الفخذ قسطرة الشرايين والأوردة لاخذ عينات من الدم ، وإدراكا منها الدواء وضغط الدم وقياسات معدل ضربات القلب
Summary
مطلوب في كثير من الأحيان قسطرة الأوعية الدموية المزمنة في الفئران لإدارة المواد ، والحصول على عينة من الدم على مدى فترة من الزمن أو لمباشرة اعية قياس ضغط الدم. سيظهر قسطرة الشرايين الفخذية القياسات الفئران وما يقابلها من ارتفاع ضغط الدم في الحيوانات واعية.
Abstract
في مجالات متعددة من الدراسة ، والوصول إلى نظام الدورة الدموية في الدراسات المخبرية الضرورية. الدراسات الدوائية في الفئران باستخدام القسطرة المزروع مزمنة تصريح الباحث على نحو فعال وإدارة المواد إنسانية ، نفذ المتكررة اخذ عينات من الدم ويساعد في القياسات المباشرة واعية من ضغط الدم ومعدل ضربات القلب. مرة واحدة هو مزروع القسطرة على المدى الطويل من الممكن أخذ العينات. سالكية القسطرة والحياة يعتمد على عوامل متعددة بما في ذلك تأمين الحل المستخدمة ، ونظام التنظيف والمواد القسطرة. وهذا الفيديو لشرح منهجية شريان الفخذ وقسطرة وريدية من الفئران. بالإضافة إلى ذلك في شريط فيديو تثبت استعمال القسطرة الوريدية والشريانية الفخذ لأخذ عينات الدم ، وإدارة المخدرات واستخدام القسطرة الشريانية في أخذ قياسات ضغط الدم ومعدل ضربات القلب في الفئران واعية بحرية الحركة. وهناك حبل وتسخير تعلق على قطب النظام تسمح للحيوان أن يكون حووقد استخدمت وأخذ عينات من قبل الباحث بأقل قدر من الانقطاع للحيوان. للحفاظ على سالكية من القسطرة ، مطلوب الصيانة اليومية حذرا من استخدام القسطرة حل القفل (100 U / مل heparinized المالحة) ، وآلة الأرض حقنة غيض الإبر كليلة واستخدام الفلاتر حقنة للحد من التلوث المحتملة. مع تقنيات جراحية دقيقة العقيم ، ومواد القسطرة السليم والدقيق تقنيات الصيانة القسطرة ، فمن الممكن للحفاظ على براءات الاختراع والقسطرة الحيوانات السليمة لفترات طويلة من الوقت (عدة أسابيع).
Protocol
Discussion
تاريخيا قسطرة الشرايين والأوردة المستخدمة لسمية حادة ومزمنة رصد عينة الدم ضغط الدم ، وتسليم المواد في نموذج الفئران حيوانات التجارب 1-4. وهناك فائدة كبيرة من هذه العمليات الجراحية أدوات القياس هو أنه يسمح بإجراء إجراءات الرصد ، بما في ذلك ادارة الدم أخذ عينات المخدرات ، ومراقبة ضغط الدم ، مع الحد الأدنى من الاضطرابات و / أو الإجهاد على الحيوان 1. وقد كتب العديد من البروتوكولات والمحققين ومنهجيات محددة مختبرهم الذي ينفذ عملية جراحية 5-8. الفيديو والرسوم التوضيحية إظهار ما لدينا مختبر وجدت لتكون ناجحة فيما يتعلق الشرياني والوريدي الفخذ إجراء القسطرة.
ويشيع استخدام الفئران في المختبر لعدد وافر من الدراسات العلمية نظرا لصغر حجمها وسهولة في التعامل معها. هناك عدة مواقع حيث مزمنيمكن وضعها داخل القسطرة حيوان ، بما في ذلك حبل الوريد ، الشريان الأورطي في البطن ، والشريان السباتي وشريان الفخذ ، على سبيل المثال لا الحصر. وكان الموقع الفئران الفخذ لنتائج قسطرة المزمن في ازدياد طول سالكية القسطرة وأسرع الانتعاش من وزن الحيوان قبل العمليات الجراحية مقارنة مع المواقع الأخرى 9 القسطرة.
