Immunohistological Маркировка микротрубочек в Сенсорные дендритов нейронов, трахеи, и мышцы в Drosophila Личинка стенки тела
Summary
Чтобы понять, как сложные формы клеток, например, нейронных дендритов, достигаются в процессе развития, важно, чтобы быть в состоянии точно организации микротрубочек анализа. Здесь мы опишем надежной immunohistological метод маркировки для изучения организации микротрубочек дендритных разветвление дендритов нейронов сенсорных, трахея, мышцы и другие<em> Drosophila</em> Личинка тканей стенки тела.
Abstract
Чтобы понять, как различия в сложной формы ячейки достигнута, важно точно следовать микротрубочек организации. Тела дрозофилы личиночной стены состоит из нескольких типов клеток, которые являются моделями для изучения клеток и тканей морфогенеза. Например трахеи используются для изучения морфогенеза трубки 1, и дендритные разветвление (DA) сенсорных нейронов личинки дрозофилы стали основной системы для выяснения общих и нейрон-класс-специфические механизмы дендритных 2-5 дифференциация и перерождение 6 .
Форма дендритов ветви могут существенно различаться между нейроном классы, и даже между различными ветвями одного нейрона 7,8. Генетические исследования в нейронах Д. А. предполагают, что дифференциальные цитоскелета организация может лежать в основе морфологических различий в дендритные формы филиала 4,9-11. Мы обеспечиваем надежный метод маркировки для иммунологическихssay в естественных условиях микротрубочек организации в Д.А. сенсорного нейрона дендритов беседки (рис. 1, 2, фильм 1). Этот протокол иллюстрирует вскрытие и иммунной первой взрослой личинки, этап, когда активной сенсорной вырост дендрита нейрона и ветвление организации происходит 12,13.
В дополнение к окрашиванию сенсорных нейронов, этот метод позволяет достичь надежной маркировки организации микротрубочек в мышцах (Видео 2, 3), трахеи (рис. 3, Movie 3), и других тканей стенки тела. Он ценен для следователей желающих анализировать микротрубочек организации на местах в стенке тела при исследовании механизмов, ткани контроля и формы клеток.
Protocol
Discussion
Чтобы понять, как клеточный комплекс форм достигается очень важно быть в состоянии точно организации микротрубочек анализа. Здесь мы опишем надежной immunohistological метод маркировки для анализа организации микротрубочек дендритных разветвление нейрона сенсорными дендритов. В дополнение …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим RIKEN для финансирования. P10-Gal4 был своего рода подарок Алена Винсент (Университет Поля Сабатье, Тулуза, Франция).
Materials
| Name of the reagent | Company |
Catalogue number |
Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Forceps | Dumont | 11251-20 | |
| Microscissors | FST | 15000-08 | |
| Mouse anti-α-tubulin (Clone: DM1A) | Sigma | T9026 | Dilution 1/1000 |
| Mouse anti-Futsch (Clone: 22C10), supernatant |
Developmental Studies Hybridoma Bank |
22C10 | Dilution 1/1000 |
| Rat anti-CD8 (Clone: 5H10) | Caltag | MCD0800 | Dilution 1/1000 |
| Alexa Fluor 488 anti-mouse IgG | Invitrogen | A-11001 | Dilution 1/500 |
| Cy3 anti-Rat IgG | Jackson Immunoresearch | 712-166-150 | Dilution 1/200 |
Referências
- Schottenfeld, J., Song, Y., Ghabrial, A. S. Tube continued: morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Curr. Opin. Cell. Biol. 22, 633-639 (2010).
- Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila. Genes Dev. 13, 2549-2561 (1999).
- Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila. Development. 136, 1049-1061 (2009).
- Moore, A. W. Intrinsic mechanisms to define neuron class-specific dendrite arbor morphology. Cell. Adh. Migr. 2, 81-82 (2008).
- Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons. Development. 129, 2867-2878 (2002).
- Nishimura, Y. Selection of Behaviors and Segmental Coordination During Larval Locomotion Is Disrupted by Nuclear Polyglutamine Inclusions in a New Drosophila Huntington’s Disease-Like Model. J. Neurogenet. 24, 194-206 (2010).
