos aberrantes de locomotivas. Temos utilizado com sucesso a técnica de visualizar e quantificar aberrant rastejando comportamentos em larvas de terceiro estádio, além de fenótipos e comportamentos mutantes adultos incluindo o grooming.
Introduction
A fruta comum mosca Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso 1-3. Conservação evolutiva da estrutura e função do sistema nervoso, com os seres humanos, assim como a facilidade da manipulação genética e uma vasta variedade de ferramentas genéticas torna o organismo Drosophila estreia para modelar doenças neurodegenerativas humano 4. As mutações genéticas que causam disfunção do sistema nervoso, muitas vezes resultam em larvas mutante viável e adulto de Drosophila com locomoção diminuída. Fenótipos observados no sistema nervoso mutantes defeituosos incluem taxa de locomoção, coordenação aberrante, e os movimentos espásticas em adultos, assim como os défices de contracção peristáltica da musculatura da parede do corpo, e paralisia parcial de larvas reduzida. Estes fenótipos foram explorados no desenvolvimento de telas genéticas de alto rendimento e ensaios de locomoção das larvas 5 mutante, 6 e adulto de Drosophila 7-10 destina-se a quantificar a disfunção locomoção e a identificação de genes necessários para a função do sistema nervoso. Embora essas abordagens são extremamente úteis para quantificar comportamentos locomotiva larvas e adultos, eles não conseguem transmitir informações qualitativas sobre cada comportamento aberrante específico. Por exemplo, enquanto as larvas de terceiro estádio mutante pode apresentar parâmetros de locomoção alterados em um ensaio comportamental, pode não ser claro se este é o resultado de alterações nas contrações peristálticas rítmicas durante o ciclo de rastreamento, em geral falta de coordenação ou paralisia parcial do corpo posterior musculatura da parede. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. O vídeo digital adquirido de uma perspectiva lateral, permite a observação direta e análise de distinções sutis em locomotive comportamentos de uma orientação mais informativa visão lateral.
Protocol
Representative Results
Discussion
Força Drosophila melanogaster 's como um sistema modelo para estudar a função do sistema nervoso deriva em grande parte da convergência das poderosas ferramentas genéticas disponíveis e da ampla gama de ensaios comportamentais robustos desenvolvidos. Aqui apresentamos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. Temos utilizado com sucesso esta…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer Alexandra Opie para assistência técnica e apoio, James Barton para fornecer vídeo narração e Ramona Flatz e Joellen Sweeney para aparecer no vídeo em anexo. Este trabalho foi financiado pela Fundação de Caridade MJ Murdock (Grant n º 2012205 para JED).
Materials
| Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Digital Camera Coupler (43mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58mm to 48mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
| 48mm to 43mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
| Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
| 1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette | Denville Scientific | U8650-4 |
Referências
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