피부와 사지 본즈 Innervating 마우스 감각 신경 섬유의 조직 준비 및 Immunostaining
Summary
말초 감각 신경 섬유 subtypes의 Immunocytochemical 식별 (과 그 안의 단백질의 표현 감지)는 주변 센세이션을 기본 분자 메커니즘을 이해하는 데 열쇠입니다. 여기 주변 감각 신경 섬유의 특정 immunostaining 위해 이러한 피부 및 사지 뼈와 같은 주변 기기 / 내장 조직 샘플,의 준비를위한 방법을 설명합니다.
Abstract
말초 감각 신경 섬유에 의해 감지 및 물리적, 화학적 및 열 감각 자극의 기본 처리는 동물과 인간의 감각 지각의 열쇠입니다. 이러한 말초 감각 신경 섬유는 특정 감각 자극을 감지하고 시작 수용체 및 이온 채널 단백질의 과다를 표현한다. 방법은 다음과 섬유에서 특정 이온 채널 단백질의 기능 표현을 식별할 활용할 수 피부를 innervating 말초 감각 신경 섬유의 전기적 특성을 특징 사용할 수 있습니다. 그러나, 유사한 electrophysiological 방법을 사용할 수 없습니다 (또한 개발하기가 어렵습니다) 같은 뼈으로 가장 어려운 조직을 포함하여 다른 내장 기관을 innervating 말초 감각 신경 섬유에있는 수용체와 이온 채널 단백질의 기능 표현의 검출을위한. 또한, 그러한 electrophysiological 방법은 아닌 고르기 단백질의 표현을 결정하는 이용 수 없습니다말초 감각 신경 섬유에의. 따라서, 감각 신경 fivers을위한 주변 기기 / 내장 조직 샘플 immunostaining이 신경 섬유에 대한 관심의 특정 단백질의 표현을 결정하는 최선의 방법을 제공합니다. 지금까지, 감각 뉴런의 단백질 표현 연구의 대부분은 정보가 특정 유형이나 감각 신경의 일부의 세포 본문에 특정 단백질의 표현에 제한됩니다 감각 신경에 절차를 immunostaining 활용했습니다. 여기 주변 감각 신경 섬유의 immunostaining에 대한 주변 / 내장 조직 샘플의 준비에 대한 자세한 방법 / 프로토콜을보고합니다. 우리 피부 발바닥 펀치 생검 및 뼈 (대퇴골) 말초 감각 신경 섬유의 immunostaining에 대한 생쥐에서 섹션의 준비를 위해 특별히 세부 방법. 이러한 방법은 주변 감각 뉴런의 단백질 표현의 질적 결정에만 주요되지뿐만 아니라위한 양적 분석 방법을 제공감각 섬유의 특정 유형 또는 하위 집합의 단백질 발현 수준의 변화를 결정뿐만 아니라, 여러 병적인 상태 동안 감각 섬유의 수와 밀도의 형태학의 및 / 또는 해부 학적 변화를 결정하십시오. 또한, 이러한 방법은 감각 신경 섬유의 얼룩에 국한되지 않은, 또한 피부, 뼈 및 기타 내장 조직에있는 신경 섬유의 종류 얼룩 사용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
여기 마우스 피부 immunostaining 및 주변 감각 신경 섬유의 검출을위한 뼈 조직 섹션의 준비를위한 방법을 상세있다. 발바닥 펀치 biopsies에서 생산 섹션 모두 glabrous와 털이 피부를 포함하는이 프로토콜은 모든 피부 타입에 사용할 수 수있다는 것을 의미합니다. 이 기술은 또한 (예 : leukocytes, 혈관 endothelia 다른 중에서 평활근)이 조직에서 다른 세포 유형을 얼룩이 고용 수 있습니다. 이러한 방법은 우?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
그녀의 지속적인 도움을이 작품에서 건설적인 비판과 박사 도나 L. 해먼드, 우리는 공촛점 현미경 / 마우스 발바닥 펀치 생검 immunostaining의 이미징의 초기 표준화 그의 도움 박사 유리 M. Usachev 감사합니다. 이 작품은 NINDS / NIH (NS069898)에서 보조금 및 DPM에 국방 전립선 암 연구 프로그램의학과 (DOD – PCRP – 101096)에서 아이디어 개발 보조금 수상에 의해 투자되었다
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue No. | Comment |
| 3mm Harris Micro-Punch | Material | Ted Pella | 15094 | |
| Perfusion pump | Material | VWR International | 23609-170 | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Fisher Scientific | T353 | |
| Picric acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 239801 | |
| OCT Embedding compound | Reagent | Tissue-Tek | 4583 | |
| Cyto-Freeze cryogenic aerosol spray | Material | Control Company | 3118 | |
| Goat Serum | Reagent | Sigma-Aldrich | G9023 | |
| Incubation tray and lid for Immunostaining (Large) | Material | RPI Corp. | 248270 (tray) 248270-A (lid) |
|
| ImmEdge hydrophobic barrier pen | Material | Vector Laboratories | H-4000 | |
| Camel’s Hair Brushes (#1 thickness) | Material | Ted Pella | 11859 | |
| Pro‐Long Gold Mounting medium | Reagent | Invitrogen | P36930 |
Referências
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