Soins et entretien réguliers d'un poisson zèbre (<em> Danio rerio</em>) Laboratoire: An Introduction

1. Maintenance du système Le poisson zèbre sont conservés dans un système de circulation que les filtres en continu et aère l'eau du système pour maintenir la qualité de l'eau requise pour un environnement aquatique sain. Le système de circulation permet également de filtrer l'excès de nourriture et les excréments des poissons. Différentes entreprises de fournir des systèmes de poisson zèbre, mais nous utilisons des systèmes d'habitats aquatiques, USA, notre laboratoire. La température ambiante ou la température du réservoir est généralement maintenue entre 26 à 28,5 ° C et les conditions d'éclairage sont 14:10 h (lumière: obscurité). Un système de poisson-zèbre habitats aquatiques (par exemple, le système de table) Frais de ~ 9.000 USD. Ce système de table avec deux étagères peut contenir six 10 litres, douze de 3 litres, soit vingt de 1,5 litres réservoirs sur chaque étagère. Plusieurs lignes de poissons (par exemple, transgénique, mutant, type sauvage) peuvent également être hébergés sur le même système. Un ensemble de différents types de filtres sont utilisés dans le système. Dans notre système, l'eau de tous les réservoirs passes par un 120-microns tampon filtrant, 50-micron Cartouche de filtre, filtre biologique, l'absorption du carbone actif désinfection UV et filtre filtre avant d'être remis en circulation dans le réservoir. De-chlorinated/aged eau est utilisée dans le système de poisson-zèbre. L'eau peut être dé-chlorée par le vieillissement pendant au moins 48 heures. Dans des conditions idéales, l'eau doit être conservée dans un réservoir avec une pompe de circulation de l'eau pour le garder chaud, et d'accélérer le dé-chloration. Le pH de l'eau du système doivent être contrôlés quotidiennement et maintenu entre 6,8 et 7,5. Le cas échéant, de bicarbonate de sodium doit être utilisé pour augmenter le pH. Réservoirs de poissons doivent être nettoyés régulièrement. Pour nettoyer un réservoir de poissons, fermer le débit d'eau dans ce réservoir, vider l'excès d'eau en inclinant le réservoir vers l'arrière et retirez soigneusement le réservoir du système. La croissance des algues et la saleté sera apparent sur le fond et les côtés de la cuve. Placez le déflecteur dans un réservoir propre, et remplir avec de l'eau chlorée de (aka Système water). Transférer délicatement le poisson dans ce réservoir avec un filet de pêche. Fermer le couvercle et transférer le nom de tag dans le réservoir. Placez soigneusement le réservoir propre dans le système et de l'alimentation en eau. Pour décontaminer le filet de pêche, spray avec de l'éthanol à 70%, rincer à l'eau et laisser sécher avant de la réutiliser. Retirez le déflecteur du réservoir sale et pulvériser les deux parties avec de l'éthanol à 70%. Rincer abondamment avec de l'eau du robinet et laisser le réservoir et le déflecteur sécher complètement avant de la réutiliser. Les filtres du système de circulation doivent être vérifiés et changés régulièrement pour s'assurer de leur bon fonctionnement. Ces filtres doivent être changés régulièrement pour assurer un approvisionnement adéquat de l'eau propre et à tous les aquariums. Le pavé de 120 microns est généralement déplacés ou remplacés tous les jours; repositionner vers l'écoulement de l'eau pour l'utiliser complètement avant de le remplacer par un nouveau. Le filtre Canister doit être changé chaque semaine. Pour changer le filtre à cartouche, retirez le filtre en le tournant fourmiiclockwise avec une clé ou les mains. Placez une feuille de plastique ou une serviette en dessous pour éviter ou absorber les déversements d'eau. Remplacez le filtre à cartouche par une neuve puis remonter le filtre à l'unité dans le système, serrez soigneusement les mains et une clé si nécessaire. Le filtre à charbon doit être remplacé tous les quinze jours (toutes les deux semaines). Pour changer le filtre à charbon, retirez l'unité de filtre à charbon soigneusement avec une clé. Jeter le carbone actif utilisé et le remplacer par du charbon actif neuf. Remonter le porte-balai et le placer dans l'unité de filtration. Remettre le filtre à l'unité dans le système. Allumez le système et vérifiez que l'eau coule dans le filtre. Si nécessaire, rincer un peu d'eau dans les tuyaux pour nettoyer la saleté dans les tuyaux avant de reposer le filtre dans le système. Le filtre biologique doit être nettoyé tous les six mois. Un filtre biologique est généralement située entre le réservoir et le filtre de carbone dans le système de circulation. Pour changer le filtre biologique, remove l'unité de filtration à partir du système. Relâchez la pression du filtre en appuyant sur le bouton de dégagement de pression. Dévisser