Murine trapianto di midollo osseo è una tecnica ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi immunologici che regolano graft-versus-host disease negli esseri umani. La capacità di monitorare il traffico delle cellule T modelli<em> In vivo</em> Consente per l'analisi dettagliata dello sviluppo e la perpetuazione delle risposte delle cellule T durante la graft-versus-host disease.
Graft-versus-host disease (GVHD) è la barriera che limita l'ampio utilizzo di trapianto di midollo osseo come terapia curativa per una serie di carenze ematologiche. GVHD è causata da cellule T mature alloreattive presenti nel trapianto midollo osseo che sono infuse nel ricevente e causare danni agli organi di accoglienza. Tuttavia, nei topi, cellule T deve essere aggiunto al inoculo midollo osseo a causare GVHD. Sebbene un ampio lavoro è stato fatto per caratterizzare le risposte delle cellule T dopo trapianto, bioluminescente tecnologia di imaging è un metodo non invasivo per monitorare il traffico delle cellule T modelli in vivo.
A seguito di irradiazione letale, topi riceventi sono trapiantati con cellule del midollo osseo e splenociti di topi donatori. Sottopopolazioni di cellule T da L2G85.B6 (topi transgenici che esprimono costitutivamente luciferasi) sono incluse nel trapianto. Da trapiantare solo alcune sottopopolazioni di cellule T, è in grado di monitorare specifici sottogruppi di cellule T in vivo,e in base alla loro posizione, sviluppare ipotesi sul ruolo di specifici sottogruppi di cellule T nel promuovere la GVHD in vari momenti. A intervalli predeterminati dopo il trapianto, topi riceventi vengono esposte con una Xenogen IVIS camera CCD. L'intensità della luce può essere quantificato utilizzando il software Image Vivere per generare una pseudo-immagine a colori in base all'intensità fotone (rosso = alta intensità, viola intensità = bassa).
Tra 4-7 dopo il trapianto giorni, topi riceventi cominciano a mostrare segni clinici di GVHD. Cooke et al. 1 messo a punto un sistema di valutazione per quantificare la progressione della malattia in base al destinatario pelliccia trama topi, l'integrità della pelle, attività, perdita di peso, e la postura. I topi sono segnati tutti i giorni, e l'eutanasia quando diventano moribondi. Topi riceventi diventano in genere moribondo 20-30 giorni dopo il trapianto.
Modelli murini sono strumenti preziosi per lo studio della immunologia di GVHD. Selettivamente il trapianto delle cellule T sottoinsiemi particolare alminimi per l'identificazione accurata dei ruoli ogni sottoinsieme gioca. Non invasivo di monitoraggio risposte delle cellule T in vivo aggiunge un ulteriore livello di valore per i modelli murini GVHD.
Il protocollo per indurre GVHD nei topi qui presentato rappresenta un modello clinicamente rilevante di GVHD murino. Fondato da Berger et al. Nel 1994, il C57Bl / 6 in combinazione ceppo BALB.B è MHC-abbinato, con una mortalità GVHD mediata da CD4, CD8 dipendenti effettori T 2, molto simili allo scenario clinico più comune 3. E 'noto che trapiantando cellule T CD8 sola non causa GVHD in questo modello, tuttavia, la progressione della malattia è significativamente peggiore quando si…
The authors have nothing to disclose.
Siamo in debito con Alice Gaughan e-Jiao Jing Wang cui eccellente supporto tecnico, apporto intellettuale, e sostegno morale hanno contribuito a spostare in avanti questi studi. Questi studi sono stati sostenuti dalla concessione NIH AI036532 a GAH.
Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |