巴菲大衣血小板制品双倍剂量使用INTERCEPT血液系统的制备和病原体灭活

1。全血收集根据当地采血准则的收集全血无偿献血者在450毫升的顶部/底部收集组。 的全血被存储为至少2小时，离心分离，分离前的冷却板。 2。巴菲大衣准备离心的全血，使用硬的自旋分为三层：红血细胞，血沉棕黄层，和血浆分离血液。离心机使用的参数为4,880 RCF为11分钟，在22±2°C。 使用自动化的血液分离表达到顶端的的卫星袋和进入底部的卫星袋的红血细胞（RBC）的血浆的收集容器中，留下的血沉棕黄层。目标平均体积和红细胞压积范围为棕黄色大衣约48毫升和37％，分别为。 棕黄色的大衣，存放过夜血小板搅拌器在22±2°C。 <p clas="“jove_title”"> 3。巴菲大衣池无菌连接7棕黄色大衣和300毫升的SSP +血小板添加剂溶液（PAS）与平行线的列车编组列车的长度，以减少PAS应在顶部的火车。夹线之间的PAS和棕黄色大衣。 打开无菌的棕黄色大衣单位之间的连接，并允许排入的棕黄色大衣的最后一个容器。 打开焊缝和夹具之间的PAS和棕黄色大衣。允许三分之一的添加剂溶液的冲洗顺序通过每个的血沉棕黄层容器。重复2次以上，每次使用一个一半的剩余PAS。 平均棕黄色大衣池体积应为约600毫升。如果目标，满足个人的棕黄色大衣的体积和红细胞压积，血浆比是32 – 47％用于拦截病原体灭活后治理的过程中。 丢弃的空SSP +和Buffy外套的容器。 为了获得最佳的血小板回收，保持池在搅拌1小时，离心分离前。 无菌连接血小板的存储容器，综合性白血球过滤器的棕黄色大衣池。 执行一个“软自旋”血沉棕黄层池分开的红血细胞中的血小板悬浮液（462 RCF 9分钟，20秒）。通过去白细胞过滤器的自动血液分离的​​血小板储存容器中表达的血小板悬液。 先前描述的处理要求确保的血小板悬浮液符合INTERCEPT处理规格为300毫升- 420毫升体积，2.5-7.0×10 11个血小板的剂量，和≤4×10 6个 / ml的红细胞。 4。截取处理在年底前集合后第1天（第0天是集合的日子）进行拦截处理。 拆开INTERCEPT设置的处理从透明的塑料包装袋的双存储容器。 无菌连接管的amotosalen容器的拦截处理组的血小板悬液容器。 按照当地的要求与适当的血液产品标识，标记拦截处理组的存储容器。 杭血小板和打破第一上amotosalen容器的底部套管，照明容器允许的amotosalen的溶液流入。打破上amotosalen允许血小板流动到照明容器通过amotosalen容器的容器顶端插管。 轻轻地混合的血小板和amotosalen混合物，并表示将空气从照明容器到amotosalen容器。 表达少量血小板混合物进入管件，填充约4厘米的油管。这可确保在油管和照明容器中的血小板进行病原体inactivati在接受治疗。 密封在照明容器和amotosalen容器之间的管子。留下不超过约4厘米的管道，从照明容器延伸。拆下并丢弃空血小板和amotosalen的容器和关闭采样袋的夹子。 左边大隔室容器中，并与照明的组织者中的小室的右侧，将到照射器的处理集合。 使用手持式条形码的移动设备进入到照射器的捐赠ID，产品代码，和处理集合特定号码。关闭的金属盖和照明的图形界面上提示时，关上抽屉。按“开始”开始的照明。 照明灯照明后，删除处理集合。照明器会自动打印处理后的血小板单元（S）的治疗报告。 拆开容器的组织者和挂在Platelets和处理集合，打破插管的照明容器的出口处，并允许血小板流入的化合物的吸附装置（CAD）的容器。 小心不要弯曲CAD晶片，表达的照明容器使用血浆中提取的CAD容器中的空气。 