Summary

Appetitive Assoziative olfaktorischen Lernens in<em> Drosophila</em> Larven

Published: February 18, 2013
doi:

Summary

Drosophila-Larven sind in der Lage, um Geruch Reize mit geschmackliche Belohnung assoziieren. Hier beschreiben wir eine einfache Verhaltensänderungen Paradigma, das die Analyse von appetitive assoziative olfaktorische Lernen ermöglicht.

Abstract

Im Folgenden beschreiben wir die methodischen Einzelheiten der appetitive assoziative olfaktorische Lernen in Drosophila-Larven. Das Setup in Kombination mit genetischen Störungen, bietet ein Handle auf die neuronale und molekularen Grundlagen von speziell assoziativen Lernens in einer einfachen Larven Gehirns zu analysieren.

Organismen können Erfahrungen aus der Vergangenheit zu präsentieren Verhalten anzupassen. Solche Akquisition von Verhaltensstörungen Potential kann als Lernen definiert werden, und die physikalischen Grundlagen dieser Potentiale als Gedächtnisspuren 1-4. Neurowissenschaftler versuchen zu verstehen, wie diese Prozesse im Hinblick auf die molekularen und neuronalen Veränderungen im Gehirn werden durch eine Vielzahl von Methoden im Modell Organismen von Insekten Wirbeltiere 5,6 organisiert. Für diese Bemühungen ist es hilfreich, Modellsysteme, die einfach und experimentell zugänglichen verwenden. Die Drosophila Larve hat sich diese Anforderungen auf Basis erfüllen sichdie Verfügbarkeit von robusten Verhaltens-Assays, die Existenz einer Vielzahl von transgenen Techniken und der elementaren Organisation des Nervensystems, die nur etwa 10.000 Neuronen (wenn auch mit einigen Zugeständnissen: kognitive Einschränkungen, nur wenige Handlungsoptionen, und den Reichtum der Erfahrungen fraglich) 7-10 .

Drosophila-Larven bilden können Assoziationen zwischen Gerüchen und appetitive geschmackliche Verstärkung wie Zucker 11-14. In einem Standardtest, gegründet im Labor von B. Gerber, erhalten Tiere eine zwei-Geruch gegenseitige Ausbildung: Eine erste Gruppe von Larven zu einer Geruchs A zusammen mit einer geschmacklichen Verstärker (Zucker Belohnung) ausgesetzt und anschließend zu einem Geruch ausgesetzt B ohne Verstärkung 9. Unterdessen eine zweite Gruppe von Larven empfängt reziproken Ausbildung aber gleichzeitig mit Geruch A ohne Verstärkung und nachfolgend um Geruch B mit Verstärkung (Zucker Belohnung) ausgesetzt. In den folgenden beiden Gruppen sind tesTed für ihre Präferenz zwischen den beiden Gerüche. Relativ höhere Präferenzen für den belohnten Duft spiegelt assoziativen Lernens – präsentiert als Performance-Index (PI). Die Schlussfolgerung in Bezug auf die assoziative Natur des Performance-Index ist überzeugend, denn abgesehen von der Kontingenz zwischen Gerüche und Geschmacksstoffe auch andere Parameter, wie Geruch und Belohnung Belichtung Laufe der Zeit und Handhabung nicht zwischen den beiden Gruppen 9 unterscheiden.

Protocol

Ein. Vorbereitung Drosophila Wildtyp-Larven werden bei 25 ° C erhöht und 60% -80% Luftfeuchtigkeit in einem 14/10 Licht / Dunkel-Zyklus. Für die Steuerung das genaue Alter der Larven immer 20 Frauen sind mit 10 Männern in einem Fläschchen (6 cm Höhe und 2,5 cm Durchmesser), die etwa 6 ml Standard fly Essen beinhaltet setzen. Fliegen werden dürfen Eier für 12 h lag und in ein neues Fläschchen am zweiten Tag übertragen. 5-6 Tage nach der Eiablage Larven erreichen die Fütterung 3 rd</sup…

Representative Results

1A zeigt einen Überblick über die experimentellen Verfahren für die Larven olfaktorischen assoziativen Lernens. Durch Koppeln eines der beiden vorgestellten Gerüche mit einem Zucker Belohnung Larven erfassen das Verhalten Potential, um ein attraktives Verhalten gegenüber dem belohnten Duft im Vergleich zum unbelohnt Geruch abzugeben. Zwei Gruppen von Larven sind immer entweder durch Paarung der Verstärker mit dem Geruch Oktober oder AM geschult. Die Leistung (PI) misst die assoziativen Funktion al…

