Подготовка и инактивации болезнетворных микроорганизмов из продуктов Double Dose Buffy Coat тромбоцитов помощью перехвата системных крови

1. Всего для сбора крови Соберите цельную кровь от доноров, волонтеров в 450 мл верхнего / нижнего коллекции устанавливает в соответствии с местными руководящими принципами сбора крови. Цельная кровь хранится в течение как минимум 2 часа на охлаждение пластины до центрифугирования и разделения. 2. Buffy Coat подготовка Центрифуга цельной крови при использовании жесткого спина для разделения крови на три слоя: красных кровяных клеток, лейкомассы и плазмы. Центрифуга параметры были использованы 4880 RCF в течение 11 мин при температуре 22 ± 2 ° C. Использование автоматизированных сепаратор крови, чтобы выразить плазмы в верхние сумку спутника и красных кровяных телец (эритроцитов) в нижней сумку спутника, оставив Баффи пальто в коллекции контейнер. Целевая средний объем и гематокрита диапазоны для охристые пальто примерно 48 мл и 37%, соответственно. Охристо-пальто хранятся в ночь на агитатора тромбоцитов на 22 ± 2 ° C. <p class = "jove_title"> 3. Buffy Coat пула Стерильные Connect 7 охристые пальто и 300 мл SSP + тромбоцитов решения добавки (PAS) в поезде конфигурации с параллельными линиями для уменьшения длины поезда; PAS должны быть в верхней части поезда. Clamp линию между ССА и первый слой кровяного сгустка. Откройте стерильную связей между единицами лейкомассы и позволяют охристые пальто, чтобы стекать в последний контейнер. Откройте сварного шва и зажима между ПА и первый слой кровяного сгустка. Разрешить треть добавка раствор для полоскания через каждый из контейнеров лейкомассы последовательно. Повторите еще 2 раза каждый раз используя половину оставшегося PAS. Средняя Баффи пальто бассейна объем должен быть примерно 600 мл. Если объем целевых и гематокрита отдельных слоев Баффи выполнены, плазма соотношение будет 32 – 47%, как требуется для перехвата возбудителя лечение инактивации позже в процессе. Откажитесь от пустых SSP + и Баффипальто контейнеров. Для оптимального восстановления тромбоцитов, сохранить бассейн на агитатором за 1 час до центрифугирования. Стерильные подключить контейнер для хранения тромбоцитов со встроенным фильтром leukoreduction в бассейн Баффи пальто. Выполните «мягкую спина" на бассейн лейкомассы отделить красные кровяные клетки из тромбоцитов в суспензии (462 RCF за 9 мин, 20 сек). Выразите суспензии тромбоцитов с использованием автоматизированной сепаратор крови через leukoreduction фильтр в контейнер для хранения тромбоцитов. Описанные выше требования к обработке убедиться, что суспензии тромбоцитов соответствует спецификациям INTERCEPT обработки 300 мл – 420 мл объема, 2.5-7.0 х 10 11 тромбоцитов дозу, и ≤ 4 х 10 6 / мл эритроцитов. 4. INTERCEPT лечение Выполните INTERCEPT лечение до конца 1-го дня после сбора (день 0, день сбора). Берем INTERCEPT Set обработкас двумя контейнерами для хранения из прозрачного пластика сумке. Стерильные подключить тромбоцитов контейнер подвеска НКТ amotosalen контейнер на INTERCEPT набор обработки. Этикетка INTERCEPT контейнеры, установленные обработки хранения с соответствующей идентификации продуктов крови после местных требований. Повесьте тромбоцитов и разбить сначала нижнюю полую иглу в контейнер amotosalen, позволяя amotosalen решение поступать в освещении контейнер. Пробой верхней полой иглы в контейнере amotosalen позволяет тромбоцитов течь через amotosalen контейнера в контейнер освещения. Аккуратно перемешайте тромбоцитов и amotosalen смеси и