인간 Fungiform의 맛 용의자 전지의 분리 및 문화
Summary
우리는 인간의 fungiform의 맛을 용의자 전지의 장기 문화를 분리하고 관리하기위한 재현성 프로토콜을 개발하기위한. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다.
Abstract
미각 세포는 음식에 포함된 간단한 자극하고 복잡한 화학 분자의 광범위한 감지를 허용 독특한 histological, 분자 및 생리 특성으로 고도의 전문입니다. 인간, 개별 fungiform의 용의자에서 제로로부터 많은 20 등 입맛에 포함되어 있습니다. 여러 세포주기위한 문화의 맛을 용의자 세포를 유지하는 능력이 독특한 감각 세포, 분자 재생 및 기능적 특성을 특성화를 위해 상당한 유틸리티 될 비록 culturing 인간의 미각 세포에 대한 설립 프로토콜은 없습니다. 미각 세포의 이전 연구는 일차 문화, 설치류에서 explant 문화, 또는 조직 조각 1,2,3,4의 세미 그대로 입맛에 갓 고립된 세포를 사용하여 수행되었습니다. 이러한 준비는 각각 장점이 있지만, 장기적인 문화의 발전은 특히 미각 세포 증식과 diffe의 연구를 위해 상당한 이점을 제공했을rentiation. 우리를 포함하여 몇몇 그룹은, 미각 세포 배양 모델의 개발 및 구축에 관심이 있었다. 문화 미각 세포에 대한 대부분의 시도는 3-5 D 5,6,7,8 이후 일반적으로 지속하지 세포와 제한된 생존을보고했습니다. 우리는 최근 쥐 미각 세포 9 확장된 문화를위한 성공적인 방법에보고했다. 우리는 여기서 처음 격리된 인간 fungiform의 맛을 용의자 세포에 대한 체외 배양 시스템의 설립에 대해보고합니다. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다. 세포는 성숙한 미각 세포의 특징 많은 분자 및 생리 기능을 표시합니다. Gustducin 및 포스 포 라이 페이스 C β2 (PLC-β2) mRNA는 반전 transcriptase – 중합 효소 사슬 반응에 의해 여러 세포에서 감지하고 시퀀싱에 의해 확인되었다. Immunocytochemistry 분석 돌풍의 존재를 증명교양 미각 세포의 ducin 및 PLC-β2 표현. 교양 인간 fungiform 세포는 또한 미각 수용체와 신호 전달 경로 중 적어도 일부는 현재의 것을 나타내는 여러 미각 자극의 적절한 농도에 대한 응답으로 세포 내 칼슘의 증가를 전시. 이러한 결과는 충분히 성인 인간의 미각 세포가 생성하고 적어도 8 구절 지속 돼 있음을 나타냅니다. 세포의 많은 모델 맛을 시스템으로의 사용을 지원하는 성인 취향의 상피에서 심하게 격리 세포의 생리 및 생화 학적 특성을 유지합니다. 이 시스템은 체외 준비에의 포유류의 미각 수용체 세포의 증식, 분화 및 기능에 관련된 프로세스의 추가 연구를 가능하게합니다.
인간 fungiform 셀 문화 확립을 위해 사용되는 휴먼 fungiform의 맛을 용의자가 검토되었다 연구 프로토콜 아래에서 적절한 정보를 동의에 따라 연구를 위해 기증했다그리고 IRB위원회에 의해 승인했다. 프로토콜 (# 0934)는 Schulman 어소 기관 검토위원회 주식, 신시내티, OH에 의해 승인되었습니다. 아래 글 프로토콜은 Ozdener 외 의해 보고된 출판 매개 변수를 기반으로합니다. 2011 10.
Protocol
Discussion
우리는 12 개월 기간을 걸치는, 8 이상의 구절에 대한 인간의 fungiform의 맛을 용의자로부터 얻은 세포를 유지했습니다. 이러한 문화들은 미각 수용체 세포의 핵심 분자 및 생리 학적 특성 이외에, 성숙한 미뢰 세포 유형의 여러 마커를 표현할 수있는 무대 체외에서 성숙 많은 중 새로운 세포를 생성합니다. 의 존재 gustducin 및 PLC-β2 교양 세포의 하위 집합에 immunoreactivity이 결론과 일치합니다. …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 아미 마이어스 및 기술 능력과 도움 ESI의 Quayson 감사드립니다. 이 작품은 NSF 0,216,310 및 Givaudan INC 부여 (NER)에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company |
| MCDB 123 | Sigma-Aldrich |
| Iscove’s DMEM Medium | MediaTech |
| Elastase | Sigma-Aldrich |
| Pronase E | Sigma-Aldrich |
| Elastase | Worthington |
| Soy bean trypsin inhibitor | Worthington |
| Collagenase type 1 | Worthington |
| Rat tail collagen type 1 | BD Sciences |
| Fura-2 AM | Molecular Probes |
| Superscript First Strand Synthesis System for RT-PCR | Invitrogen |
| Leica TCS SP2 Spectral Confocal Microscope | Leica Microsystems Inc. |
| Discovery-1 imaging station and Metamorph software | Molecular Devices |
| Small fine-tip forceps and extra fine spring scissors | Fine Science Tools |
Referências
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