الفيروسية تنبيغ الانتقائي للبالغين المولودين في الخلايا العصبية الشمية لالمزمنة في الجسم الحي تحفيز Optogenetic
Summary
يمكن أن الخلايا العصبية البالغين المولودين في البصلة الشمية تسيطر optogenetically Channelrhodopsin2 باستخدام الحقن ، معربا عن lentiviral في تيار الهجرة منقاري وضوئي المزمنة مع مصغرة زرع الصمام.
Abstract
وتتم تعبئة مستمرة interneurons المحلية في البصلة الشمية من القوارض الكبار 1-3. في هذه العملية ، ودعا الخلايا العصبية الكبار ، والخلايا الجذعية العصبية في جدران البطين الوحشي تثير neuroblasts التي تهاجر لعدة مليمترات على طول تيار الهجرة منقاري (RMS) للوصول إلى وتدرج في البصلة الشمية. لدراسة الخطوات المختلفة وأثر التكامل عصبون البالغين المولودين قبل الإيجاد في دوائر حاسة الشم ، فمن الضروري تسمية انتقائي والتلاعب في نشاط هذه الخلايا العصبية معينة من السكان. تطوير التكنولوجيات الحديثة optogenetic يتيح الفرصة لاستخدام الضوء لتنشيط هذا الفوج محددة بدقة من الخلايا العصبية التي تؤثر على الخلايا العصبية المحيطة بها دون 4،5. هنا ، فإننا نقدم سلسلة من الإجراءات لفيروسي أعرب Channelrhodopsin2 (ChR2) – YFP في الفوج مقيدة زمنيا من neuroblasts في RMS قبل ان تصل الى البصلة الشمية وأصبح الكبار المولد شمال شرقurons. بالإضافة إلى ذلك ، نعرض كيفية الزرع ومعايرة نموذج مصغر لLED المزمنة في تحفيز الخلايا العصبية الحية ، معربا عن ChR2.
Protocol
Discussion
تزايدت في الآونة الأخيرة أدوات Optogenetic سيطرتنا على السكان العصبية انتقائية ، بما في ذلك الخلايا العصبية الكبار ولدوا في نظام حاسة الشم. هنا نحن تصف كيفية إجراء الحقن التجسيمي لناقلات lentiviral معربا عن ChR2 – YFP في سكانية محددة من البالغين المولودين في الخلايا العصبية. من خل?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل شركة التأمين على الحياة "نوفاليس ، Taitbout" ، مدرسة قصر العلوم العصبية في باريس (ENP) ، والوكالة الوطنية للبحوث دي لا "ANR – 09 – NEUR – 004" في اطار "نيورون إيرانيت" لل FP7 البرنامج من قبل المفوضية الأوروبية ، "مؤسسة بحوث تصب لا ميديكال" ، ومؤسسة يتين ممثل ومؤسسة باستور.
Materials
| Material | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
| Pipette Puller | Sutter | P-97 |
| Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
| LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
| Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
| Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
| Pulse generator | AMPI | Master-8 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
| Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
| Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl |
Referências
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ. J. Neurosci. 28, 11089-11102 (2008).
- Mouret, A. Learning and survival of newly generated neurons: when time matters. J. Neurosci. 28, 11511-11516 (2008).
- Bardy, C. How, when, and where new inhibitory neurons release neurotransmitters in the adult olfactory bulb. J. Neurosci. 30, 17023-17034 (2010).
- Haubensak, W. Genetic dissection of an amygdala microcircuit that gates conditioned fear. Nature. 468, 270-276 (2010).
- Zhang, F. Multimodal fast optical interrogation of neural circuitry. Nature. 446, 633-639 (2007).
- Wang, X., McManus, M. Lentivirus Production. J. Vis. Exp. (32), e1499-e1499 (2009).
- Cardin, J. A. Targeted optogenetic stimulation and recording of neurons in vivo using cell-type-specific expression of Channelrhodopsin-2. Nature protocols. 5, 247-254 (2010).
- Huber, D. Sparse optical microstimulation in barrel cortex drives learned behaviour in freely moving mice. Nature. 451, 61-64 (2010).
- Arenkiel, B. R. In vivo light-induced activation of neural circuitry in transgenic mice expressing channelrhodopsin-2. Neuron. 54, 205-218 .
- Albeanu, D. F. LED arrays as cost effective and efficient light sources for widefield microscopy. PLoS ONE. 3, 2146-2146 (2008).
- Slotnick, B., Bodyak, N. Odor Discrimination and Odor Quality Perception in Rats with Disruption of Connections between the Olfactory Epithelium and Olfactory Bulbs. J. Neurosci. 22, 4205-4216 (2002).
- Gradinaru, V. Molecular and cellular approaches for diversifying and extending optogenetics. Cell. 141, 154-165 (2010).
- Valley, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons. J. Vis. Exp. (57), e3379-e3379 (2011).
