전기 방사 재조합 거미 실크 단백질의 부직포 메쉬를 포함하여 공기 정화 장치

1. 마약 준비를 회전 eADF4 (C16) 단백질을 동결 건조 가라. 높은 정밀도 스케일을 사용하여 1 ML 반응 용기에 eADF4 (C16)의 20 밀리그램 무게. hexafluoroisopropanol (HFIP) 200 μl를 추가하고 파라 필름과 용기를 밀봉하십시오. 참고 : HFIP 매우 휘발성 해로운 것입니다. 그것은 신중하게 안전 후드, 피펫 아래의 호흡 트랙 작업에 해를 입힐하고, 튜브 캡 수. 소용돌이는 1 분간 정지 및 추가 솔루션을 취소 흔들어. 확인하려면, 단백질의 전체 양이 완전히 용해되어, 이상 밤 기다립니다. 2. 전기 방사 장소 카운터 전극과 전극 (-22.5 kV의)과 상대 전극 (+2.5 kV의) 두 가지 사전 설정 전압의 상단에있는 필터 재료 : 전기 방사 장치 (그림 1)를 준비합니다. 315 μL / 시간에 부피 유량을 설정합니다. 참고 : W하일 전기 방사 독성 HFIP이 증발됩니다. 당신의 전기 방사 장치 흄 후드에 연결되어 있는지 확인합니다. 상업적으로 이용 가능한 20 G 바늘을 30 mm의 잔여 길이 손 분쇄기 날카로운 끝을 갈기. 1 ML의 주사기에 바늘을 연결합니다. 참고 : 평면 바늘 끝은 잘 정의 된 테일러 콘을 생성하기 위해 필요합니다. 주사기로 전체 방사 도프 (200 μL)을로드합니다. 완벽한 솔루션이 회전하는 과정에서 돌출 될 수 있도록하기 위해, 공기의 100 μL와 함께 마약을 오버레이. 참고 : 바늘의 막힘 방지하기 위해 회전 마약에는 입자 (집계 또는 불순물)이 없는지 확인하십시오. 흄 후드에서 작동! 전기 방사 장치의 주사기 펌프에 채워진 주사기를 연결하고 물방울 바늘의 끝에 나타날 때까지 조심스럽게 주사기로 피스톤을 누르십시오. 피스톤을 잠급니다. 거리를 설정바늘의 끝과 8~20센티미터에 상대 전극 사이. 주사기 펌프를 시작하고 바늘의 개통에서 (일반적으로 밖으로 건조) 액을 제거하십시오. 즉시 전기 방사 장치의 안전 설치를 활성화하고 즉시 새로운 물방울이 나타나는 높은 전압 소스를 시작합니다. 방사 도프의 전기 방사하여 연속적으로 시작됩니다. 회전 기간을 제어하는​​ 스톱워치를 사용합니다. 참고 : 솔루션의 건조 방지하고 따라서 바늘 막힘하기 위해, 즉시 건조 액을 제거한 후 회전하는 프로세스를 시작해야합니다. 재조합 거미 실크 단백질의 전기 방사하기 때문에 습도와 온도에 따라 각각의 실험 조건으로 공정 변수의 적응 (그림 2)이 필요할 수 있습니다. 참고 : 충분한 유량을 사용한다 (그림 2B) 건조 물방울을 방지 할 수 있습니다. 낮은 가습기가있는 경우TY는 주변 분위기, 상대 습도를 조정하거나 흐름 속도를 높입니다. 적절한 테일러 콘이 발생할 때까지 전압을 낮 춥니 다 (그림 2A). 팁 (그림 2C) 전혀 해결책이 없을 때, 유량을 높이고 물방울이 발생할 때까지 전압을 낮 춥니 다. 그런 다음 안정되어있는 테일러 콘 (그림 2A)을 설정하기 위해 전압을 조정합니다. 30 주사기 펌프 오프 스위치를 전기 방사의 초 / 60 초 / 90 초 후. 떨어지는 물방울을 방지하기 위해, 주사기에 잔류 압력을 해제하는 높은 전압 소스를 켜기 전에 10 초를 기다립니다. 단계 6 ~ 8은 이러한 비교를위한 폴리 아미드, 폴리 프로필렌과 폴리 에스테르 부직포 메쉬뿐만 아니라 검은 종이로 필터 재료의 다양한 유형을 수행 할 수 있습니다. 이후 안정성 실험 부직포 메쉬를 생성하기 위해 필터 재료 대신에 검은 종이를 사용하고 5 단계에서 7 단계를 수행합니다. 전기 방사의 5 분 후에 중지과정은 8 단계에서 설명했다. 3. 실크 부직포 메쉬의 후 처리 60 미리 가열 오븐 ° C. eADF4 (C16) 부직포 메쉬 수직으로하고 잠금 유리 용기 2 cm의 최소 거리로 필터 기판을 놓습니다. 컨테이너는 이후 에탄올과 물을 소개하는 데 사용되는 두 개의 구멍이 있어야합니다. 참고 : 필터 재료를 고정 할 때, 투수 실험에 필요한 영역은 클램프에 의해 손상되지 않았는지 확인합니다. 