Deri ve Kol ve bacak kemikleri innerve Fare Duyusal Sinir Lif doku hazırlanması ve immün
Summary
Periferik duyusal sinir lifi alt tiplerinin İmmünositokimyasal kimlik (ve orada protein ekspresyonu tespit), periferik hissi altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için kilit öneme sahiptir. Burada periferik duyusal sinir lifleri belirli immün için, deri ve bacak kemikleri gibi periferik / visseral doku örnekleri, hazırlama yöntemleri açıklanmaktadır.
Abstract
Algılama ve periferik duyusal sinir lifleri tarafından fiziksel, kimyasal ve termal duyusal uyaranlar birincil işleme, hayvanlarda ve insanlarda duyu algı anahtar. Bu periferik duyusal sinir lifleri, algılayabilir ve belirli duyusal uyaranlar başlatmak reseptörleri ve iyon kanal proteinlerinin bir bolluk ifade eder. Yöntem aynı zamanda bu liflerin belirli bir iyon kanalı proteinlerin fonksiyonel ifade tanımlamak için kullanılabilir cilt innerve periferik duyusal sinir lifleri, elektriksel özellikleri karakterize etmek için kullanılabilir. Ancak, benzer elektrofizyolojik yöntemler mevcut değildir (ve de geliştirmek için zor), periferik duyusal sinir lifleri, kemik gibi en zorlu dokuların da dahil olmak üzere diğer visseral organları innerve reseptörleri ve iyon kanal proteinlerinin fonksiyonel ifade algılama. Ayrıca, bu gibi elektrofizyolojik yöntemler olmayan Uyarılabilir protein ifade belirlemek için kullanılanperiferik duyusal sinir lifleri var. Bu nedenle, duyusal sinir fivers periferik / visseral doku örnekleri immün Bu sinir lifleri ilgi spesifik proteinlerin ekspresyonunu belirlemek için en iyi şekilde sağlar. Şimdiye kadar, duyusal nöronlarda protein ekspresyonu çalışmaların çoğu bilgi, belirli proteinlerin hücre vücudun belirli türleri ya da duyusal nöronların alt kümelerini ifade sınırlı duyu ganglionlar, prosedürleri immün kullanılmaktadır. Burada, periferik duyusal sinir lifleri immün periferik / visseral doku örneklerinin hazırlanması için ayrıntılı yöntemleri / protokoller raporu. Biz özellikle deri veya plantar punch biyopsi ve kemik (femur), periferik duyusal sinir lifleri immün farelerden elde edilen bölümleri hazırlanması için ayrıntılı yöntemleri. Bu yöntemler sadece periferik duyusal nöronlar protein ekspresyonu kalitatif tayin önemli değildir, aynı zamanda bir kantitatif yöntem sağlamakduyusal liflerin belirli türleri veya altkümelerini protein ekspresyon düzeylerinde değişiklikler tespit yanı sıra, çeşitli patolojik durumları sırasında duyusal liflerin sayısı ve yoğunluğu, morfolojik ve / veya anatomik değişiklikler belirlemek için. Ayrıca, bu yöntemler sadece duyusal sinir liflerinin boyanması sınırlı değildir, aynı zamanda deri, kemik ve diğer visseral doku herhangi bir tür sinir liflerinin boyanması için kullanılabilir.
Protocol
Discussion
Burada fare, cilt ve immün ve periferik duyusal sinir lifleri algılama kemik doku kesitlerinde hazırlanması için yöntemler ayrıntılarıyla belirttik. Plantar punch biyopsi üretilen bölümleri hem tüysüz ve saçlı deri içeren protokol, her cilt tipine kullanılabilir anlamına gelir. Bu teknikler aynı zamanda diğer hücre türleri (örneğin lökosit, vasküler endotelin, düz kas diğerlerinin yanı sıra) bu dokuların leke istihdam edilebilirler. Bu yöntemler en iyi ultrastrüktürel korunması arası…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ona sürekli yardım ve bu işe yapıcı eleştiri ve Dr. Donna L. Hammond; konfokal mikroskopi / fare plantar punch biyopsi immün görüntüleme ilk standardizasyon yardımlarından dolayı Dr. Yuriy M. Usachev teşekkür ederiz. Bu çalışma NINDS / NIH (NS069898) hibe ve DPM, Savunma Prostat Kanseri Araştırma Programı Bakanlığı (DoD-PCRP-101.096) Fikir Kalkınma Hibe Ödülü tarafından finanse edildi
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue No. | Comment |
| 3mm Harris Micro-Punch | Material | Ted Pella | 15094 | |
| Perfusion pump | Material | VWR International | 23609-170 | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Fisher Scientific | T353 | |
| Picric acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 239801 | |
| OCT Embedding compound | Reagent | Tissue-Tek | 4583 | |
| Cyto-Freeze cryogenic aerosol spray | Material | Control Company | 3118 | |
| Goat Serum | Reagent | Sigma-Aldrich | G9023 | |
| Incubation tray and lid for Immunostaining (Large) | Material | RPI Corp. | 248270 (tray) 248270-A (lid) |
|
| ImmEdge hydrophobic barrier pen | Material | Vector Laboratories | H-4000 | |
| Camel’s Hair Brushes (#1 thickness) | Material | Ted Pella | 11859 | |
| Pro‐Long Gold Mounting medium | Reagent | Invitrogen | P36930 |
Referências
- Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).
- Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining. Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).
- Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology. Peptides. 7, 155-159 (1986).
- Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury. The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).
- Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline. Pain. 152, 308-313 (2011).
- Bloom, A. P. Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers. The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).
- Constantin, C. E. Endogenous Tumor Necrosis Factor α (TNFα) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model. J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).
- Jankowski, M. P. Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling. The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).
- Jimenez-Andrade, J. M. Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain. J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).
- Persson, A. -. K. Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals. Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).
- Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin. Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).
- Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy. Pain. 140, 35-47 (2008).
