Summary

Construction d'un microscope à haute résolution avec des capacités de piégeage optique classique et holographique

Published: April 22, 2013
doi:

Summary

Le système décrit ici utilise un piège optique traditionnel ainsi qu'une ligne de piégeage optique holographique indépendant, capable de créer et de manipuler de multiples pièges. Cela permet la création d'arrangements géométriques complexes de particules réfraction tout en permettant à grande vitesse des mesures simultanées à haute résolution, de l'activité des enzymes biologiques.

Abstract

Systèmes de microscope à haute résolution avec des pièges optiques permettent la manipulation précise d'objets divers de réfraction, tels que des billes diélectriques 1 ou organites cellulaires 2,3, ainsi que pour la haute lecture de la résolution spatiale et temporelle de leur position par rapport au centre du piège. Le système décrit ici a un tel "traditionnel" piège fonctionnant à 980 nm. Il fournit en outre un second système de piégeage optique qui utilise un ensemble holographique disponible dans le commerce afin de créer et de manipuler simultanément les modèles de piégeage complexes dans le champ de vision du microscope 4,5 à une longueur d'onde de 1064 nm. La combinaison des deux systèmes permet la manipulation de plusieurs objets de réfraction en même temps tout en menant simultanément une vitesse élevée et mesures à haute résolution du mouvement et de la production de force au nanomètre et l'échelle de piconewton.

Introduction

Piégeage optique est l'une des techniques clés en biophysique 6. Un progrès important dans le piégeage optique a été le développement de pièges holographiques qui permettent la création de modèles de piégeage en trois dimensions plutôt que les pièges de points classiques 7. Ces pièges holographiques possèdent l'avantage de la polyvalence dans le positionnement des objets de réfraction. Cependant pièges classiques peuvent être facilement alignées est plus symétrique que les kits holographiques disponibles dans le commerce. Ils permettent également pour le suivi rapide et précis des objets piégés. Ici, nous décrivons un système (Figure 1) qui combine les deux approches de piégeage dans un seul instrument et permet à l'utilisateur d'exploiter les avantages des deux, selon le cas.

Les considérations générales de la construction de pièges optiques (basé sur des faisceaux laser unique ou multiple) sont discutés en détail ailleurs 8-10. Ici, nous décrivons les considérations spécifiques à notre sEtup et fournir les détails de notre procédure d'alignement. Par exemple, les systèmes avec deux faisceaux de piégeage optique ont été décrits précédemment (par exemple ref. 11), typiquement en utilisant un faisceau laser pour piéger un objet de réfraction et à l'aide de l'autre (faisceau de puissance intentionnellement bas) pour la lecture découplé de la position de l'objet piégé . Ici cependant, les deux faisceaux laser doivent être de haute puissance (300 mW ou ultérieure) parce que les deux doivent être utilisés pour le piégeage. Pour les mesures des systèmes biologiques, les lasers utilisés pour le piégeage devraient baisser de façon optimale dans une fenêtre NIR spécifique de longueur d'onde afin de minimiser la dégradation des protéines induite par la lumière 1. Ici, nous avons choisi d'utiliser 980 diode nm et 1064 nm lasers DPSS en raison de leur faible coût, de haute disponibilité et de facilité d'utilisation.

Nous avons également choisi d'utiliser un modulateur spatial de lumière (SLM) de créer et de manipuler plusieurs pièges simultanément en temps réel 4,5. Ces dispositifs sont disponibles dans le commercemais leur intégration dans une installation complète présente des défis uniques. Nous décrivons ici une approche pratique qui aborde ces difficultés potentielles et fournit un instrument très polyvalent. Nous donnons un exemple explicite de la configuration spécifique décrite qui peut être utilisé comme un guide pour les dessins modifiés.

Protocol

1. Installation de 980 nm de longueur d'onde unique piège optique Piégeage optique à 980 nm longueur d'onde est souvent optimal pour des expériences de biophysique et de diodes laser bon marché sont disponibles avec une puissance aussi élevée que 300 mW. Il est préférable pour une diode laser à queue de cochon à maintien de polarisation fibre monomode avec un diamètre de champ de mode connue. La fibre doit être suffisamment long pour agir comme un filtre de mode et est généralement term…

Representative Results

La configuration assemblée permet à l'opérateur de piéger plusieurs objets de réfraction en temps réel et les positionner dans les trois dimensions dans le champ de vision. Nous illustrons les capacités holographiques de l'instrument en piégeant 11 microsphères (figure 2). Le piège confinant chaque objet est manuellement repositionné sur le piégeage de sorte que l'arrangement final représente le logo de l'Université de l'Utah, où cette expérience a été réalisée. U…

Discussion

Nous avons construit un instrument qui combine deux pièges optiques de différents types (Figure 1) pour fournir des installations de piégeage séparés pour la manipulation d'objets et de mesure. Le piège optique "classique" est construit autour d'une diode laser à 980 nm. Ce faisceau est élargi, dirigé et ensuite injecté dans notre microscope inversé (poutre "lumière rouge" dans la figure 1). Le piège optique holographique est construit autour d&#…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Le financement a été assuré par l'Université de l'Utah. Nous tenons à remercier le Dr J. Xu (UC Merced) et Dr. Reddy BJN (UC Irvine) pour des discussions utiles.