выразить воздуха от освещения контейнера в контейнер amotosalen. Выразите небольшое количество тромбоцитов смесь в трубку, заполняя около 4 см трубы. Это гарантирует тромбоцитов в обеих труб и освещение контейнера пройти возбудителя inactivatiна лечение. Уплотнение труб между контейнером для освещения и amotosalen контейнер. Оставьте не более чем примерно на 4 см насосно-компрессорных труб простирается от освещения контейнера. Снять и выбросить пустую тромбоцитов и amotosalen контейнеров и закрыть зажимы на отбор проб мешки. Поместите обработки набора в иллюминатор с подсветкой контейнер в большом отсеке слева и организатор в небольших отсека на правой стороне. С помощью ручного устройства штрих-кода для входа в дар ID, код продукта и обработки набора номера партии в иллюминатор. Закройте металлическую крышку и при появлении запроса на подсветку графического интерфейса, закройте ящик. Нажмите кнопку "Пуск", чтобы начать освещение. После освещение, удалить обработкой множества от осветителя. Подсветка автоматически печатает отчет для лечения обработанных тромбоцитов блока (блоков). Берем контейнеров из организаторов и повесить рlatelets и обработки множества, сломать канюлю на выходе из контейнера освещенности и позволяют тромбоцитов поступать в устройство соединения адсорбции (CAD) контейнер. Забота, чтобы не погнуть пластины CAD, выразить воздух из контейнера CAD в освещении контейнер с помощью плазмы экстрактор. Уплотнение трубы рядом с впускным отверстием контейнера CAD. Удаляют пустой контейнер освещения. Поставьте контейнер CAD с прилагаемыми контейнеры для хранения тромбоцитов на агитатора по крайней мере 6 часов, но не более чем на 16 часа. Это приведет к снижению остаточной amotosalen в концентрации ≤ 2 мкм. После лечения ИБС, удалить тромбоцитов единиц от агитатора. Повесьте тромбоцитов. Перерыв канюли и позволяют тромбоцитов поступать в контейнерах для хранения. Выразите воздух из емкости в емкость CAD. Пусть тромбоцитов остаточного обратного потока концентрата в хранении контейнеровтяжести. Уплотнение трубки над Y-монтаж и удалите пустой контейнер CAD. Распространении объем между контейнеры для хранения по мере необходимости. Объем вносятся корректировки путем взвешивания контейнеров для хранения. Уплотнение трубки к каждой емкости для хранения нескольких сантиметрах над входом в контейнер для хранения, это облегчает получение стерильных образцов из конечного продукта, как описано в 5.2. 5. Продукт дискретизации Для рутинного тестирования QC, окончательное контейнеры для хранения можно попробовать один раз с использованием выборки сумку на хранение контейнеров. Чтобы сделать это, убедитесь, что тромбоцитов устройство хорошо перемешать, затем откройте зажим для мешочек и отжать несколько раз. Уплотнение труб после сумке была наполнена тромбоцитов. Передача тромбоцитов образца в соответствующей трубе лаборатории и выполняют анализы сразу. Для получения образцов в различные моменты времени в течение хранения, например, для проверки исследования, стерильные подключенияновый контейнер отбора проб для труб из контейнера для хранения тромбоцитов. Убедитесь, что тромбоциты хорошо перемешивают до передачи на отбор проб контейнеров. 6. В пробирке функции оценки Для этой проверки исследования, в оценке пробирке была проведена после CAD лечения (день 1 или 2-й день, в зависимости от продолжительности CAD) и снова в День 4 (или 5-й день) и День 7. Экстракорпоральное измерений включены объемы, количество тромбоцитов, рН, газов крови (рО 2, рСО 2), глюкозы, лактата, и закрученной. Том был определен вес, используя 1,01 г / мл, удельный вес тромбоцитов в аддитивной решение. Гемоглобин загрязнения оценивали визуально с помощью сравнения с цветовой шкалой. Swirling определяется визуально. См. "Таблица оборудования» для методологии других анализов. 