Discussion

Die beschriebene Einrichtung in Drosophila-Larven erlaubt die Untersuchung von assoziativen Lernen olfaktorischen innerhalb eines vergleichsweise elementaren Gehirn. Der Ansatz ist einfach, billig, einfach, in einem Labor zu etablieren und benötigt keine High-Tech-Ausrüstung 9. Wir präsentieren eine Variante des Experiments, um appetitive assoziativen Lernens durch Fructose Belohnung 11 verstärkt zu studieren. Die beschriebene Setup basiert auf einer Reihe von parametrischen Stud…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir wollen vor allem die Mitglieder des Gerber Labor für technische Anleitungen auf ihren Versuchsaufbau und Anmerkungen zum Manuskript danken. Wir danken auch Lyubov Pankewytsch für Fliegenfischer Pflege und Wartung des Wildtyp Kantonen Lager. Diese Arbeit wird von der DFG-Stipendium TH1584/1-1 der SNF Gewährung 31003A_132812 / 1 und das Zukunftskolleg der Universität Konstanz (alle AST) unterstützt.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number CAS number
Fructose Sigma 47740 57-48-7
NaCl Fluka 71350 7647-14-5
Agarose Sigma A5093 9012-36-6
1-octanol Sigma 12012 111-87-5
Amylacetate Sigma 46022 628-63-7
Paraffin oil Sigma 18512 8012-95-1