وقد استخدمت العديد من المحققين سكنى القسطرة لأخذ عينات الدم الحاد وكذلك 1-5،11-13 المزمنة. في توجه العديد من الدراسات مطلوبة الدم متعددة من الحيوانات وإقناء ؛ إدخال القنية الخارجية / قسطرة واحدة هي المنهجية التي من المفيد ، نظرا لطبيعة غير مؤلمة والخمسين ؛ وعلاوة على ذلك يمكن القيام به في حين أن الحيوانات واعية ، وبالتالي لا يقتصر من آثار التخدير وأيضا يمكن للحيوان أن تتحرك بحرية 1،10. كانت أفضل طريقة يمكن من خلالها الحصول على عينات من الدم وقياس هرمونات الاجهاد لدى القوارض 6،13 جدل لفترة طويلة. فيما يتعلق ستودي الدوائيةوفاق ، قسطرة للبحوث الحيوانية تصاريح المتكررة اخذ عينات من الدم مع الحد الأدنى من ضبط النفس عند استخدام نظام قسطرة مزروع مزمنة. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات انخفاض تركيزات القاعدية الأدرينالين ، النورادرينالين والدوبامين في بلازما الفئران تتحرك بحرية (قسطرة الوريد) بالمقارنة مع الحيوانات التي تم التعامل معها (30 ثانية) وضبط النفس ، أو (5 دقائق) 14. طريقة إضافية يمكن من خلالها تمييز الزيادات في الإجهاد من خلال قياس مستويات البلازما الكورتيزون. واقترح في وقت سابق أنه حتى بعد ثلاثة أو أربعة أيام من أوقات الانتعاش الجراحية التي كانت مرتفعة في مستويات البلازما كورتيزون الفئران مقنى المزمنة 15. ومع ذلك ، فقد قرر التحسينات الأخيرة في المنهجية التي لا توجد اختلافات في مستويات خط الأساس كورتيزون البلازما في الفئران حبل الوريد مقنى مقارنة للفئران uncannulated 16. بالإضافة إلى ذلك ، HPLC منهجية لتحليل وكشف أيضا أن الكورتيزون corticosterone مستويات مرتفعة من الإجهاد ضبط النفس ، ولكن مستقرة بعد القسطرة الوداجي 16.
الاستخدام المزمن إضافية للقسطرة هو قياس ضغط الدم ومعدل ضربات القلب لدى القوارض. هناك العديد من المنهجيات التي تستخدم لقياس ضغط الدم ومعدل ضربات القلب في الفئران ، وهذه تشمل الكفة الذيل غير الغازية منهجيات وإجراءات القياسات اللاسلكية والمباشرة القسطرة سكنى. كل أسلوب له مزاياه وعيوبه ، والتي وصفها بالتفصيل في منشورات أخرى. يمكن زرعها سكنى مملوءة بسائل القسطرة في الشرايين متعددة داخل الفئران. الشريان الفخذي ما هو إلا أحد الشرايين التي يمكن استخدامها لهذا التدبير. تدابير لضغط الدم ومعدلات / قلب ، يتم توصيل نهاية البعيدة للقسطرة لمحول الضغط معايرة. يمكن أن يضم قسطرة في الربيع التي توفر الحماية متصلة قطب للسماح بحرية الحركة للحيوان ، أو تعلق على زر SURGIمزروع أتوماتيكيا للحيوان. القسطرة سكنى لها ميزة تقليل الإجهاد على المدى الطويل على الحيوان 17،18. بالإضافة إلى مواد غير مكلفة ، والمعايرة من السهل اتخاذ تدابير الضغط المستمر والتدابير طويلة الأجل ويمكن الحصول عليها تحت ظروف الضغط المنخفض نسبيا لعدة أسابيع 19. سنكون مقصرين إذا كنا لم يذكر أن هناك عيوب لهذه التقنية ، بما في ذلك ، بل هو أسلوب الغازية جراحيا ، مطلوب صيانة القسطرة للحفاظ على سالكية ، وتلف الشريان نتيجة لزرع القسطرة و المحتملة للعدوى على سبيل المثال لا الحصر.
لاتخاذ تدابير المزمنة التسجيلات ضغط الدم مباشرة من القسطرة الشريانية مزمن مزروع أكثر تحديا تقنيا ولكنها أكثر دقة ويمكن أن يتم من دون إزعاج مستمر الحيوان. الذيل الكفة القياسات أقل دقة ، إلا أنها لا تتطلب عملية جراحية ، ويمكن أيضا أن أكررأد. الذيل الكفة منهجيات لا تتطلب معالجة ، وكذلك التدفئة من الحيوان إلى تمدد في الأوعية الذيل لتسهيل الكشف عن نبض 20. يمكن التعامل مع الحرارة والضغط واضاف تؤثر قياسات ضغط الدم ، وبالتالي لا توفر مقاييس دقيقة حقا. وعلاوة على ذلك ، وعدم مباشرة الذيل الكفة الأسلوب لا تسمح سهلة اخذ عينات من الدم في وقت واحد أو إدارة المخدرات.
طريقة إضافية يمكن من خلالها قياس تحقيق المباشر باستخدام منهجية القياس عن بعد. القياس عن بعد يسمح عالية الجودة تسجيلات لضغط الدم (والتدابير الأخرى) بشكل مستمر لفترات طويلة من الزمن في الحيوانات واعية تتحرك بحرية دون قيد أو التخدير 18. ومع ذلك ، وأجهزة القياس عن بعد بينما المثالية هي مكلفة جدا. بالمقارنة مع القياس عن بعد ، واستحقاقات قسطرة ما يلي : انخفض "الإعداد" والتكاليف التشغيلية ، والقدرة على إدارة المخدرات بسهولة وسهولة أخذ عينات الدم في الحيوانات واعية تتحرك بحرية. وadministratويمكن القيام ايون المخدرات والمؤثرات ، والحصول على عينات دم من الحيوانات المزعجة البحوث بينما الحد الأدنى من الحيوان ، وبالتالي تقليل الإجهاد على الحيوان ، والسماح لقياس أكثر دقة.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب نود أن ننوه الدكتور أندرو الملك ، والملك دكتوراه كاترينا للمساهمة في الرسوم التوضيحية. منحة المعاهد الوطنية للصحة : R00HL087927.
Materials
| Name | Tipo | Company | Catalog Number |
| Arterial Catheter | Consumable | SAI Infusion | RFA-01 |
| Venous Catheter | Consumable | Scientific Commodities, Inc. | BB518-20 & BB31785-V/2 |
| 27g 1/2″ Blunt Needle | Equipment | Integrated Dispensing Solutions, Inc. | 9991113 |
| 23g 1/2″ Blunt Needle | Equipment | Integrated Dispensing Solutions, Inc. | 9991109 |
| PowerLab/8SP | Equipment | ADInstruments | ML765 |
| Quad Bridge | Equipment | ADInstruments | ML118 |
| LabChart 7.2 | Software | ADInstruments | |
| BP Transducer with stopcock & Cable | Equipment | ADInstruments | MLT844 |
| Single Channel Swivel | Equipment | Instech | 375/22PS |
| Single Axis-Counter Balance Swivel Mount | Equipment | Instech | CM375BP |
| Covance Infusion Harness | Equipment | Instech | CIH105 |
| Table Top Isoflurane Anesthesia Unit | Equipment | Protech International, Inc. | 61020 |
| Rodent Anesthesia Mask | Equipment | Protech International, Inc. | RAM-02 |
| Rodent Induction Chamber | Equipment | Protech International, Inc. | RIC-01 |
| Anesthesia Gas Filter Canister | Equipment | Protech International, Inc. | 80120 |
| Tabletop Laminar Flow Hood | Equipment | Sentry Air Systems, Inc. | SS-200-WSL |
| Oster Golden A5 | Equipment | Oster Professional Products | 78005-140 |
| Fiber Optic Light with Dual Gooseneck Guide | Equipment | LW Scientific, Inc. | ILL-1502-DGG1 |
| Deltaphase Isothermal Pad | Equipment | BrainTree Scientific | 39DP |
| Cotton-Tipped Applicators | Consumable | Solon Manufacturing Company | 36200 |
| Gauze Sponges 2″x2″ | Consumable | Kendall Curity | 2146 |
| 5-0 Nylon Suture | Consumable | Ethicon | 661G |
| 4-0 Silk Suture | Consumable | Deknatel | 8-S, 136075-0208 |
| Tissue Adhesive | Consumable | 3M | 1469SB |
| Splinter & Fixation Forceps | Equipment | George Tiemann & Company | 160-55 |
| Student Tissue Forceps | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 91121-12 |
| Micro Forceps/Bracken Forceps | Equipment | George Tiemann & Company | 10-1942 |
| Extra Fine Graefe Forceps | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 11152-10 |
| Olsen-Hegar Needle Holder | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 12002-12 |
| Student Halsted-Mosquito Hemostat | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 91308-12 |
| Rochester Pean Forcep | Equipment | Biomedical Research Instruments, Inc. | 31-1640 |
| Student Surgical Scissors | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 91402-12 |
| Dumont Forceps | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 11251-35 |
| Micro Dissecting Scissors | Equipment | George Tiemann & Company | 160-210 |
| Strabismus Scissors | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 14075-11 |
| Hartman Hemostat | Equipment | Fine Science Tools, Inc. | 13003-10 |
| Tissue Scissors | Equipment | George Tiemann & Company | 160-150 |
| Retractor | Equipment | Custom Made |
Referências
- Tabata, Y., Chang, T. M. Intermittent vascular access for extracorporeal circulation in conscious rats: a new technique. Artif. Organs. 6, 213-215 (1982).
