Устная Передача<em> Листерий</em> У мышей с помощью употреблении зараженной пищи
Summary
Эта статья описывает новый метод для перорального заражения мышей с использованием<em> Листерий</em>-Загрязненных продуктов питания. Протокол может быть легко адаптирован для использования с другими пищевыми бактериальных патогенов.
Abstract
Л. моноцитогенес являются факультативными внутриклеточными бактериальными патогенами, которые вызывают пищевых инфекций у людей. Очень мало известно о желудочно-кишечного фаза листериоза из-за отсутствия небольшого модель животного, которое близко имитирует заболевания человека. Эта статья описывает новую модель мыши для устной передачи L. моноцитогенес. С помощью этой модели мышей, получавших L. моноцитогенес загрязненные хлеб есть дискретная фаза желудочно-кишечную инфекцию, а затем различной степенью системного распространения в восприимчивых (BALB / С / К / J) или устойчивостью (C57BL / 6) линий мышей. На поздних стадиях инфекции, распространения в желчном пузыре и мозга наблюдается. Пищевых модель листериоза является высокой воспроизводимостью, не требует специальных навыков и может быть использован с широким спектром бактериальных изолятов и лабораторные штаммы мыши. Как таковая, она является идеальной моделью для изучения как вирулентность стратегий, используемых L. моноцитогенес </EM> содействовать колонизации кишечника, а также реакции организма хозяина инвазивных пищевых бактериальной инфекции.
Introduction
Листерий являются факультативными внутриклеточными бактериальными патогенами, которые вызывают пищевых инфекций у людей. Бактерии устойчивы к многим из процессов, используемых для защиты наших продуктов питания, таких как сушка, соление, или 1,2 холодильного и инфекции, как правило, связаны с обработана, "готовых к употреблению" продуктов, которые не нагреваются до потребления . В нескольких предыдущих вспышек, источником L. моноцитогенес-загрязненных продуктов питания был определен, и ограниченной группы лиц, подвергшихся воздействию была под пристальным контролем 3-6. В тех примерах, клинической картины заболевания у практически здоровых лиц варьировались от мягкого, самоограничения гастроэнтерита более тяжелые кишечные и системные инфекции, которые требуют госпитализации. L. моноцитогенес инфекций у лиц с ослабленным иммунитетом, в том числе и новорожденных и пожилых людей, которые были связаны с высокой смертностью (25-30%), даже при лечении антибиотиками <sдо> 7,8. Мало что известно о инфекционная доза для L. моноцитогенес, или принимающей факторов, которые регулируют восприимчивость к инфекции после перорального передачи, прежде всего из-за отсутствия небольшой животной модели, которая повторяет этот широкий диапазон инфекции результаты.
Наиболее широко используемой моделью листериоза внутривенно (IV) инокуляции мышей. IV модель является высокая воспроизводимость, и была чрезвычайно полезны для изучения как наивные и памяти Т-клеточного ответа при заражении 9,10. Недостатком модели IV является то, что он полностью обходит кишечной фазы инфекции. После пищевых передачи слизистой кишечника обеспечивает барьер, который предположительно замедляет и ограничивает количество бактерий, которые могут постоянно распространять в периферические ткани. В отличие от всей посевной могут быть найдены в селезенке и печени в течение нескольких минут внутривенного введения, и это большое болюс организмы могут подавлять врожденной иммунной гefenses в этих тканях. Оральные инфекции мышей через желудочный зонд менее широко используется, потому что большие дозы (10 9 -10 11 КОЕ), как правило, необходимых для достижения колонизации кишечника 10. Кроме того, внутрижелудочного (Ig) инокуляцию кормления игла не генерирует воспроизводимое период желудочно-кишечной инфекции до системное распространение. Некоторые лаборатории сообщили, что L. моноцитогенес достичь селезенки и печени в течение 4-12 ч после инфекции (HPI), тогда как другие не показали системного распространения до 48 HPI 11-15. Эта лаборатория-на-Lab изменения могут быть следствием инвазивный характер IG прививки, которые могут привести к незначительной травме слизистой пищевода, а также содействовать прямым вторжением кровоток бактерий.
