Het gevoel van smaak laat een insect tot een breed spectrum van oplosbare stoffen te detecteren en speelt een belangrijke rol in de acceptatie van een voedzame stof, of de afwijzing van een schadelijke of giftige een. Smaak is ook gedacht aan een rol spelen bij partnerkeuze, door de detectie van feromonen ^1-5. Deze belangrijke en diverse functies hebben het insect smaak systeem een ​​dwingende doelstelling van onderzoek naar hoe sensorische systemen vertalen omgevingsfactoren in relevante gedrags-uitgangen gemaakt.

De primaire eenheid van de Drosophila melanogaster smaak systeem is de smaak haar of sensillum. Moleculen voer de sensillum via een porie in de punt ^2,6. Sensilla zijn te vinden op de lip, de benen, de vleugel marge, en de keelholte ^6. Op de lip, is het aantal en de locatie van sensilla stereotiep. Er zijn drie klassen van morfologische sensilla basis van lengte: lange (L), tussenproduct (I) en korte (S ) Sensilla ^7,8. Elke sensillum bevat ofwel twee (I-type) of vier (L-en S-type) gustatory receptor neuronen (GRNs) ^9. Verschillende GRNs reageren op de verschillende categorieën van de smaak stimuli: bitter, suiker, zout en osmolariteit ^7,10 en express verschillende subgroepen van smaak receptoren ^8,11-13. Alleen I en S-type sensilla bevatten bitter-responsieve GRNs ^8,10. De GRNs project om de subesophageal ganglion (SOG) en hun activering door smaakmoleculen wordt doorgegeven aan de hogere centrale zenuwstelsel voor het decoderen, waardoor een gedragsreactie ^6. Het relatief kleine aantal neuronen en de ontvankelijkheid voor moleculaire en gedragsanalyse maken het Drosophila smaak systeem een uitstekend model voor het onderzoek naar smaak in het algemeen. Het relatieve gemak waarmee het systeem kan worden gemanipuleerd via genetische mutatie of de GAL4-UAS expressiesysteem dient ook als een waardevol instrument ^14,15.

NHOUD "> Omdat deze sensilla uitsteken uit het oppervlak van de lip, zij zijn uitstekende doelwitten voor elektrofysiologie. het afvuren van de GRNs kan gevolgd worden met extracellulaire. Historisch de zijwand opnamemethode met een glazen elektrode ingebracht in de gebruik sensillum neuronale activiteit opnemen, ²⁶ is gebruikt. Deze methode is technisch moeilijk uit te voeren, en het is lastig om vele van elk preparaat. Het uiteinde-opnamemethode, waarbij de reactie van de neuronen meet met een elektrode die tegelijkertijd levert tastant, sinds de voorkeursmethode ^9,16 geworden. Het is gebruikt om de smaak stelsel van Drosophila melanogaster ^8,10,17,18 en een aantal andere insectensoorten ^19-23 onderzoeken. Het is sterk vergemakkelijkt door de ontwikkeling van de tastePROBE versterker, die een van de belangrijkste nadelen van de tip-opnamemethode overwonnen door te compenseren voorhet grote potentiaalverschil tussen de referentie-elektrode en het insect sensillum, waardoor de GRN actiepotentialen op te nemen zonder al te veel versterking of filtering ^24. Een andere belangrijke ontwikkeling was het gebruik van tricholine citraat als de opname elektrolyt ^25. TCC onderdrukt reacties van de osmolariteit-gevoelige GRN en niet het stimuleren van het zout-gevoelige GRN, waardoor reacties gegenereerd door bittere en suiker tastants veel gemakkelijker te analyseren ^25.

Hier beschrijven we hoe tip opname van Drosophila labellar sensilla momenteel wordt uitgevoerd in de Carlson laboratorium. Dit protocol zal uitleggen hoe je een geschikte elektrofysiologie rig, hoe de vlieg te bereiden, en hoe je smaak opnamen uit te voeren vast te stellen. Presenteren we ook enkele representatieve gegevens verkregen door het opnemen van deelverzamelingen van Drosophila sensilla, evenals enkele veelvoorkomende problemen en mogelijke oplossingen die zich kunnen voordoen bij het ​​gebruik van dezetechniek.