- Chester, J. F., Weitzman, S. A., Malt, R. A. Implantable device for drug delivery and blood sampling in the rat. J. Appl. Physiol. 59, 1665-1666 (1985).
- Koeslag, D., Humphreys, A. S., Russell, J. C. A technique for long-term venous cannulation in rats. J. Appl. Physiol. 57, 1594-1596 (1984).
- Hall, R. I., Ross, L. H., Bozovic, M., Grant, J. P. A simple method of obtaining repeated venous blood samples from the conscious rat. J. Surg. Res. 36, 92-95 (1984).
- Burt, M. E., Arbeit, J., Brennan, M. F. Chronic arterial and venous access in the unrestrained rat. Am. J. Physiol. 238, H599-H603 (1980).
- Cocchetto, D. M., Bjornsson, T. D. Methods for vascular access and collection of body fluids from the laboratory rat. J. Pharm. Sci. 72, 465-492 (1983).
- Rigalli, A., E, D. L. V. . Experimental surgical models in the laboratory rat. , (2009).
- Waynforth, H. B. . F.P.A. Experimental and surgical tehcnique in the rat. , (2007).
- Yoburn, B. C., Morales, R., Inturrisi, C. E. Chronic vascular catheterization in the rat: comparison of three techniques. Physiol. Behav. 33, 89-94 (1984).
- Staub, J. F., Coutris, G. A technique for multiple, high-rate blood samplings via an external cannula in rats. J. Appl. Physiol. 46, 197-199 (1979).
- Steffens, A. B. A method for frequent sampling of blood and continuous infusion of fluids in the rat without disturbing the animal. Physiol. Behav. 4, 833-836 (1969).
- Thrivikraman, K. V., Huot, R. L., Plotsky, P. M. Jugular vein catheterization for repeated blood sampling in the unrestrained conscious rat. Brain. Res. Brain. Res. Protoc. 10, 84-94 (2002).
- Vahl, T. P. Comparative analysis of ACTH and corticosterone sampling methods in rats. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 289, E823-E828 (2005).
- Buhler, H. U., da Prada, M., Haefely, W., Picotti, G. B. Plasma adrenaline, noradrenaline and dopamine in man and different animal species. J. Physiol. 276, 311-320 (1978).
- Fagin, K. D., Shinsako, J., Dallman, M. F. Effects of housing and chronic cannulation on plasma ACTH and corticosterone in the rat. Am. J. Physiol. 245, E515-E520 (1983).
- Ling, S., Jamali, F. Effect of cannulation surgery and restraint stress on the plasma corticosterone concentration in the rat: application of an improved corticosterone HPLC assay. J. Pharm. Pharm. Sci. 6, 246-251 (2003).
- Fink, G. D., Bryan, W. J., Mann, M., Osborn, J., Werber, A. Continuous blood pressure measurement in rats with aortic baroreceptor deafferentation. Am. J. Physiol. 241, H268-H272 (1981).
- Van Vliet, B. N., Chafe, L. L., Antic, V., Schnyder-Candrian, S., Montani, J. P. Direct and indirect methods used to study arterial blood pressure. J. Pharmacol. Toxicol Methods. 44, 361-373 (2000).
- Wang, J., Tempini, A., Schnyder, B., Montani, J. P. Regulation of blood pressure during long-term ouabain infusion in Long-Evans rats. Am. J. Hypertens. 12, 423-426 (1999).
- Bunag, R. D. Facts and fallacies about measuring blood pressure in rats. Clin. Exp. Hypertens. A. 5, 1659-1681 (1983).
