神经病理性疼痛小鼠坐骨神经掴型号

协议已被批准的“科米特德ETHIQUE恩MATIERE德实验ANIMALE斯特拉斯堡”（CREMEAS）。 1。基线缩足阈值的测定允许小鼠启动测试程序之前习惯于给动物设施至少10天至2周。 习惯于小鼠到的von Frey试验的设置和于在第4部分所述的冯弗雷过程。 手术前，评估如4.3节所述的机械缩足阈值与冯弗雷细丝。注：直到至少三个稳定连续的值都为缩足阈值获得的重复在不同的日子的过程。 分配小鼠到不同的实验组，使这些基团不最初有所不同缩爪阈值。 2，手术过程的袖口Implantati上称量动物。注意：小鼠体重应超过20克以下说明的压脉袋的插入过程。 麻醉动物通过腹膜内注射4毫升/千克氯胺酮（17毫克/毫升）和甲苯噻嗪在0.9％NaCl中，它提供了大约45分钟的麻醉（2.5毫克/毫升）的混合物。 检查没有爪子反射的按捏一个后掌用的镊子，并检查没有眼睛反射的，以确保动物是完全麻醉。 从膝盖刮右腿使用电动剃须刀的臀部。 涂上保护眼部凝胶液对眼睛有棉签。 将动物在它的左侧，然后将右后肢上一个小枕头，并保持右后肢用胶带贴在枕头上。 用纱布或棉签用洗必泰和70％乙醇消毒外科领域。 使用食指发现股骨并进行大约0.5厘米的切口，平行于股骨和大约1.5mm前到股骨。 分开接近股骨两个蒸压棒的肌肉。注意事项：切勿切断肌肉。通常，肌肉层容易分离，没有任何出血和坐骨神经然后可见。如有出血，用无菌棉签吸收血液。 将下面的坐骨神经2支高压灭菌揭露其主要分支，滋润神经，用无菌的生理溶液（0.9％氯化钠）。 持有分裂PE-20聚乙烯管（袖）0.38 mm内径/1.09毫米外径，用尖棒钢的帮助和斗牛犬钳事先准备好的无菌2毫米部分。 将尖钢粘成的袖口，这将略微打开它。 用袖带侧开口，插入犬在袖带的一端，并且平行于所述压脉袋。旋转斗牛犬（180°），使其保持袖口的的相反侧的侧面开口。关闭斗牛犬，取出钢尖棒。注：旋转做是为了让持有，在袖口中的插入的最佳位置，牛头犬钳也有助于保持袖口部分开放。该模型和犬夹具的大小是该过程的这一步骤的关键。 具有第二实验者将两个支神经下，轻轻分开枝，以方便访问到坐骨神经是大约4毫米长的一段。 插入周围的坐骨神经的主要分支的2毫米袖带，开始通过插入袖带即远端周围的神经，即最接近于髋关节的一部分的犬的一部分。 轻轻合上袖带通过施加其上，用钳子2前端侧的压力，不挤或改变管的形式。把袖口，以确保其被正确关闭。 缝合剃光皮肤层的智慧ħ外科结。 把鼠标在它的左侧一个干净的家笼。保持下的加热灯，直到鼠标是清醒的。 添加额外的水，直接将一些州城在家里笼。 3，手术过程深水控制应用上述步骤2.1步骤2.9，然后按照与步骤2.15〜2.17相同的手术过程。对于假手术对照，省略步骤2.10至2.14，只有关注的袖口插入。 4。冯弗雷测试有孔将小鼠清除个别箱（7厘米×9厘米×7厘米），在光滑的不锈钢（1米×50 cm时，5毫米圆孔穿孔边框之间2.5毫米）升高的穿孔板。注：最多12只小鼠可以在此设置了可以相伴测试。手术动物可以在手术后的第二天进行测试。然而，恢复3天，建议削弱手术后超敏反应观察假手术对照。 让动物习惯于15分钟测试之前。 应用的von Frey细丝在一系列递增的势力每个后爪的足底表面。注：冯弗雷细丝塑料毛标定直径。它们是5厘米长，并固定于手持式涂胶器。的长丝应用的速度，弯曲和应用程序的持续时间的程度可以影响与此试验3中获得的阈值。与小鼠本程序中，被最经常使用的长丝的0.16，0.4，0.6，1，1.4，2，4，6，8，和10克。 应用所选择的长丝向左爪的足底面，直至灯丝只是弯曲。重复该步骤四点五十七连续次，然后做同样的右爪。一旦灯丝已经过测试，在两个爪子，测试下的动物。注意事项：避免它可以是更敏感的爪子横向边界。预期的响应是一个爪子停药，突然退缩或舔爪子。考虑到反应为阳性，如果至少有三个期望的响应被观察出五审判。一个给定的爪子总是测试三次，但第四和第五的试验完成后只有1或2的返回结果是（是）在头三个试验观察。在C57BL/6J小鼠，开始手术前的测试与1.4克长丝。手术后，开始与0.4克灯丝的测试。如果一个肯定的响应与所述第一测试灯丝观察到，在步骤4.3.2测试下的力（而不是更大）的长丝。 按照4.3.1程序应用相同的灯丝到下一个动物。一旦所有的动物进行测试，在用更大的力量下一个细丝的第一个动物重新开始。重复上述步骤，直到所有小鼠给予积极的回应。注：测试每个动物，直到连续两个灯丝给予积极的回应。考虑到较低的灯丝，给了一个肯定的答复为爪子机智克价值hdrawal门槛，这种动物。