密封的管子的CAD容器的进气口附近。删除和丢弃的空照明容器。 将CAD连接的存储容器，容器上的血小板的搅拌器为至少6小时，但不超过16小时。这将导致在≤2μM的浓度残余amotosalen减少。 CAD处理后，去除血小板单位的搅拌器。杭血小板。额的套管和允许血小板流入的存储容器。 表达到CAD中容器中的空气从所述存储容器。让残留的血小板浓缩液流回进入储存容器的重力。以上的Y型接头和密封管，取出空的CAD容器。 重新分配的存储容器中，作为需要之间的容积。量的调整是由重的存储容器。密封管子的存储容器的入口上方几厘米，每个储存容器，这有利于从最终产品中，如5.2中所述获得的无菌样品。 5。产品抽样对于常规QC测试，最终的储存容器可以被采样一次，通过使用采样袋上的存储容器。要做到这一点，确保血小板的单位是充分混合，然后打开夹子，去眼袋，挤几次。密封管后袋盛满了血小板。血小板样品转移到一个适当的实验室管，并立即进行分析。 为了获得样品在不同的时间点，例如在存储过程中的验证研究，无菌连接一个新的取样容器的血小板的收纳容器的管。确保充分混合血小板前转移到取样容器。 6， 在体外功能评价对于此验证研究， 在体外评价进行了CAD治疗（1天或2天，根据CAD时间）后，再在第4天（或第5天）和第7天。 在体外测量体积，血小板计数，pH值，血气（PO 2，PCO 2），葡萄糖，乳酸和旋转。 卷使用添加剂溶液中血小板的比重为1.01克/毫升作为重量确定。 对血红蛋白污染视觉评估使用彩色图表比较。 旋流目测。 请参见“表”其他实验方法的设备。 7。代表性的成果生产D的过程中开始强强连手剂量棕黄色大衣血小板与个人满足目标规格的棕黄色大衣的体积和红细胞压积生产。因为它是不实际的测量血细胞比容的个人棕黄色大衣在最后的工艺验证，我们开始进行单独的努力，以优化我们的棕黄色大衣，以确保我们能够不断满足目标量和红细胞压积。如表1中所示，我们的优化的血沉棕黄外套相比，毫不逊色，在46±2毫升和37±3％，分别为两个音量和血细胞比容值的目标值。 池，后的体积和血细胞比容的血沉棕黄层池应该是约600毫升和20％，分别为前软自旋离心。如表2中所示，我们的血沉棕黄层池平均615±5毫升，平均血细胞比容19±1％。 在双倍剂量的血小板浓度的软旋转离心结果entrate，将满足输入的要求病原体灭活利用INTERCEPT血液系统DS处理组。 INTERCEPT治疗的主要输入参数包括体积，血小板计数，血浆比，RBC内容。此外，我们的目标是回收相比，≥75％的血小板浓缩物中的血小板的血沉棕黄层池。根据当地的要求，白细胞（WBC）的污染必须<1×10 6 /单位。浓缩血小板在我们的验证，达到了关键参数INTERCEPT治疗以及白细胞的污染和血小板的恢复，如表3所示的目标。 INTERCEPT病原体的失活过程进行双倍剂量的血小板浓缩液使用一个单一的INTERCEPT处理组。处理集合包含两个整体的存储容器允许处理单元完成的路径被分裂成两个单独的治疗性血小板剂量ogen失活过程。欧洲指引规定，75％的单元测试包含≥200×9血小板每治疗dose1的;在瑞典当地的要求，需要有75％的单元测试包含> 240×10 9血小板每剂量。截取后的治疗，平均血小板含量为265±22×10 9组（n = 24）。此外，88％的单位达到或超过240×10 9血小板每治疗量，这是在欧洲的准则和瑞典法规。双倍剂量的棕黄色大衣准备和INTERCEPT处理过程的说明，请参阅图1和图2。 此验证中，我们测量后，的INTERCEPT治疗后分割成单个存储容器（ 即 ）浓缩血小板体外特性的参数进行测量，存储超过7天 ​​。均值和标准差收集血小板剂量，pH值，PO 2，PCO 2，乳酸的生产和葡萄糖消耗。 