L'expérimentation animale a été approuvé par l'Office vétérinaire cantonal (Zurich, Suisse). Logement et des procédures expérimentales ont été en conformité avec la loi de protection des animaux en Suisse et se conformer à la directive européenne sur la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques (DIRECTIVE 2010/63/EU DU PARLEMENT EUROPÉEN ET DU CONSEIL du 22 Septembre 2010). 1. Pré-opératoire des considérations 1.1 Souris: les besoins en logement, l'état général et la surveillance de la santé Il est recommandé que les souris livrées par des fournisseurs ou transférés à partir des colonies de rongeurs externes doivent arriver à l'installation de logement au moins deux semaines avant la chirurgie. Cette période devrait permettre aux animaux de s'adapter au nouvel environnement et les conditions propres à l'installation de logements. Souris, que les animaux vivant sociaux, devraient être hébergés en groupes compatibles pendant cette période d'adaptation. Pour la surveillance du niveau d'un individu dealimentaires et de consommation d'eau, chaque souris est logés individuellement à partir de 3 jours avant la chirurgie jusqu'à 10 jours après l'implantation du transmetteur chirurgicale. La ligne du temps pour établir télémétrique-émetteur-souris porteuses est montré dans la figure 1. Il est crucial que les animaux proviennent d'une intervention chirurgicale en bonne santé et sa condition. Par conséquent, avant la chirurgie, les animaux doivent être surveillés une fois par jour pendant 2-3 jours sur l'état général (apparence, la posture, le comportement spontané) ainsi que pour le poids corporel, la nourriture et la consommation d'eau. Ces données sont documentés dans le dossier médical (état général et la surveillance de la santé la feuille de données, tableau 1) d'établir des niveaux de référence individuel de l'état général et la santé globale et de bien-être. Tout animal présentant des symptômes de maladie ou d'altération état général avant l'intervention chirurgicale devrait être exclu de l'expérience. 1,2 écrêtage cheveux moins un jour avant la chirurgie Le jour avant l'implantation, afin de raser les animals pour la chirurgie, les souris sont brièvement anesthésiés dans un petit (8x8x8cm) chambre de plexiglas à l'aide sévoflurane (8%) ou de l'isoflurane (5%) dans l'oxygène pur (600 mL / min). Après la perte du réflexe de redressement, la souris est prise hors de la chambre et les cheveux antérieure du cou et des douleurs abdominales est coupé avec l'animal couché dans recumbence dorsale; anesthésie est maintenue pendant environ 5 minutes avec un masque nez avec 3-4% sévoflurane ou isoflurane 1,5-3% de l'oxygène pur à un débit de 600 mL / min. Après le rognage des cheveux, les animaux sont autorisés à se réveiller et sont alors ramenés à leur cage. 2. L'implantation 2.1 Environnement d'exploitation, la préparation de l'émetteur télémétrique Le jour de l'implantation, toutes les procédures concernant la préparation du transmetteur et de la chirurgie sont effectuées sur un banc de travail avec une hotte à flux laminaire équipée d'un microscope chirurgical. Des conditions d'asepsie sont assurés par l'utilisation de l'autoclave instruments et des matériaux stérilisés et en désinfectant le banc de travail 7. Avant l'implantation, les émetteurs télémétriques (ETA-F10, Data Sciences International, St. Paul, MN, États-Unis) sont d'abord préparés. Après avoir retiré de leur emballage stérile, le conduit de l'émetteur sont raccourcies à une longueur adaptée à la taille de la souris pour être implantés. Dans la majorité des souris adultes consanguins ou consanguins, l'électrode rouge peut être réduite à environ 42 mm et l'électrode blanc / incolore à une longueur d'environ 55 mm. Isolation tube est retiré de la partie distale (sensoriel) partie de la donne: environ 20 mm de tube est enlevé de l'électrode rouge, environ 10 mm de tube est retiré de l'électrode blanc / incolore. La partie distale de chaque électrode (qui est maintenant sans tube) est formé dans une boucle par la fixation de la fin avec des sutures de soie fine (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, Allemagne). Après avoir préparé les électrodes, l'émetteur est placé dans warm saline stérile prête à être implantée lorsque l'animal est anesthésié et préparé chirurgicalement. 2.2 Anesthésie À 5-10 minutes avant l'induction de l'anesthésie par inhalation, un mélange de midazolam (4 mg / kg) et fentanyl (0,04 mg / kg) sont administrés par voie sous cutanée comme prémédication, fournissant ainsi la sédation et l'analgésie préventive. Anesthésie par inhalation générale est induite en plaçant l'animal dans la chambre de l'induction et l'introduction de l'agent volatil anesthésique (sévoflurane ou l'isoflurane 8% 5% dans l'oxygène pur 600 min ml /). Lorsque l'animal montre une perte du réflexe de redressement, il est transféré à la table de travail sous la hotte à flux laminaire, et placé dans recumbence dorsale sur une plaque métallique spécialement conçu équipé d'un masque nasal et les tubes de l'appareil d'anesthésie. L'anesthésie est maintenue par la respiration spontanée (sévoflurane ou l'isoflurane 3-4% 1,5-3% de l'oxygène pur à un débit de 600 mL / min). Pendant l'anesthésie, l'animal des yeuxs sont protégées par une pommade (vitamine A, Baush & Lomb, Steinhausen, Suisse). Tout en se trouvant sur la plaque métallique de l'animal est réchauffé par la surface au bain-marie chauffé (39 ° C + / -1) du banc de travail. 