För att förstå hur komplexa cell former som neuronala dendriter, uppnås under utveckling är det viktigt att kunna korrekt analys mikrotubuli organisation. Här beskriver vi ett robust immunohistological märkning metod för att undersöka mikrotubuli organisation av dendritiska sensoriska arborization neuron dendriter, luftstrupe, muskler och andra<em> Drosophila</em> Larv kropp vägg vävnader.
För att förstå hur skillnader i komplexa cell former uppnås är det viktigt att noggrant följa mikrotubuli organisation. Det Drosophila larvkroppen vägg innehåller flera celltyper som är modeller för att studera celler och vävnader morfogenes. Till exempel tracheae används för att undersöka rör morfogenes 1 och dendritiska arborization (DA) sensoriska nervceller i Drosophila larven har blivit ett primärt system för belysning av allmänna och neuron-class-specifika mekanismer av dendritiska differentiering 2-5 och degeneration 6 .
Formen på Dendrite grenar kan variera kraftigt mellan neuron klasser, och även mellan olika grenar av en enda neuron 7,8. Genetiska studier i Da nervceller tyder på att skillnaden cytoskelettala organisation kan ligga till grund för morfologiska skillnader i dendritiska gren form 4,9-11. Vi erbjuder en robust metod immunologiska märkning för att enssay in vivo mikrotubuli organisation i DA sensoriska neuron Dendrite berså (figur 1, 2, Movie 1). Detta protokoll illustrerar dissekering och immunfärgning första INSTAR larv, ett stadium då aktiv sensoriska neuron Dendrite utväxt och förgrenade organisation sker 12,13.
Förutom färgning sensoriska nervceller, uppnår denna metod robusta märkning av mikrotubuli organisation i musklerna (Movies 2, 3), luftstrupe (Figur 3, Movie 3) och andra kroppsvävnader vägg. Det är värdefullt för utredare som vill analysera mikrotubuli organisation på plats i kroppen väggen vid utredning av mekanismer som styr vävnader och celler form.
För att förstå hur komplexa cell former uppnås är det viktigt att kunna korrekt analys mikrotubuli organisation. Här beskriver vi ett robust immunohistological märkning metod för analys mikrotubuli organisation av dendritiska sensoriska arborization neuron dendriter. Förutom färgning sensoriska nervceller, uppnår denna metod robusta immunohistological färgning av luftstrupe, muskler och andra kroppsvävnader vägg.
Vi använder detta protokoll för att undersöka mikrotubuli orga…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar RIKEN för finansiering. P10-Gal4 var en sorts gåva av Alain Vincent (Université Paul Sabatier, Toulouse, Frankrike).
Name of the reagent | Company |
Catalogue number |
Comments (optional) |
---|---|---|---|
Forceps | Dumont | 11251-20 | |
Microscissors | FST | 15000-08 | |
Mouse anti-α-tubulin (Clone: DM1A) | Sigma | T9026 | Dilution 1/1000 |
Mouse anti-Futsch (Clone: 22C10), supernatant |
Developmental Studies Hybridoma Bank |
22C10 | Dilution 1/1000 |
Rat anti-CD8 (Clone: 5H10) | Caltag | MCD0800 | Dilution 1/1000 |
Alexa Fluor 488 anti-mouse IgG | Invitrogen | A-11001 | Dilution 1/500 |
Cy3 anti-Rat IgG | Jackson Immunoresearch | 712-166-150 | Dilution 1/200 |