Summary

Construcción de un microscopio de alta resolución con capacidades de captura óptica convencional y holográfica

Published: April 22, 2013
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Summary

El sistema descrito en este documento emplea una trampa óptica tradicional, así como una línea de trampas ópticas holográficas independiente, capaz de crear y manipular múltiples trampas. Esto permite la creación de disposiciones geométricas complejas de partículas de refracción a la vez que permite mediciones simultáneas de alta velocidad, de alta resolución de la actividad de enzimas biológicas.

Abstract

Sistemas de microscopio de alta resolución con trampas ópticas permiten la manipulación precisa de los diversos objetos de refracción, tal como perlas de dieléctricos 1 u orgánulos celulares 2,3, así como para la lectura de alta resolución espacial y temporal de su posición con respecto al centro de la trampa. El sistema descrito en este documento tiene como "tradicional" trampa funciona a 980 nm. Es, además, proporciona un segundo sistema de captura óptica que utiliza un paquete holográfica disponibles comercialmente para crear y manipular simultáneamente patrones de trampas complejos en el campo de visión del microscopio 4,5 a una longitud de onda de 1064 nm. La combinación de los dos sistemas permite la manipulación de varios objetos de refracción al mismo tiempo, mientras que la realización simultánea mediciones de alta resolución de movimiento y la fuerza de producción a escala nanométrica y picoNewton alta velocidad y.

Introduction

Atrapamiento óptico es una de las técnicas principales en la biofísica 6. Un avance crucial en la captura óptica ha sido el desarrollo de trampas holográficas que permiten la creación de patrones de trampas tridimensionales en lugar de trampas de punto convencionales 7. Tales trampas holográficas poseen la ventaja de la versatilidad en el posicionamiento de los objetos de refracción. Sin embargo trampas convencionales pueden ser fácilmente alineados a ser más simétrico que los kits holográficas disponibles comercialmente. También permiten rápido seguimiento preciso de los objetos atrapados. Aquí se describe un sistema (Figura 1) que combina los dos enfoques de captura en un solo instrumento y permite al usuario explotar los beneficios de ambos según sea apropiado.

Las consideraciones generales de la construcción de trampas ópticas (basados ​​en rayos láser simples o múltiples) se discuten en detalle en otra parte 8-10. A continuación, resumimos los aspectos específicos de nuestro sETUP y proporcionar los detalles de nuestro proceso de alineación. Por ejemplo, los sistemas con dos haces ópticos de captura no se han descrito antes (por ejemplo, ref. 11), típicamente usando un haz de láser para atrapar un objeto de refracción y el uso de la otra (rayo de energía intencionalmente bajo) para la lectura desacoplado de la posición del objeto atrapado . Aquí, sin embargo, los dos haces de láser deben ser de alta potencia (300 mW o superior) debido a que ambos se van a utilizar para la captura. Para las mediciones de los sistemas biológicos, los láseres utilizados para la captura deberían caer de manera óptima dentro de una ventana de longitud de onda NIR específica para minimizar la degradación de la proteína inducida por la luz 1. Aquí se ha optado por utilizar el diodo 980 nm y 1064 nm láser DPSS debido a su bajo costo, alta disponibilidad y facilidad de operación.

También hemos optado por utilizar un modulador espacial de luz (SLM) para crear y manipular múltiples trampas simultáneamente en 4,5 tiempo real. Estos dispositivos están disponibles comercialmentesin embargo, su integración en una instalación completa presenta desafíos únicos. Aquí se describe un enfoque práctico que aborda estas dificultades potenciales y proporciona un instrumento muy versátil. Se presenta un ejemplo explícito para la configuración específica descrita, que puede ser utilizado como una guía para los diseños modificados.

Protocol

1. La instalación de 980 nm Longitud de onda única trampa óptica Trampas ópticas a 980 nm de longitud de onda es a menudo óptima para experimentos biofísica y diodos láser de bajo costo están disponibles con una salida de potencia de hasta 300 mW. Es preferible que un láser de diodo que se trenza con la polarización de preservación de fibra monomodo con un diámetro de campo de modo conocido. La fibra tiene que ser suficientemente largo para actuar como un filtro de modo y por lo general se termina…

