Células de sabor são altamente especializados, com únicas histológicos, características moleculares e fisiológicas que permitem a detecção de uma ampla gama de estímulos simples e moléculas químicas complexas contidos nos alimentos. Em humanos papilas fungiformes, individual contêm de zero a até 20 papilas gustativas. Não há protocolo estabelecido para a cultura de células humanas de sabor, embora a capacidade de manter as células sabor papilas em cultura durante vários ciclos celulares seria de utilidade considerável para caracterizar as propriedades moleculares, regenerativa, e funcional destas células únicas sensoriais. Estudos anteriores de células gustativas ter sido feito usando recém células isoladas em cultura primária, as culturas de explante de roedores, ou gomos semi-intactas gosto em fatias de tecido ^1,2,3,4. Embora cada uma destas preparações tem vantagens, o desenvolvimento de culturas a longo prazo teria fornecido benefícios significativos, particularmente para os estudos de gosto a proliferação celular e diferentiation. Vários grupos, inclusive o nosso, têm sido interessados ​​no desenvolvimento e estabelecimento de modelos de cultura de células gustativas. A maioria das tentativas de células gustativas cultura relataram viabilidade limitada, com células normalmente não duradouros além d 3-5 ^5,6,7,8. Nós recentemente relatado em um método de sucesso para a cultura prolongada de células de roedores gustativas ^9. Nós relatamos aqui pela primeira vez o estabelecimento de um sistema de cultura in vitro de células humanas isoladas fungiformes papilas gustativas. As células de humano papilas fungiformes obtidos por biópsia com êxito foram mantidas em cultura durante mais de oito passagens (12 meses) sem perda de viabilidade. Células exibido muitas características moleculares e fisiológicos característicos de células sabor maduros. Gustducin e fosfolipase C β2, (PLC-β2) ARNm foram detectados em muitas células por reacção em cadeia da polimerase com transcriptase reversa e confirmado por sequenciação. Análise imunocitoquímica demonstrou a presença de rajadaducin e PLC-β2 expressão em células gustativas cultivadas. Culturas de células de fungiformes humanos também exibiram aumentos na concentração de cálcio intracelular em resposta a concentrações apropriadas de estímulos de sabor, indicando que vários receptores de sabor e pelo menos algumas das vias de sinalização estavam presentes. Estes resultados indicam que as células suficientes sabor a partir de seres humanos adultos pode ser gerado e mantido durante pelo menos oito passagens. Muitas das células retêm as características fisiológicas e bioquímicas de células agudamente isoladas a partir do epitélio sabor adulto para apoiar a sua utilização como um sistema modelo gosto. Este sistema irá permitir estudos mais detalhados de os processos envolvidos na diferenciação, proliferação e função das células receptoras de mamíferos sabor num na preparação in vitro.

Papilas fungiformes gosto humano utilizado para estabelecer cultura de células humanas fungiformes foram doados para pesquisa após consentimento informado apropriado ao abrigo de protocolos de pesquisa que foram analisadase aprovado pelo comitê de IRB. O protocolo (# 0934) foi aprovado por Schulman Associates Institucional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Protocolo escrito abaixo é baseado em parâmetros publicados relatados por Ozdener et al. 2011 ^10.