图3显示了平均起始血小板剂量的双倍剂量的血小板浓缩液INTERCEPT超过7天 ​​的存储处理后，在每个分割产品INTERCEPT治疗前和血小板平均剂量。血小板在储存过程中损失了约9％。这种减少是在储存过程中的常规的血小板。2不同于预期的血小板损失 表4总结了在体外的INTERCEPT血小板治疗后和分裂成单个单元的特点。 每欧洲的要求，血小板的pH值必须保持高于6.4，通过端部的保质期。在处理过程中，血小板浓缩物的pH值略有下降的基础上的血小板浓度，体积，和气体渗透性的血小板STO愤怒容器。 图4示出分割血小板产品的pH值超过7天 ​​的存储。在存储过程中，pH值是稳定和内保持良好的加工要求。 如示于图5A和5B，血小板的O 2的消耗和CO 2生产表明持续呼吸由INTERCEPT血小板的PL2410容器中储存7天的期间， 图6A和6B示出的乳酸和葡萄糖水平超过7天 ​​的存储。血小板葡萄糖消耗和乳酸生产的是彼此一致的，在7天的存储。 5个单位的血糖水平小于1.11毫摩尔/升（用于葡萄糖测定的下限）。 棕黄色涂层的制备及浓缩池验证血小板，符合输入条件，INTERCEPT治疗，具体而言，体积，血小板计数，血浆比，红色blOOD细胞污染。最后的单位符合验证标准的存储空间，包括血小板剂量和pH值超过7天。 参数 目标范围 结果平均值±标准差 体积（ml） 〜48 46±2 血细胞比容（％） 〜37 37±3 保持时间前池夜宿于搅拌器夜宿于搅拌器 表1。个人捉鬼大衣（N = 19）。 参数 目标范围 结果平均值±标准差 体积（ml） 〜600 615±5 Hematocrit（％） 〜20 19±1 保持时间在离心前 1小时搅拌器 1小时搅拌器 表2。捉鬼大衣池“（N = 12）。 参数 目标 结果平均值±标准差 体积（ml） 370 – 420 404±8 血小板计数（×10 9 /单位） 250 – 700 577±62 血小板平均回收率（％） ≥75 75±4 等离子比率（％） 32 – 47 38±1 RBC（×10 6个 /毫升） ≤4 1.2±0.4 WBC（×10 6 </s向上> /单位） ≤1 0.11±0.1 保持时间前INTERCEPT（小时） ≤1日结束 ≤1日结束 表3。双倍剂量的血小板浓缩物（N = 12）。 平均值±标准差 最小 最大 体积（ml） 199±16 182 236 血小板计数（×10 9 /单位） 265±22 225 292 pH值（22°C） 6.9±0.1 6.8 7 宝2（千帕） 21.4±4.8 12.8 27.3 二氧化碳分压（千帕） 4.3及PLusmn 0.4 3.3 4.9 乳酸（毫摩尔/升） 9.1±1.7 6.8 12.4 血糖值（mmol / l）的 5.3±0.9 3.7 6.5 表4。INTERCEPT治疗血小板日1/2（单单元，n = 24）。 图1。生产的双倍剂量的浓缩血小板从池中7棕黄色大衣。 图2。INTERCEPT血液系统双倍剂量的浓缩血小板与病原体灭活。 图3。前平均血小板剂量和INTERCEPT治疗后第7天（截取前N = 12，N = 24后INTERCEPT）。 图4。平均血小板的pH值±SD后的INTERCEPT治疗组（n = 24）。 图5A，平均PO 2±SD后的INTERCEPT治疗组（n = 24）。 图5B后的INTERCEPT治疗组（n = 24），平均PO 2±SD。 图6A，平均乳酸水平±SD后的INTERCEPT治疗组（n = 24）。 图6B。平均血糖水平及plusmn; SD截取后的治疗组（n = 24）。