在使用高通量微孔板测定水，土壤，沉积物和微生物测定胞外酶活性的

微生物如细菌和真菌通过生产胞外酶的取得从复杂的有机化合物的营养物质和碳。这些酶通常水解的聚合物为可以被取入细胞小亚基。因此，在生态层面上，这些微生物胞外酶是负责大部分的养分矿化和发生在自然的环境中有机物的分解。酶，例如纤维二糖水解（CBH）和β-葡糖苷酶是纤维素降解和工作重要一致来催化纤维素水解成葡萄糖^1,2，它提供了对微生物的吸收和同化一个可利用的碳底物。酶磷酸酶释放的有机磷易溶于无机磷酸基团，基本上矿化磷酸盐和使其可用于大多数生物³使用。其他酶，如N-乙酰氨基（NAG酶），是的importan吨中几丁质的降解，可以使碳和氮供微生物采集^4。

一项所述的程序，用于在自然环境中的微生物胞外酶活性的测定是使用人工对硝基苯基（ 对 NP）相连的基板，该最初被开发，以检测土壤磷酸酶活⁵的方法。此方法依赖于有色终产物， 对硝基苯酚，当人工基板通过适当的酶水解时释放的检测。 对硝基苯酚的随后可以通过测量其吸光度约为400-410 nm的比色定量。这种方法已经被应用到检测其它酶如NAG酶^6，并已应用于各种研究着眼于在土壤和沉积物^7-9微生物胞外酶活性。

这是originall一种替代方法Ý用于评估细胞外糖苷酶的活性在水生环境^10,11是利用4 -甲基伞形酮（MUB）相连的底物。释放（4 – 甲基伞形酮）的最终产物是高荧光的，并且可以使用与周围四百六十分之三百六纳米的激发/发射设置一个荧光计来检测。各种MUB联的人工基质的情况下，允许至少为许多酶（ 如 β-葡糖苷酶，纤维二糖水解，NAG酶，磷酸酶）的活性的荧光测定作为可使用p NP-衬底比色步骤进行测定。其它微生物的胞外酶，如蛋白降解的亮氨酸氨肽酶，可以使用7 – 氨基-4 – 甲基香豆素（COU）键合底物荧光计进行测定。既MUB-和COU联基板已被用来确定各种陆地和水中的样品^12,13中酶的活性。

虽然以前的研究单位描述离子束增强沉积荧光或比色微孔板方法来确定胞外酶的活性^14，有必要建立一个清晰的介绍了如何进行这样的试验。在这里，我们展示了进行高通量微孔板技术的使用比色p NP联基板的做法土壤和沉积物，并在使用荧光MUB联基板技术自然水域胞外酶的活性分析程序。我们专注于β-葡糖苷酶，NAG酶和磷酸酶的活性的测量，因为这些酶可以分别连接到碳，氮，磷和骑自行车。然而，此处描述的步骤可以应用到使用不同的人工基质的其他胞外酶的测定。