le filtre avec une clé. En général, deux personnes sont nécessaires pour cette étape. Retirez le couvercle de l'unité filtre. Vider le contenu du filtre dans un récipient tamisée pour séparer la siporax de l'eau. Remarque: siporax est une amende pores bio-filtre des médias qui a la capacité de réaliser la nitrification et la dénitrification. Si le siporax est très sale, le remplacer par une nouvelle. Remplir le filtre avec de l'eau du système (de l'eau chlorée), fermer le couvercle, retourner l'appareil au système de filtre et mettez l'approvisionnement en eau. Remarque: Dans un aquarium acclimaté, le siporax sera le foyer de plusieurs bactéries nitrifiantes. Ces micro-organismes sont essentiels pour le maintien du cycle de l'azote dans l'aquarium, et retirer le boîtier principal pour le filtre biologique (le siporax sale) pourrait entraîner un pic d'ammoniaque grave, suivie d'un pic de nitrite alors que le new filtre biologique (avec siporax nouveau) est le rétablissement. Ces deux états intermédiaires du cycle de l'azote peut être toxique pour les organismes aquatiques, et peut tuer les poissons zèbres s'il n'est pas répondu de façon appropriée. Par conséquent, il est important d'avoir un filtre biologique secondaire ailleurs dans le système de logement poisson zèbre (par exemple, dans le réservoir de collecte dans le système habitats aquatiques) afin de permettre le repeuplement rapide de ces micro-organismes importants sur le siporax nouvelle. Les filtres UV sont utilisés pour contrôler les contaminants biologiques système (comme les bactéries) et doit être remplacé tous les mois neuf à dix. Il convient de noter que le taux filtre UV dose de désinfection est ~ 110 mJ / cm 2 au début de la vie de la lampe et le débit de dose diminue au cours du temps, il est donc nécessaire de remplacer le monde même quand il semble être encore en fonctionnelle. 2. Alimentation Le poisson zèbre peut être alimenté avec des aliments secs (taille de 100 microns alimentaire pour les larves to 300/400 microns pour les poissons adultes) ou des aliments vivants (crevettes de saumure). Saumure de crevettes (Artemia sp.) Œufs sont disponibles dans les animaleries locales et peuvent éclore dans le laboratoire en suivant les étapes simples décrites ci-dessous. Dissoudre le sel dans l'eau de mer rouge vieilli en plaçant le becher avec du sel sur un agitateur magnétique pour une meilleure solubilité. En variante, le sel peut être dissous dans l'eau en l'aérant avec le tube d'aération. Sel marin instantanée peut également être utilisé comme une solution d'incubation si le rouge sel de mer n'est pas disponible. Crevettes de saumure peut tolérer une large gamme de salinité, mais nous éclosent notre crevette de saumure (10-15 g) dans 30-35 g / L d'eau rouge sel marin. Remarque: En cas oeufs d'artémias sont pas facilement disponibles dans les magasins d'animaux locaux, puis les crevettes de saumure encapsulées peuvent également être utilisés après "décapsuler" les en lots avant de les ajouter à l'écloserie de crevettes. Cela pourrait aussi éviter de fréquents voyages à l'animalerie. Remplissez le éclosoir crevette de saumure avec salt d'eau et ajouter les oeufs de crevettes à une concentration de 1,2 cuillères à soupe / litre. Aérer l'éclosoir vigoureusement avec une pompe à air et laisser les oeufs d'artémias à éclore pour ~ 48 h. Remarque: Il convient de noter que non enrichi la crevette de saumure perdre de la valeur nutritive toutes les heures après l'éclosion. Par conséquent, il peut être approprié de trappe, soit plus de 24 heures ou d'enrichir pendant 48 h afin d'obtenir la valeur maximale nutritionnel de la crevette de saumure. Les eaux usées provenant du système d'incubation est ajouté à la quarantaine des déchets à désinfecter l'eau de Javel et éliminés par la suite. Pour collecter les crevettes de saumure, retirez le tuyau d'air et permettre à la culture de se contenter de 4-5 min, mais pas plus de 10 min. Les crevettes de saumure éclos arriver au bas de l'Hatcher. Recueillir les crevettes de saumure à l'aide du robinet au bas de l'éclosoir. Jeter l'effluent initial qui consiste non éclos des oeufs d'artémias. <li> Après avoir jeté les crevettes de saumure non éclos, de recueillir les artémias éclos qui seront utilisés comme aliments du poisson zèbre. Séparez les crevettes de saumure de l'eau salée, avec un filet collection artémia (~ 350 mesh nylon micron). Rincez les crevettes de saumure sur le net dans un récipient avec de l'eau du système. Les crevettes de saumure recueillies sont généralement présents en concentration élevée dans le bas du récipient en lui donnant une couleur plutôt orange. Nourrissez les crevettes de saumure de poisson zèbre à l'aide d'une pipette ou d'un flacon