7. Представитель Результаты Процесс производства Double дозы лейкомассы тромбоцитов начинается с производства отдельных слоев охристый, которые отвечают спецификации для целевого объема и гематокрита. Как это не практично для измерения гематокрита отдельных охристые пальто в течение последних процессе проверки, мы начали проведение отдельного усилия, чтобы оптимизировать наши охристые пальто, чтобы мы могли последовательно выполнить запланированный объем и гематокрита. Как показано в таблице 1, наш оптимизированный для пальто Баффи выгодно, чтобы целевые значения для объема и гематокрита на уровне 46 ± 2 мл и 37 ± 3%, соответственно. После объединения, объем и гематокрита на бассейн Баффи пальто должно быть примерно 600 мл и 20%, соответственно, до мягких центрифугирования спина. Как показано в таблице 2, наши бассейны лейкомассы среднем 615 ± 5 мл; гематокрита среднем 19 ± 1%. Мягкая спина центрифугирование приводит к двойной концентрированной дозы тромбоцитовentrate, который будет соответствовать входным требованиям к инактивации болезнетворных микроорганизмов использования INTERCEPT системы крови DS обработки множества. Основные входные параметры для INTERCEPT лечения включают объемы, количество тромбоцитов, плазмы отношение, РБК содержания. Кроме того, мы стремимся восстановить ≥ 75% тромбоцитов в концентрат тромбоцитов по сравнению с бассейном Баффи пальто. В соответствии с местными требованиями, белых кровяных клеток (WBC) загрязнение должно быть <1×10 6 / ед. Концентратов тромбоцитов в нашей проверки встретились с ключевыми параметрами для автоматической переадресации обращения, а также задачи по версии WBC загрязнения и восстановления тромбоцитов, как показано в таблице 3. INTERCEPT процесс инактивации болезнетворных микроорганизмов осуществляется на двойные дозы тромбоцитов концентрат с помощью единого набора обработки перехватить. Обработка набор содержит два встроенных контейнеров для хранения, которые позволяют рассматривать блок должен быть разбит на два отдельных терапевтических доз тромбоцитов при завершении путиOgen инактивации процесса. Европейские руководящие принципы требуют, чтобы 75% единиц испытания содержат ≥ 200х10 9 тромбоцитов на терапевтическое dose1; местным требованиям в Швеции требуют, что 75% единиц испытания содержат> 240×10 9 тромбоцитов на дозу. После INTERCEPT лечения, среднее содержание тромбоцитов составлял 265 ± 22 x10 9 (N = 24). Кроме того, 88% единиц выполнены или перевыполнены 240×10 9 тромбоцитов в терапевтических дозах, это хорошо в обеих европейских принципов и шведского законодательства. См. рисунки 1 и 2 для иллюстрации двойную дозу препарата охристые пальто и INTERCEPT процессов обработки соответственно. Для этой проверки, мы измерили в пробирке характеристик концентратов тромбоцитов после INTERCEPT лечения (т.