После в режиме реального времени Влияние пневмококковой факторов вирулентности в острой Mouse пневмонии Модель Использование биолюминесцентных бактерии

Инфекции дыхательных путей, вызванных вирусами или бактериями остаются одним из наиболее распространенных внебольничных или клинических проблем по всему миру, вызывая примерно одну треть всех смертей в мире. Ключевые виды бактерий являются гемофильной и пневмококк ^2. Однако эти виды бактерий, как правило, общие компоненты природной флоры дыхательных путей. Таким образом бактериальная каретки также определенного риска развития инвазивного заболевания и в зависимости от иммунного статуса или предрасположенности лиц. Бессимптомно колонизация срабатывает с инвазивными инфекциями. Пневмококк является ведущим возбудителем внебольничной пневмонии (CAP) и один из самых распространенных причин бактериемии у людей. У здоровых лиц С. пневмонии (пневмококки), часто протекает бессимптомно и безвредные колонизаторы верхних дыхательных путей, где они сталкиваются с непатогенных бактерийиз флорой, но и с патогенов, таких как Haemophilus SPP. или золотистый стафилококк и первая линия системы обороны иммунной человека. Ставки по транспортировке являются самыми высокими в маленьких детей (37%) и даже выше в переполненных детских садах (58%) ^3-5. Самый молодой населения и пожилых людей, получив пневмококк через аэрозольной передачи от перевозчиков и носоглотки выделениями ^6, принадлежат к группам высокого риска и вакцинации с использованием одного из пневмококковых конъюгированных вакцин (PCV10 или PCV13 у детей и 23-валентной полисахаридной PPSV23 у взрослых) Рекомендуется в Соединенных Штатах (США) и многих европейских странах ^4. PPSV23 охватывает серотипов, ответственных за ~ 90% бактериемией пневмококковых заболеваний в США и Европе, предотвращая, таким образом, эффективно инвазивных пневмококковых заболеваний (IPD) у взрослых, в то время как PCVs охватывают наиболее распространенные серотипы у детей. Следовательно, IPD из-за типов вакцин (VT) являются РедуCED но невакцинных серотипов отображения высокой вирулентности потенциал и устойчивость к антибиотикам появились ^4,7-12. Носоглотки в качестве резервуара является отправной точкой для пневмококков распространяться на пазух или среднего уха, начавших вредных местных инфекций. Что более важно, пневмококки распространяться непосредственно через дыхательные пути в бронхах и легких, в результате чего, угрожающей жизни CAP ^4,13. Легочные инфекции часто сопровождаются ткани и разрушения барьера, что позволит возбудителя распространяться в кровь и вызывает IPD. Случаи CAP и IPD являются самыми высокими в ослабленным иммунитетом лиц или в крайних возрастных ^4,13. Обстоятельства, ответственные за преобразование из комменсал к патогена с высокой вирулентностью находятся в стадии обсуждения. Однако, помимо изменений в восприимчивости хозяина и эволюционной адаптации сопровождается более высокой вирулентностью и увеличение сопротивления к антибиотикам были предложены иметь решающее влияние на PNEumococcal инфекции ^14-16.

Возбудитель наделен множеством адгезинов посреднических тесный контакт слизистой эпителиальных клеток. После преодоления слизи в дыхательных путях, пневмококковая соблюдение клетки-хозяева, облегчается с помощью прямых взаимодействий поверхностных, подвергшихся воздействию адгезинов с клеточными рецепторами и, используя компоненты внеклеточного матрикса или сывороточных белков, как преодоление молекулам ^4,17,18. Как универсальные патогены пневмококки также оснащены факторов, участвующих в уклонении от иммунной защитных механизмов. Кроме того, они имеют способность адаптироваться к различным принимающих кругах, таких как легких, крови и спинномозговой жидкости (ликвора), соответственно ^5,17,19,20.

Влияние бактериальных факторов на патогенез и воспалительные принимающих ответов исследуется в экспериментальных моделях на животных пневмонии, бактериемии или менингита ^21-25. Несмотря на то, патоген человека, эти модели мыLL-создан, чтобы расшифровать пневмококковой ткани тропизм, механизмы вирулентности или protectivity кандидатов пневмококковых вакцин. Генетический фон инбредных линий мышей определяет восприимчивость к пневмококков. BALB / с мышей, инфицированных интраназально пневмококков Было обнаружено, что устойчивые, а CBA / Ca и SJL мыши были более чувствительны против пневмококковых инфекций ^22. Это означает, что, похожи на людей, генетического фона и принимающих защитных механизмов определить исход инфекции. Таким образом, необходимы дальнейшие усилия, чтобы разгадать сопротивления локусов в геноме мышей менее чувствительными к пневмококковых инфекций. Полученные данные привели к изменениям в в естественных условиях протоколов вирулентности. Вместо инбредных мышей BALB / с мышей, часто используемых в прошлом, очень уязвимые CD-1/MF1 беспородных линии мышей являются в настоящее время часто используется для изучения влияния потерь на-функции пневмококковой вирулентности или пригодности факторов ^26-28. Кроме того, наличиебиолюминесцентной пневмококков и оптических методов визуализации позволяет в режиме реального времени биолюминесценции Bioimaging инфекций. В пневмококков оптимизированный ген кассета luxABCDE (плазмиды Paul-Tn 4001 luxABCDE Км ^г) был вставлен в одном месте интеграции в хромосому транспозонного мутагенеза. Биолюминесцентный пневмококки были использованы для оценки ослабления пневмококковых мутантов, дефицитных по вирулентности или фитнес-факторов и их транслокации из одной анатомической сайта на другой ^26,28-31.

Здесь мы предлагаем протокол для биоизображений пневмококковых инфекций в мышиной пневмонии или сепсиса модели. Усиление и распространение биолюминесцентного пневмококков в интраназально или внутрибрюшинно инфицированных мышей можно легко контролировать с течением времени с помощью оптической системы формирования изображения и того же животного в различные моменты времени.