Ceratite herpética recorrente Estroma em camundongos, um modelo para estudar HSK Humanos
Summary
A maioria dos estudos de doença herpética corneal utilizar um modelo de infecção primária. No entanto, a infecção primária por HSV-1 normalmente não conduzem à doença humana. Aqui nós descrevemos um modelo recorrente de doenças da córnea herpética, que mais imita a doença humana.
Abstract
Doença ocular herpética, denominado ceratite herpética estromal (HSK), é uma infecção potencialmente ofuscante da córnea, que resulta em mais de 300.000 por ano visitas clínicas para o tratamento. Entre 1 e 2 por cento dos pacientes com doença clínica vai ocorrer perda de visão da córnea infectada. A grande maioria destes casos é o resultado da reactivação de uma infecção latente pelo vírus herpes simplex tipo I, vírus e não devido a doença aguda. Curiosamente, a infecção aguda é o modelo mais usado para estudar essa doença. No entanto, considerou-se que um modelo recorrente de HSK seria mais reflexivo do que ocorre durante a doença clínica. Os modelos animais recorrentes para HSK ter empregado dois coelhos e ratos. A vantagem é que os coelhos que experimentam a reactivação da latência na ausência de qualquer estímulo conhecido. Dito isto, torna-se difícil explorar o papel que muitos factores imunológicos desempenham na HSK recorrente, porque o modelo de coelho não tem o immunrecursos genéticos e fisiológicos que o mouse possui. Optamos por utilizar o modelo de mouse para HSK recorrente porque tem a vantagem de haver muitos recursos disponíveis e também sabemos quando reativação ocorrerá porque a reativação é induzida pela exposição à luz UV-B. Até agora, este modelo tem permitido os laboratórios de usá-lo para definir vários fatores imunológicos que são importantes para esta doença. Também permitiu-nos testar a terapêutica e a eficácia da vacina.
Protocol
Discussion
O modelo de repetição de ceratite herpética estromal (HSK) aqui descrito permite ao investigador para estudar HSK humano num modelo que é mais consistente com o que é observado durante a doença humana. Assim, as intensidades do modelo são a doença que ocorre no contexto de um sistema imunitário que tem já por estimulado durante a doença primária. Uma vez que estes ratos já têm uma resposta imune contra HSV-1, os factores que reativam resposta imunitária que provavelmente diferentes daqueles que originalme…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Jay Pepose para ajudar ensinando o modelo para nós. Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health Grants EY11885 (SPM), EY21247 (SPM) e uma concessão irrestrita de Pesquisa para prevenir a cegueira para o Departamento de Oftalmologia.
Materials
| DMEM | Sigma | D5796 |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11150 |
| Human Serum | Sigma | S7023 |
| L-Glutamine | Cellgro | 25-005-C1 |
| Pen/ Strep | Sigma | P4333 |
| Fungizone | Invitrogen | 15290018 |
| Centrifuge | Sorvall | Legend RT |
| Centrifuge | Beckman | 52-21 |
| Transilluminatior | UVP | 95-0452-02 |
| Sonicatior | Branson | Sonifier 450 |
| Oak Ridge Tubes | Nalgene | Z 720410 |
| Flasks- 7150 | Corning | 430823 |
| Plates- 12 well | Corning | CLS 3513 |
| Plates- 48 well | Corning | CLS 3548 |
| Sterile Conical Tubes- 30 ml | Corning | CLS 430828 |
| Sterile Cotton-tipped Applicators | Fisher | 23-400-125 |
| 30G Needles | Becton-Dickinson | 305106 |
| 25G Needles | BD | 305122 |
| 10 ml Syringe | BD | 309602 |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 |
Referências
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
- Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
- Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
- Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
- Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
- Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
- Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
- Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
- Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
- Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
- Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
- Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
- Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
- Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).
