测量抗体乳鼠心肌细胞对细胞功能的影响

扩张型心肌病（DCM）是在年轻的成年人¹心脏衰竭的主要原因之一。虽然遗传倾向和博览会的有毒物质被称为的起源DCM，约三分之一的患者对本病的原因，在很大程度上仍然不清楚。在这些患者中有相当多的，已经对心脏表位抗体检测和怀疑本病的发生和发展^2,3中发挥了举足轻重的作用。心脏自身抗体的重要性，强调消除自身抗体的免疫吸附^3-5后，在DCM患者血流动力学的改善。已经被确定各种特异性抗原^2,3和针对这些目标的抗体，可以通过免疫测定法检测。然而，这些方法不能区分刺激（及因此功能有效）和阻断自身抗体。有越来越多的evidenCE，这种区别是非常重要的^6,7。它也可以被假定，若干心性抗体的目标仍然是身份不明，因此不能检测由免疫测定法。因此，我们建立了功能活性的心性的抗体，独立的各自的抗原的检测方法。用于该方法的背景是通常观察到的功能区域心脏蛋白在哺乳动物^8,9之间的高同源性。这表明，心脏针对人的抗原的抗体与非人类的靶细胞，它允许测试从DCM患者对成年大鼠心肌细胞的IgG交叉反应。我们的方法包括3个步骤：第一，IgG抗体是从病人的血浆，使用琼脂糖凝胶偶联的抗-IgG抗体，从免疫吸附的列（德国，Teterow PlasmaSelect）得到分离。二，成人的心肌细胞分离胶原酶灌注在Langendorff灌流装置，使用AP议定修改以前的作品^10,11。将得到的心肌细胞的附着层粘连蛋白涂层的腔coverglasses和染色的Fura-2，钙的选择性荧光染料，该染料可以容易地进入细胞，观察细胞内钙（Ca ^{2 +）}含量^12。在最后一步中，病人的IgG的效果上的细胞缩短和Ca ^{2 +}瞬变字段刺激心肌在线监视使用市售的细胞钙和收缩监测系统（IonOptix，弥尔顿，MA，USA）连接到一个标准的逆荧光显微镜。