compte-gouttes / squeezy. La quantité de nourriture distribuée dépend de la taille de la population de réservoirs individuels. Le ratio communément admis pour le poisson zèbre est de recevoir 4% du poids corporel en nourriture par jour. Le poisson zèbre ne doit jamais être suralimenté car cela peut augmenter le niveau de nitrates dans l'eau, qui pourrait affecter leur reproduction, ou la viabilité, comme certains poissons peuvent mourir en raison de la suralimentation. Lors de l'injection de la nourriture dans lel'eau, les poissons affamés nager pour attraper les crevettes de saumure. Alimentation sèche peut être réalisée en utilisant un Aquatic Eco-System / habitats aquatiques simples à base de ressort distributeur de nourriture pour poissons. Alternativement, l'alimentation sèche peut également être effectuée à l'aide d'une cuillère simple ou en coupant un compte-gouttes en plastique en diagonale avec des ciseaux pour lui donner l'apparence d'une petite cuillère. 3. Élevage Poisson-zèbre lancer la reproduction à l'apparition de la lumière. Les œufs fécondés peut être obtenue soit par en-bac d'élevage ou de reproduction par paires. Alors que dans le réservoir d'élevage est plus de travail efficace et est mis en œuvre pour la collecte des embryons régulière dans notre laboratoire, la sélection par paires est préférable lorsque les gènes ou mutations seront projetés sur chaque poisson. Pour en bac d'élevage, l'éleveur monter dans le réservoir et descendre lentement dans le réservoir de poissons après l'apparition de la lumière. Alternativement, dans le réservoir d'élevage set-up peut être laissé toute la nuit dans l'aquarium. Lavant-toit de l'éleveur dans le réservoir pendant environ 15 minutes pour permettre aux poissons de s'accoupler avant de retirer le sélectionneur de la cuve et la collecte des œufs. Élevage paire est généralement mis en place à la fin de l'après-midi après le repas. Assemblez le réservoir d'élevage et de le remplir avec de l'eau du système vieilli. Transfert d'une femelle et un mâle sur les côtés opposés de l'aquarium de reproduction. Les femelles se distinguent des mâles en raison de leur plus grand ventre. Les mâles peuvent aussi être distingués des femelles parce qu'ils sont plus minces et de couleur plus foncée que les femelles. En outre, les mâles ont une coloration plus jaune dans la nageoire anale chez les femmes (voir figure 1). En cas de doute regard de l'ovipositeur femelle chez le poisson zèbre (voir Figure 4). Enlevez le séparateur, le lendemain matin, peu après l'apparition de la lumière. Permettre l'accouplement de se produire au repos pendant 20 minutes, ou jusqu'à un nombre suffisant d'embryons sont fixées au fond de la cuve. Après l'accouplement,retourner le poisson à leurs chars. Ramassez les oeufs à l'aide d'une passoire. Laver les embryons abondamment à l'eau du système. Transférer les embryons dans une boîte de Pétri par rinçage du filtre avec un milieu embryon; autre titre EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO 4, 1,0 mM; CaCl 2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM; NaHCO 3, 4,2 mM). Les embryons peuvent être observées sous un microscope. Les œufs fécondés sont ensuite séparés des œufs non fécondés à l'aide d'une aiguille et d'une pipette (voir figure 3). 4. Élevage de larves Les œufs fécondés sont maintenus dans un incubateur (~ 28,5 ° C) pendant 72 heures jusqu'à ce que les larves éclosent. Maintenant, les larves sont hors du chorion et la natation librement, ils sont prêts à transférer à un aquarium principal. Les larves ont besoin d'être nourris de 5 jours post-fécondation (dpf) et sont conservés dans le milieu de l'embryon (composition décrite dansLa pièce 3, 10) ou de l'eau du système. Les larves peuvent être conservés dans des boîtes rondes avec environ 50% d'eau ou plus y changer sur une base quotidienne. Le changement d'eau devraient inclure la suppression des larves mortes ou malades et tout autre débris. Transférer les larves doucement dans une cuve contenant un déflecteur de petite taille (de l'ordre de 300-400 microns). Larves mortes ou malades doivent être enlevés et quelques millilitres d'eau doit être ajoutée lentement sur une base quotidienne. Après 14 jours, les réservoirs de larves peuvent être rangés dans le système, et fourni avec un petit jet d'eau à vélo (1-2 gouttes par seconde). Que les larves grandissent, le débit d'eau peut être augmentée. Différentes tailles de chicanes peuvent être utilisés en fonction de la taille des larves (taille chicane par exemple, 300-400, 500, 700-750, et 1000 microns) et un déflecteur en plastique normale doit être utilisée pour les poissons adultes. Il faut généralement 3 mois pour les embryons de se développer en adulte sexuellement mature.