Smak celler är mycket specialiserade, med unika histologiska och molekylära och fysiologiska egenskaper som medger detektering av ett brett spektrum av enkla stimuli och komplexa molekyler kemiska finns i livsmedel. I human, individuell fungiform papiller innehåller från noll till så många som 20 smaklökar. Det finns ingen etablerat protokoll för odling av humana smak celler, även om förmågan att upprätthålla celler smak papiller i kultur för flera cellcykler skulle vara av stor användbarhet för att karakterisera de molekylära, regenerativ och funktionella egenskaperna hos dessa unika sensoriska celler. Tidigare studier smak celler har gjorts med hjälp nybakade isolerade celler i primär kultur, explantatodlingarna från gnagare, eller semi-intakta smaklökar i vävnadssnitt ^1,2,3,4. Även om vart och ett av dessa preparat har fördelar, skulle utvecklingen på lång sikt kulturer har gett betydande fördelar, särskilt för studier av smak celltillväxt och differentiation. Flera grupper, inklusive vår, har varit intresserade av utvecklingen och inrättandet av kultur smak cellmodeller. De flesta försök till celler kultur smak har rapporterat begränsad viabilitet, med celler normalt inte varar längre än 3-5 d. ^5,6,7,8. Vi rapporterade nyligen om en framgångsrik metod för förlängd odling av celler gnagare smak ^9. Vi rapporterar här för första gången inrättandet av ett in vitro odlingssystem för isolerade humana papiller fungiform smak celler. Celler från mänsklig fungiform papiller som erhållits genom biopsi framgångsrikt upprätthölls i kultur under mer än åtta passager (12 månader) utan förlust av livskraft. Celler visade många molekylära och fysiologiska egenskaper som kännetecknar mogna smak celler. Gustducin och fosfolipas C β2, (PLC-β2)-mRNA detekterades i många celler genom omvänd transkriptas-polymeras kedjereaktion och bekräftades genom sekvensering. Immunocytokemi analys påvisade närvaron av vindstötensducin och PLC-β2 uttryck i odlade celler smak. Odlade humana fungiform celler uppvisade också ökningar i intracellulärt kalcium som svar på lämpliga koncentrationer av flera smak stimuli som indikerar att smakreceptorer och åtminstone en del av de signalvägar var närvarande. Dessa resultat räcker indikerar att smak celler från vuxna människor kan skapas och upprätthållas under minst åtta passager. Många av cellerna behåller fysiologiska och biokemiska egenskaper hos akut isolerade celler från vuxna smaken epitelet för att stödja deras användning som en modell smak system. Detta system kommer att möjliggöra ytterligare studier av de processer som ingår i proliferation, differentiering och funktion av däggdjursceller smak receptor i en in vitro beredning.

Human fungiform smak papiller som används för att fastställa den mänskliga kulturen fungiform cell donerade för forskning efter vederbörligt informerat samtycke i enlighet med forskning protokoll som har granskatsoch godkänts av IRB utskottet. Protokollet (# 0934) godkändes av Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Skriftligt protokoll nedan är baserad på publicerade parametrar som rapporterats av Ozdener et al. 2011 ^10.