Smakssansen gjør at et insekt å oppdage et stort spekter av løselige kjemikalier og spiller en viktig rolle i aksept av et næringsrikt stoff, eller avvisning av en skadelig eller giftig ett. Smak er også antatt å spille en rolle i mate valg, gjennom påvisning av feromoner ^1-5. Disse viktige og ulike funksjoner har gjort insekt smak systemet en overbevisende målet for etterforskningen i hvordan sansesystemer sette miljømessige signaler i relevante atferds utganger.

Den primære enhet av Drosophila melanogaster smak system er smaken hår, eller sensillum. Molekyler angi sensillum via en pore på spissen sin ^2,6. Sensilla er funnet på labellum, bena, vingen margin, og svelget ^seks. På labellum, er antallet og plasseringen av sensilla stereotyp. Det er tre klasser av morfologiske sensilla basert på lengde: den lange (L), middels (I) og korte (S ) Sensilla ^7,8. Hver sensillum inneholder enten to (I-type) eller fire (L-og S-type) gustatory reseptor nevroner (GRNs) ^9. Ulike GRNs svare på ulike kategorier av smaks stimuli: bitter, sukker, salt og osmolaritet ^7,10 og uttrykke ulike undergrupper av gustatory reseptorer ^8,11-13. Bare jeg og S-type sensilla inneholde bitre-responsive GRNs ^8,10. Den GRNs prosjektet til subesophageal ganglion (SOG) og deres aktivering ved smaks molekyler blir videresendt til høyere sentralnervesystemet for dekoding, noe som resulterer i en atferdsmessig respons ^6.. Den relativt lite antall nerveceller og amenability til molekylær og atferdsanalyse gjør Drosophila smak systemet en utmerket modell for etterforskningen av gustatory systemer generelt. Den relative enkle som systemet kan manipuleres via genetisk mutasjon eller Gal4-UAS uttrykk systemet fungerer også som et verdifullt verktøy ^14,15.

ontent "> Fordi disse sensilla stikker ut fra overflaten av labellum, de er utmerkede mål for elektrofysiologi. avfyring av GRNs kan overvåkes ved bruk av ekstracellulære opptak. Historisk sett har side-veggen opptaksmetode, som bruker en glasselektrode innsatt i sensillum å ta opp neuronal aktivitet, ²⁶ har vært i bruk. Imidlertid er denne fremgangsmåte er teknisk vanskelig å utføre, og det er vanskelig å ta for lang tid fra hvert preparat. Spissen-opptaksmetoden, som måler responsen av nervecellene med en elektrode som samtidig leverer et smaksmiddel, siden blitt metoden for valg ^9,16. det har blitt anvendt for å undersøke smak system av Drosophila melanogaster ^8,10,17,18, samt en rekke andre insektarter ^19-23. har blitt betydelig lettere ved utviklingen av tastePROBE forsterkeren, som overvant én av de store ulempene ved tip-opptaksmetoden ved å kompensere forden store potensialforskjell mellom referanseelektroden og den insekt sensillum, slik at grn aksjonspotensialer som skal tas opp uten overdreven forsterkning eller filtrering ^24. En annen viktig utvikling var bruken av tricholine citrate ettersom opptakselektrolytt ^25. TCC undertrykker svar fra osmolariteten følsomme GRN og stimulerer ikke salt-følsomme GRN, gjør responser generert av bitter og sukker Tastants mye lettere å analysere ^25.

Her beskriver vi hvordan tips innspillingen av Drosophila labellar sensilla er for tiden utføres i Carlson laboratoriet. Denne protokollen vil forklare hvordan å etablere en egnet elektrofysiologi rigg, hvordan å forberede fly, og hvordan du utfører smaks innspillinger. Vi presenterer også noen representative data innhentet ved opptak fra undergrupper av Drosophila sensilla, samt noen vanlige problemer og mulige løsninger som kan oppstå ved bruk av denneteknikk.