- Ramon y Cajal, S. . Histology of the nervous system of man and vertebrates, 1995 translation. , (1911).
- London, M., Hausser, M. Dendritic computation. Annu. Rev. Neurosci. 28, 503-532 (2005).
- Jinushi-Nakao, S. Knot/Collier and cut control different aspects of dendrite cytoskeleton and synergize to define final arbor shape. Neuron. 56, 963-978 (2007).
- Li, W., Gao, F. B. Actin filament-stabilizing protein tropomyosin regulates the size of dendritic fields. J. Neurosci. 23, 6171-6175 (2003).
- Ye, B. Differential regulation of dendritic and axonal development by the novel Kruppel-like factor Dar1. J. Neurosci. 31, 3309-3319 (2011).
- Parrish, J. Z., Xu, P., Kim, C. C., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The microRNA bantam functions in epithelial cells to regulate scaling growth of dendrite arbors in drosophila sensory neurons. Neuron. 63, 788-802 (2009).
- Sugimura, K. Distinct developmental modes and lesion-induced reactions of dendrites of two classes of Drosophila sensory neurons. J. Neurosci. 23, 3752-3760 (2003).
- Budnik, V., Gorczyca, M., Prokop, A. Selected methods for the anatomical study of Drosophila embryonic and larval neuromuscular junctions. Int. Rev. Neurobiol. 75, 323-365 (2006).
- Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. . Drosophila Protocols. , (2000).
- Shimono, K. Multidendritic sensory neurons in the adult Drosophila abdomen: origins, dendritic morphology, and segment- and age-dependent programmed cell death. Neural. Dev. 4, 37-37 (2009).
- Colomb, S., Joly, W., Bonneaud, N., Maschat, F. A concerted action of Engrailed and Gooseberry-Neuro in neuroblast 6-4 is triggering the formation of embryonic posterior commissure bundles. PLoS One. 3, 2197-2197 (2008).
- Dubois, L. Collier transcription in a single Drosophila muscle lineage: the combinatorial control of muscle identity. Development. 134, 4347-4355 (2007).
- Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18, 377-402 (2004).
- Hummel, T., Krukkert, K., Roos, J., Davis, G., Klambt, C. Drosophila Futsch/22C10 is a MAP1B-like protein required for dendritic and axonal development. Neuron. 26, 357-370 (2000).
- Zipursky, S. L., Venkatesh, T. R., Teplow, D. B., Benzer, S. Neuronal development in the Drosophila retina: monoclonal antibodies as molecular probes. Cell. 36, 15-26 (1984).
- Brent, J., Werner, K., McCabe, B. D. Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry. J. Vis. Exp. (25), e1108-e1108 (2009).
- Karim, M. R., Moore, A. W. Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics. J. Vis. Exp. (57), e3111-e3111 (2011).
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila Larval NMJ Dissection. J. Vis. Exp. (24), e1107-e1107 (2009).
- Tao, J., Rolls, M. M. Dendrites have a rapid program of injury-induced degeneration that is molecularly distinct from developmental pruning. J. Neurosci. 31, 5398-5405 (2011).
- Yamamoto, M., Ueda, R., Takahashi, K., Saigo, K., Uemura, T. Control of axonal sprouting and dendrite branching by the Nrg-Ank complex at the neuron-glia interface. Curr. Biol. 16, 1678-1683 (2006).
- Mattie, F. J. Directed microtubule growth, +TIPs, and kinesin-2 are required for uniform microtubule polarity in dendrites. Curr. Biol. 20, 2169-2177 (2010).
- Pawson, C., Eaton, B. A., Davis, G. W. Formin-dependent synaptic growth: evidence that Dlar signals via Diaphanous to modulate synaptic actin and dynamic pioneer microtubules. J. Neurosci. 28, 11111-11123 (2008).
- Williams, D. W., Tyrer, M., Shepherd, D. Tau and tau reporters disrupt central projections of sensory neurons in Drosophila. J. Comp. Neurol. 428, 630-640 (2000).