Materials

Equipment Company Catalog Number Comments
Optical table Newport corporation ST-UT2-56-8 Irvine, CA
Microscope, Inverted, Eclipse Ti Nikon USA MEA53220 Melville, NY
Plan apo 100X oil objective (1.4 NA) Nikon USA MRD01901 Melville, NY
Oil condenser Lens 1.4 NA Nikon USA MEL41410 Melville, NY
EMCCD camera Andor technology USA Ixon DU897 South Windsor, CT
1/3″ CCD IEEE1394 camera NET USA Inc Foculus FO124SC Highland IN
Laser, TEM00, SLM, 1,064 nm wavelength Klastech Laser Technologies Senza-1064-1000 Dortmund; Germany
laser diode, TEM00, SLM, 980 nm Axcel Photonics BF-979-0300-P5A Marlborough, MA
laser diode mount ILX Lightwave LDX-3545, LDT-5525, and LDM-4984 Bozeman, MT
adjustable fiber ports Thorlabs PAF-X-11-B Newton, NJ
holographic system Arryx HOTKIT-ADV-1064 Chicago, IL
holographic mirror Boulder Non-linear Systems this is a part of HOTKIT-ADV-1064 Lafayette, CO
Calcite polarizer Thorlabs GL10-B Newton, NJ
half-wave plate Thorlabs WPH05M-1064 Newton, NJ
Polarizer rotation mount Thorlabs PRM1 Newton, NJ
half-wave plate rotation mount Thorlabs RSP1 Newton, NJ
Shutter Thorlabs SH05 Newton, NJ
dichroic mirrors (DM2 & DM3); 45° AOI Chroma Technology t750spxrxt Bellows Falls, VT
dichroic mirror (DM1); 45° AOI Thorlabs DMSP1000R Newton, NJ
custom mechanical adapter Thorlabs SM1A11 and AD12F with enlarged inner bore Newton, NJ
notch filter Semrock FF01-850/310-25 Rochester, NY
Acousto-Optic deflector (2-axis) intraAction DTD-584CA28 Bellwood, IL
goniometric stage New Focus 9081 Santa Clara, CA
60 mm steering lenses Thorlabs LA1134-B Newton, NJ
16 mm aspherical expander lens Thorlabs AC080-016-C Newton, NJ
175 mm expander lens Thorlabs LA1229-C Newton, NJ
Spot blocker (cabron-steel sphere) Bal-Tec 0.0100″ diameter Los Angeles, CA
Microspheres (Carboxyl-polystyrene) Spherotech CP-45-10 Lake Forest, IL

Referências

  1. Svoboda, K., Block, S. M. Biological applications of optical forces. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 23, 247-285 (1994).
  2. Ashkin, A., Schutze, K., Dziedzic, J. M., Euteneuer, U., Schliwa, M. Force generation of organelle transport measured in vivo by an infrared laser trap. Nature. 348, 346-348 (1990).
  3. Shubeita, G. T., Tran, S. L., et al. Consequences of motor copy number on the intracellular transport of kinesin-1-driven lipid droplets. Cell. 135, 1098-1107 (2008).
  4. Polin, M., Ladavac, K., Lee, S. H., Roichman, Y., Grier, D. Optimized holographic optical traps. Opt Express. 13, 5831-5845 (2005).
  5. Sun, B., Roichman, Y., Grier, D. G. Theory of holographic optical trapping. Opt. Express. 16, 15765-15776 (2008).
  6. Moffitt, J. R., Chemla, Y. R., Smith, S. B., Bustamante, C. Recent advances in optical tweezers. Annu. Rev. Biochem. 77, 205-228 (2008).
  7. Grier, D. G. A revolution in optical manipulation. Nature. 424, 810-816 (2003).
  8. Neuman, K. C., Block, S. M. Optical trapping. Rev. Sci. Instrum. 75, 2787-2809 (2004).
  9. Sheetz, M. P. Laser tweezers in cell biology. Introduction. Methods Cell Biol. 55, xi-xii (1998).
  10. Spudich, J. A., Rice, S. E., Rock, R. S., Purcell, T. J., Warrick, H. M. Optical traps to study properties of molecular motors. Cold Spring Harb. Protoc. 2011, 1305-1318 (2011).
  11. Visscher, K., Gross, S. P., Block, S. M. Construction of multiple-beam optical traps with nanometer-resolution position sensing. Selected Topics in Quantum Electronics. IEEE Journal of. 2, 1066-1076 (1996).
  12. Valentine, M. T., Guydosh, N. R., et al. Precision steering of an optical trap by electro-optic deflection. Opt Lett. 33, 599-601 (2008).

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Citar este artigo
Butterfield, J., Hong, W., Mershon, L., Vershinin, M. Construction of a High Resolution Microscope with Conventional and Holographic Optical Trapping Capabilities. J. Vis. Exp. (74), e50481, doi:10.3791/50481 (2013).

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