후 처리 용기의 내부 바닥 (그림 3)에 가리키는 실리콘 튜브 두 60 ML의 주사기, 에탄올로 가득 하나 물이 가득 하나를 연결합니다. 주 : 치료 후 컨테이너에서 액체를 제거 할 수하기 위해, 가능한 한 근접하게 아래로 파이프의 구멍을 배치합니다. 오븐에서 치료 후 컨테이너를 배치EN과 주사기를 돌출시켜 에탄올 60 mL를 추가합니다. 치료 기간을 제어하는​​ 스톱워치를 사용합니다. 에탄올 증기 치료 90 분 후, 유리 주사기 에탄올을 제거하고, 두 번째 주사기에 물 60 mL를 추가합니다. 또 다른 90 분 동안 기다린 후 물을 제거하고 오븐을 끄십시오. 완전히 식을 때까지 응축하여 물방울을 방지하기 위해, 오븐에 컨테이너를 둡니다. 4. 거미 실크 부직포 메쉬 분석 검은 종이 또는 기타 이동식 지원에 대한 안정성 테스트를위한 실크 부직포 메쉬를 준비합니다. 골판지 밖으로 두 프레임을 잘라 두 번 끈끈한 접착 테이프를 조정합니다. 실크 부직포 메쉬 위에 하나의 프레임은 검은 종이에 입금 누르고 실크 섬유 (SEM 이미징 이후의 과잉 섬유를 유지)의 과잉을 차단하기 위해 메스를 사용합니다. 조심스럽게 종이에서 부직포를 분리하기 위해 프레임을 제거합니다. 두 번째 프레임이 단계를 반복(그림 4). 실제 딥 시험 : 각 조각 (1cm 2), 사후 처리 및 비 처리 된 실크 부직포 메쉬를 잘라 탈 물에 담근다. 처리 된 부직포 메쉬 (그림 5) 안정 될 동안 처리하지 않은 실크 부직포 메쉬 즉시 용해됩니다. 침지 후, 담근 샘플을 건조 SEM 이미지 준비를합니다. 푸리에 변환 적외선 분광기 (FTIR) 측정 및 연속 푸리에 자기 디컨 볼 루션 (FSD) 부직포 메쉬의 후 처리에 따라 실크 단백질의 구조적 변화에 대한 정보를 얻기 위해, FTIR이 매개 변수를 사용하여 적용 할 수 있습니다 투과율 800 4,000센티미터 -1 모드, 스캔, 60 축적을 측정하고 각각의 스펙트럼 평균을 하나의 참조 스펙트럼에 따라 측정된다. 데이터의 정량 분석을 위해, FSD (그림 6, 그림 7) 고용 할 수 있습니다. 따라서, 곡선 데이터를 AR로 감소1,590 및 1,705cm -1 기준 개정과 EA가 수행됩니다. 지역 최소 자승법은 22 (1611, 1619, 1624, 1630, 1640, 1650, 1659, 1666, 1680, 1691, 1,698cm -1) 이전의 연구에서 가져온 최고 위치에 따라 계산됩니다. SEM 이미지 : SEM은 섬유 직경과 다른 필터 기판에 실크 섬유의 형태를 조사하고 섬유의 형태 (그림 8)의 후 처리의 영향을 분석하기 위해 적용 할 수 있습니다. 충분히 상세한 이미지를 얻기 위해 25,000 X 5,000 X의 배율을 사용합니다. 5. 공기 침투성의 결정 Akustron 공기 투과성 장치의 측정 영역에 필터 재료의 적절한 피팅 부품을 배치. 참고 :: 당신은 공기 침투성 장치의 다른 유형을 사용하는 경우, DIN의 요구 53 887, DIN 53 120, ISO를 충족하는지 확인 9237 및 ASTM D 737-96 표준. Akustron 공기 침투성 장치 (또는 다른로 5.1에 묘사 된) 사용합니다. 필요가 NORMED 데이터를 계산하면 [L / (m 2 개 초)]. 샘플의 다른 부분과 1 단계와 2 단계를 적어도 10 번 반복 연산 중간 (그림 9)을 계산합니다. 참고 : 측정 공기 침투성이 장치의 연락처 및 부직포 메쉬가 필요합니다. 따라서, 샘플의 취급에주의가 섬세한 실크 부직포 메쉬의 파열을 방지하기 위해 필수적이다. 6. 필터 효율의 결정 압력 제어와 같은 범용 입자 선별기 (팔라스 GmbH를, 카를 스루에, GER)와 같은 입자 계수기와 적절한 기계를 사용합니다. 장치와 측정 입자 보존 (그림 10)에서 필터 샘플을 놓습니다. 에어로졸 : 디 에틸 헥실 sebacat (DEHS) 입자 크기 : 0.3-3 μm의, 지속 시간 : 30 초, 액체 속도 : 2,350센티미터 / 초, 공기 흐름 : ​​3천4백m 3 / 시간. <br/> 참고 :주의 샘플을 처리하고 부직포 메쉬의 파괴를 방지하고 오염을 방지하기 위해 표면을 만지지 마십시오. 성능 측정을 위해 동일한 품질의 충분한 샘플을 만들어야합니다.