Representative Results

La configuración ensamblada permite al operador para atrapar varios objetos de refracción en tiempo real y la posición de ellos en todas las tres dimensiones dentro del campo de visión. Nos ilustran las capacidades holográficas del instrumento al atrapar 11 microesferas (Figura 2). La trampa de confinar cada objeto se volverá a colocar manualmente sobre la captura de manera que la disposición final muestra el logotipo de la Universidad de Utah, donde se llevó a cabo este experimento. Una funció…

Discussion

Hemos construido un instrumento que combina dos trampas ópticas de diferentes tipos (Figura 1) para proporcionar instalaciones de captura separadas para la manipulación de objetos y medición. La trampa óptica "convencional" se basa en un láser de diodo de 980 nm. Este haz se expande, dirigió y luego se inyecta en el microscopio invertido (haz "luz roja" en la Figura 1). La trampa óptica holográfica está construido alrededor de una nm láser DPSS 1064. El haz…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

El financiamiento fue proporcionado por la Universidad de Utah. Nos gustaría dar las gracias al Dr. J. Xu (UC Merced) y Dr. Reddy BJN (UC Irvine) útil para los debates.

Materials

Equipment Company Catalog Number Comments
Optical table Newport corporation ST-UT2-56-8 Irvine, CA
Microscope, Inverted, Eclipse Ti Nikon USA MEA53220 Melville, NY
Plan apo 100X oil objective (1.4 NA) Nikon USA MRD01901 Melville, NY
Oil condenser Lens 1.4 NA Nikon USA MEL41410 Melville, NY
EMCCD camera Andor technology USA Ixon DU897 South Windsor, CT
1/3″ CCD IEEE1394 camera NET USA Inc Foculus FO124SC Highland IN
Laser, TEM00, SLM, 1,064 nm wavelength Klastech Laser Technologies Senza-1064-1000 Dortmund; Germany
laser diode, TEM00, SLM, 980 nm Axcel Photonics BF-979-0300-P5A Marlborough, MA
laser diode mount ILX Lightwave LDX-3545, LDT-5525, and LDM-4984 Bozeman, MT
adjustable fiber ports Thorlabs PAF-X-11-B Newton, NJ
holographic system Arryx HOTKIT-ADV-1064 Chicago, IL
holographic mirror Boulder Non-linear Systems this is a part of HOTKIT-ADV-1064 Lafayette, CO
Calcite polarizer Thorlabs GL10-B Newton, NJ
half-wave plate Thorlabs WPH05M-1064 Newton, NJ
Polarizer rotation mount Thorlabs PRM1 Newton, NJ
half-wave plate rotation mount Thorlabs RSP1 Newton, NJ
Shutter Thorlabs SH05 Newton, NJ
dichroic mirrors (DM2 & DM3); 45° AOI Chroma Technology t750spxrxt Bellows Falls, VT
dichroic mirror (DM1); 45° AOI Thorlabs DMSP1000R Newton, NJ
custom mechanical adapter Thorlabs SM1A11 and AD12F with enlarged inner bore Newton, NJ
notch filter Semrock FF01-850/310-25 Rochester, NY
Acousto-Optic deflector (2-axis) intraAction DTD-584CA28 Bellwood, IL
goniometric stage New Focus 9081 Santa Clara, CA
60 mm steering lenses Thorlabs LA1134-B Newton, NJ
16 mm aspherical expander lens Thorlabs AC080-016-C Newton, NJ
175 mm expander lens Thorlabs LA1229-C Newton, NJ
Spot blocker (cabron-steel sphere) Bal-Tec 0.0100″ diameter Los Angeles, CA
Microspheres (Carboxyl-polystyrene) Spherotech CP-45-10 Lake Forest, IL

Referências

  1. Svoboda, K., Block, S. M. Biological applications of optical forces. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 23, 247-285 (1994).
  2. Ashkin, A., Schutze, K., Dziedzic, J. M., Euteneuer, U., Schliwa, M. Force generation of organelle transport measured in vivo by an infrared laser trap. Nature. 348, 346-348 (1990).
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  10. Spudich, J. A., Rice, S. E., Rock, R. S., Purcell, T. J., Warrick, H. M. Optical traps to study properties of molecular motors. Cold Spring Harb. Protoc. 2011, 1305-1318 (2011).
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Citar este artigo
Butterfield, J., Hong, W., Mershon, L., Vershinin, M. Construction of a High Resolution Microscope with Conventional and Holographic Optical Trapping Capabilities. J. Vis. Exp. (74), e50481, doi:10.3791/50481 (2013).

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