Недавно мы разработали новую модель мыши оральный L. моноцитогенес инфекция, которая точно имитирует все этапы болезни человека 16. Заражение происходит, когда мыши глотать частей продолжениеаминировать питания, процесс, который не является травматическим, и не требует специальных навыков лабораторными исследователями. Для дискретного периода времени (36-48 часов), Л. моноцитогенес воспроизводимо только колонизировать желудочно-кишечном тракте, тем самым позволяя исследование механизмов, используемых патогенных листерий к транслокации через слизистой кишечника и распространять в периферические ткани. Важно отметить, что эта модель может быть использована для изучения различий в хост врожденной устойчивостью к инфекции. В предыдущем исследовании мы показали, что BALB / С / К / J мышей были очень восприимчивы к пищевого листериоза, с экспоненциальным репликации L. моноцитогенес, происходящих в кишечнике, селезенке, печени и желчного пузыря 16. В отличие от мышей C57BL / 6, были устойчивы к пищевой инфекции, только с переходным колонизации L. моноцитогенес возникающих в каждой из этих тканей. Дополнительной особенностью пищевых модель, которая точно имитирует болезнь человека в том, что природные распространениев мозг произошло во время более поздних стадиях инфекции (5-7 точек на дюйм).
Protocol
Representative Results
Discussion
Инбредных мышей не равномерно восприимчивы к кормлению в любое время дня, и их готовность едят загрязненные хлеб будет зависеть как от типа деформации и возраста мышах 17. По нашему опыту, 6-9 недельных мышей В6 восприимчивы к кормлению в любое время дня, но мышам BALB не будет последов…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке грантов от Национального института здоровья (AI079442 и AI091918) присуждена SEFD
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion Agar | Difco | BD-241830 | |
| Lithium chloride | Sigma | L9650 | |
| Glycine | Omnipur | 4840 | |
| EDTA | Gibco | 15575-038 | |
| DTT | Sigma | D5545 | |
| Collagenase, type IV | Worthington | LS004089 | |
| DNAse I | Worthington | LS002007 | |
| Diff-Quik | Dade-Behring | B4132-1A | |
| PowerGen 1000 homogenizer | Fisher | 14-261-06 | |
| stainless steel type 304 mesh #80 | Small Parts, Inc. | CX-0080-C | |
| Cytospin | Statspin | M801-22 |
Referências
- Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature. Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).
- Neunlist, M. R., et al. Effect of salting and cold-smoking on the culturability, viability, and virulence of Listeria monocytogenes strain Scott A. Journal of Food Protection. 68, 85-91 (2005).
- Aureli, P., et al. An outbreak of febrile gastroenteritis associated with corn contaminated by Listeria monocytogenes. N. Engl. J. Med. 342, 1236-1241 (2000).
- Dalton, C. B., et al. An outbreak of gastroenteritis and fever due to Listeria monocytogenes in milk. N. Engl. J. Med. 336, 100-105 (1997).
- Frye, D. M., et al. An outbreak of febrile gastroenteritis associated with delicatessen meat contaminated with Listeria monocytogenes. Clin. Infect. Dis. 35, 943-949 (2002).
- Salamina, G., et al. A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes. Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).
- Mead, P. S., et al. Food-related illness and death in the United States. Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).
- Wing, E. J., Gregory, S. H. Listeria monocytogenes: Clinical and experimental update. The Journal of Infectious Disease. 185, S18-S24 (2002).
- Condotta, S. A., Richer, M. J., Badovinac, V. P., Harty, J. T. Probing CD8 T cell responses with Listeria monocytogenes infection. Advances in Immunology. 113, 51-80 (2012).
- Disson, O., et al. Modeling human listeriosis in natural and genetically engineered animals. Nat Protoc. 4, 799-810 (2009).
- Czuprynski, C. J., Faith, N. G., Steinberg, H. A/J mice are susceptible and C57BL/6 mice are resistant to Listeria monocytogenes infection by intragastric inoculation. Infect. Immun. 71, 682-689 (2003).
- Gajendran, N., et al. Regional IFNgamma expression is insufficient for efficacious control of food-borne bacterial pathogens at the gut epithelial barrier. Int. Immunol. 19, 1075-1081 (2007).
- Lecuit, M., et al. A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier. Science. 292, 1722-1725 (2001).
- Pron, B., et al. Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system. Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).
- Wollert, T., et al. Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design. Cell. 129, 891-902 (2007).
- Ghanem, B. o. u., N, E., et al. InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice. PLoS Pathogens. , (2012).
- Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent. Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).
- Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. Listeria monocytogenes – from saprophyte to intracellular pathogen. Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).
- Camejo, A., et al. The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle. Virulence. 2, 379-394 (2011).