е. после раскола в отдельные контейнеры для хранения); параметры измерялись в течение 7 дней хранения. Средние и стандартные отклонения были собраны длятромбоцитов дозу, рН, рО 2, рСО 2, лактата производство и потребление глюкозы. Рисунок 3 показывает среднее, начиная тромбоцитов дозу двойную дозу тромбоцитов концентрата до INTERCEPT лечения и средних доз тромбоцитов в каждой из расщепленных продуктов после INTERCEPT лечение более 7 дней хранения. Тромбоцитов потерь во время хранения составляет примерно 9%. Это сокращение является не отличаются от ожидаемых потерь во время хранения тромбоциты обычных пластинок 2. В таблице 4 приведены характеристики в пробирке из INTERCEPT тромбоцитов после обработки и расщепления на отдельные единицы. По европейским требованиям, рН тромбоцитов должно оставаться выше 6,4 и до конца срока годности. Во время обработки, рН концентратов тромбоцитов снижается незначительно на основе тромбоцитов, концентрации, объема и газопроницаемость тромбоцитов СТОярости контейнер. рисунке 4 показана рН разделения тромбоцитов продукции более 7 дней хранения. Во время хранения, рН является стабильным и хорошо поддерживается в пределах требований к обработке. Как показано на рисунках 5А и 5В, тромбоцитов потребления O 2 и CO 2 производства указывают на продолжающееся дыхания INTERCEPT тромбоцитов в PL2410 контейнере в течение 7 дней хранения. Цифры 6А и 6Б показать лактата и глюкозы в крови за 7 дней хранения . Тромбоцитов потребление глюкозы и лактата согласуются друг с другом в течение 7 дней хранения. 5 единиц был уровень глюкозы менее 1,11 ммоль / л (нижний предел для анализа глюкозы). Подготовка лейкомассы и объединения проверка производится концентратов тромбоцитов, которые отвечают критериям для входа INTERCEPT лечения, а именно, объем, количество тромбоцитов, плазмы отношение, и красный BLдревесины клетки загрязнения. Окончательный единиц встретились критериев оценки более 7 дней хранения в том числе тромбоцитов дозу и рН. Параметр Целевой диапазон Результаты Среднее ± SD Объем (мл) ~ 48 46 ± 2 Гематокрит (%) ~ 37 37 ± 3 Время удержания до объединения Ночевка на агитатора Ночевка на агитатора Таблица 1. Характеристика отдельных Баффи пальто (n = 19). Параметр Целевой диапазон Результаты Среднее ± SD Объем (мл) ~ 600 615 ± 5 Хематocrit (%) ~ 20 19 ± 1 Время удержания перед центрифугированием 1 час на агитатора 1 час на агитатора Таблица 2. Характеристики пальто Баффи бассейны (п = 12). Параметр Цель Результаты Среднее ± SD Объем (мл) 370 – 420 404 ± 8 Количество тромбоцитов (x10 9 / блок) 250 – 700 577 ± 62 Среднее восстановление тромбоцитов (%) ≥ 75 75 ± 4 Плазменные доли (%) 32 – 47 38 ± 1 РБК (x10 6 / мл) ≤ 4 1,2 ± 0,4 WBC (x10 6 </sдо> / блок) ≤ 1 0,11 ± 0,1 Время удержания перед INTERCEPT (HR) ≤ концу 1-й день ≤ концу 1-й день Таблица 3. Характеристики двойной дозы концентратов тромбоцитов (п = 12). Среднее ± SD Мин Макс Объем (мл) 199 ± 16 182 236 Количество тромбоцитов (x10 9 / блок) 265 ± 22 225 292 рН (22 ° C) 6,9 ± 0,1 6,8 7,0 рО 2 (кПа) 21,4 ± 4,8 12,8 27,3 рСО 2 (кПа) 4,3 и плusmn, 0,4 3,3 4,9 Лактата (ммоль / л) 9,1 ± 1,7 6,8 12,4 Глюкоза (ммоль / л) 5,3 ± 0,9 3,7 6,5 Таблица 4. Характеристики INTERCEPT Обработанные Тромбоциты День 1/2 (одной единицы, п = 24). Рисунок 1. Производство концентрата тромбоцитов двойной дозе от бассейна из 7 охристые пальто. Рисунок 2. Инактивации болезнетворных микроорганизмов с двойной концентрат тромбоцитов дозу с INTERCEPT системы крови. Рисунок 3. Средние дозы тромбоцитов до и в течение7 дней после INTERCEPT лечения (п = 12 до INTERCEPT, п = 24 после перехвата). Рисунок 4. Средние тромбоцитов рН ± SD INTERCEPT после лечения (n = 24). Рисунок 5А. Среднее рО 2 ± SD INTERCEPT после лечения (n = 24). На рисунке 5б. Среднее рО 2 ± SD INTERCEPT после лечения (n = 24). Рисунок 6А. Средний уровень лактата ± SD INTERCEPT после лечения (n = 24). Рисунок 6B. Средние уровни глюкозы иplusmn; SD после лечения INTERCEPT (п = 24).