Referências

  1. Pawlow, I. P. New Researches on Conditioned Reflexes. Science. 58, 359-361 (1923).
  2. Heisenberg, M. Mushroom body memoir: from maps to models. Nat. Rev. Neurosci. 4, 266-275 (2003).
  3. Kandel, E. R. Cellular insights into behavior and learning. Harvey Lect. 73, 19-92 (1979).
  4. Gerber, B., Tanimoto, H., Heisenberg, M. An engram found? Evaluating the evidence from fruit flies. Curr. Opin. Neurobiol. 14, 737-744 (2004).
  5. Milner, B., Squire, L. R., Kandel, E. R. Cognitive neuroscience and the study of memory. Neuron. 20, 445-468 (1998).
  6. Keene, A. C., Waddell, S. Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits. Nat. Rev. Neurosci. 8, (2007).
  7. Duffy, J. B. GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist’s Swiss army knife. Genesis. 34, 1-15 (2002).
  8. Gerber, B., Stocker, R. F., Tanimura, T., Thum, A. S. Smelling, tasting, learning: Drosophila as a study case. Results Probl. Cell. Differ. 47, 139-185 (2009).
  9. Gerber, B., Stocker, R. F. The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review. Chem. Senses. 32, 65-89 (2007).
  10. Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly. Neuron. 72, 202-230 (2011).
  11. Gerber, B., Hendel, T. Outcome expectations drive learned behaviour in larval Drosophila. Proc. Biol. Sci. 273, 2965-2968 (2006).
  12. Schleyer, M., et al. A behavior-based circuit model of how outcome expectations organize learned behavior in larval Drosophila. Learn Mem. 18, 639-653 (2011).
  13. Pauls, D., Selcho, M., Gendre, N., Stocker, R. F., Thum, A. S. Drosophila larvae establish appetitive olfactory memories via mushroom body neurons of embryonic origin. J. Neurosci. 30, 10655-10666 (2010).
  14. Selcho, M., Pauls, D., Han, K. A., Stocker, R. F., Thum, A. S. The role of dopamine in Drosophila larval classical olfactory conditioning. PLoS One. 4, e5897 (2009).
  15. Neuser, K., Husse, J., Stock, P., Gerber, B. Appetitive olfactory learning in Drosophila larvae:effects of repetition, reward strength, age, gender, assay type and memory span. Animal Behaviour. 69, 891-898 (2005).
  16. Scherer, S., Stocker, R. F., Gerber, B. Olfactory learning in individually assayed Drosophila larvae. Learn Mem. 10, 217-225 (2003).
  17. Aceves-Pina, E. O., Quinn, W. G. Learning in normal and mutant Drosophila larvae. Science. 206, 93-96 (1979).
  18. Heisenberg, M., Borst, A., Wagner, S., Byers, D. Drosophila mushroom body mutants are deficient in olfactory learning. J. Neurogenet. 2, 1-30 (1985).
  19. Khurana, S., Abu Baker, M. B., Siddiqi, O. Odour avoidance learning in the larva of Drosophila melanogaster. J. Biosci. 34, 621-631 (2009).
  20. Pauls, D., et al. Electric shock-induced associative olfactory learning in Drosophila larvae. Chem. Senses. 35, 335-346 (2010).
  21. Eschbach, C., et al. Associative learning between odorants and mechanosensory punishment in larval Drosophila. J. Exp. Biol. 214, 3897-3905 (2011).
  22. von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae. Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).
  23. Gerber, B., et al. Visual learning in individually assayed Drosophila larvae. J. Exp. Biol. 207, 179-188 (2004).
  24. Rohwedder, A., et al. Nutritional Value-Dependent and Nutritional Value-Independent Effects on Drosophila melanogaster Larval Behavior. Chem. Senses. , (2012).
  25. Lee, T., Lee, A., Luo, L. Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast. Development. 126, 4065-4076 (1999).
  26. Ito, K., et al. The organization of extrinsic neurons and their implications in the functional roles of the mushroom bodies in Drosophila melanogaster Meigen. Learn Mem. 5, 52-77 (1998).
  27. Wang, J., et al. Transmembrane/juxtamembrane domain-dependent Dscam distribution and function during mushroom body neuronal morphogenesis. Neuron. 43, 663-672 (2004).
  28. Robertson, K., Mergliano, J., Minden, J. S. Dissecting Drosophila embryonic brain development using photoactivated gene expression. Dev. Biol. 260, 124-137 (2003).
  29. Zhou, L., et al. Cooperative functions of the reaper and head involution defective genes in the programmed cell death of Drosophila central nervous system midline cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 5131-5136 (1997).
  30. Kitamoto, T. Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons. J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).
  31. Schroll, C., et al. Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae. Curr. Biol. 16, 1741-1747 (2006).
  32. Rosenzweig, M., et al. The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis. Genes Dev. 19, 419-424 (2005).
  33. Baines, R. A., Uhler, J. P., Thompson, A., Sweeney, S. T., Bate, M. Altered electrical properties in Drosophila neurons developing without synaptic transmission. J. Neurosci. 21, 1523-1531 (2001).
  34. Chen, Y. C., Mishra, D., Schmitt, L., Schmuker, M., Gerber, B. A behavioral odor similarity “space” in larval Drosophila. Chem. Senses. 36, 237-249 (2011).
  35. Saumweber, T., Husse, J., Gerber, B. Innate attractiveness and associative learnability of odors can be dissociated in larval Drosophila. Chem. Senses. 36, 223-235 (2011).
  36. von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae. Behav. Neurosci. , (2011).
  37. Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. Induction of cAMP response element-binding protein-dependent medium-term memory by appetitive gustatory reinforcement in Drosophila larvae. J. Neurosci. 25, 7905-7913 (2005).
  38. Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. Distinctive neuronal networks and biochemical pathways for appetitive and aversive memory in Drosophila larvae. J. Neurosci. 29, 852-862 (2009).
  39. Khurana, S., et al. Olfactory Conditioning in the Third Instar Larvae of Drosophila melanogaster Using Heat Shock Reinforcement. Behav. Genet. 42, 151-161 (2012).
  40. Tully, T., Cambiazo, V., Kruse, L. Memory through metamorphosis in normal and mutant. 14, 68-74 (1994).
  41. Michels, B., et al. Cellular site and molecular mode of synapsin action in associative learning. Learn Mem. 18, 332-344 (2011).
  42. Saumweber, T., et al. Behavioral and synaptic plasticity are impaired upon lack of the synaptic protein SAP47. J. Neurosci. 31, 3508-3518 (2011).
  43. Pfeiffer, B. D., et al. Refinement of tools for targeted gene expression in Drosophila. Genética. 186, 735-755 (2010).
  44. Rosenzweig, M., Kang, K., Garrity, P. A. Distinct TRP channels are required for warm and cool avoidance in Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 14668-14673 (2008).

Play Video

Citar este artigo
Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae. J. Vis. Exp. (72), e4334, doi:10.3791/4334 (2013).

View Video