2.3 Chirurgie La peau de la région antérieure du cou et des douleurs abdominales est désinfecté avec de l'éthanol à 70%. A 1 – incision de 1,5 cm de long dans la peau est faite de la partie inférieure du thorax le long de la ligne médiane de l'abdomen. Le négatif (blanc / incolore) plomb est percé un tunnel sous-cutané du thorax à la nuque, où une petite incision (≤ 0,5 cm) est faite dans le sens longitudinal. La peau et les tissus sous-jacents sont préparés pour faire place à la fixation de la boucle de fil de l'électrode. La boucle de fil est fixé entre les muscles situés à la droite de la trachée, en utilisant deux fils de soie fine (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, Allemagne). La blessure au cou est ensuite fermée avec des sutures résorbables (Vicryl 6-0, Ethicon, Norderstedt, Allemagne) dans des couches. La paroi abdominale est alors ouvert à la ligne blanche et le corps de l'émetteur télémétrique est placé dans la cavité abdominale de souris. La boucle de fil de la borne positive (rouge) de l'électrode est suturée à la pointe du sternum avec des fils de soie de telle manière qu'elle se situe entre le foie et le diaphragme dans la région abdominale supérieure gauche (figure 2). Ensuite, les couches musculaires de la région abdominale sont fermés avec des sutures résorbables (Vicryl 6-0, Ethicon, Norderstedt, Allemagne). Avant la fermeture, enfin la paroi abdominale, un mélange de sulfadoxine et triméthoprime [(30 mg / kg et 6 mg / kg, respectivement; dissous dans 1 ml de solution saline (0,9%) et à la température corporelle d'environ (38-39 ° C)] est injecté dans la cavité abdominale à des fins de prophylaxie anti-infectieuse et de soutenir l'homéostasie des fluides. Enfin, la peau de la région abdominale est restaurée avec des agrafes (Précis, 3 soins de santé M, St. Paul, MN, États-Unis). 3. Soins post-opératoires Après achèvement de la chirurgie et l'anesthésie, 0,1 mg / kg de buprénorphine (Temgésic, Essex Chemie AG, Lucerne, Suisse) et 5 mg / kg de méloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim, Bâle, Suisse) est administré par voie sous cutanée pour le traitement de la douleur, et le les animaux sont laissés sur le chaud (39 ° C + / -1) de surface de la table de travail pour récupérer pendant environ 2h. Avec soulagement de la douleur (deux fois par jour: buprénorphine, 0,1 mg / kg et le méloxicam 5 mg / kg), une thérapie de soutien composé de 300 uL de glucose (5%) et 300 uL salée (0,9%) chauffé à la température du corps, sous-cutanée est appliquée deux fois par par jour pendant 4 jours. Pour soutenir la reprise plus loin, il est utile de fournir des animaux avec une bouteille de boisson supplémentaire contenant une solution de glucose à 15%. Pendant la période de récupération de 4-10 jours, il est recommandé que les animaux sont gardés au chaud. Par conséquent, dans notre cas, les souris sont logés dans une armoire chauffante (30 ° C + / – 1). Surveillance de l'état général et le poids corporel, commeainsi que la consommation de nourriture et d'eau, est effectuée une fois par jour en fonction de l'état général et la fiche suivi de la santé (tableau 1) pendant 10 jours post-opératoire. Humane terminaux, à savoir le sacrifice d'un animal afin d'éviter des souffrances inutiles et la douleur, si la progression de la reprise n'est pas satisfaisante, sont réalisés sous les conditions suivantes: Si, en mauvais état ​​général, c'est à dire que l'animal est sensiblement apathiques (aucun mouvement après avoir été touché / poussé) et sa surface corporelle est froid malgré le réchauffement, l'animal devrait être euthanasiés immédiatement. Si, le jour 4 après l'implantation du transmetteur, l'animal montre des signes clairs de l'apathie, est extrêmement agressif ou ne montre aucun apport alimentaire, il devrait être euthanasiés immédiatement. Au jour 8 après l'implantation du transmetteur, l'animal a à afficher une nette augmentation de poids corporel par rapport à la précédente jour post-opératoire. Par ailleurs, il a à consommer à lEst 80% de l'apport pré-opératoire de nourriture quotidienne. Si une de ces conditions n'est pas remplie, l'animal devrait être euthanasiés immédiatement. A 10 jours après l'implantation, l'animal est transféré à la salle des animaux dans des conditions de logement standard. Souris devraient être hébergés en groupes compatibles pour permettre l'interaction sociale et à prévenir les effets néfastes à long terme de logements individuels, qui peuvent avoir des répercussions importantes sur la lecture des expériences subséquentes 8, 9. Souris devraient avoir une période d'au moins 4 semaines après l'implantation de convalescence émetteur avant la première expérience est menée et l'acquisition des données commence. 4. Acquisition de données La collecte des données est initiée par toucher l'animal avec un aimant, sur quoi l'émetteur est allumé. Dataquest ART Logiciel (Data Sciences International, St. Paul, MN, États-Unis) coordonne la détection, la collecte, l'analyse et grPrésentation aphical (sous la forme de formes d'onde) des signaux d'un ou plusieurs animaux. Le programme d'acquisition de données recueille les signaux envoyés à l'ordinateur des convertisseurs et des récepteurs via une matrice d'échange de données (Data Sciences International). Ce programme peut recueillir des données pour une durée déterminée à des intervalles réguliers ou d'un échantillon continu et enregistrer les données sur le disque dur de l'ordinateur. Comme la gamme et la qualité du signal émis dépend fortement de la composition du matériau de la cage et l'équipement environnant (par exemple en métal vs plastique), il est suggéré que la plaque du récepteur est placé au plus près à l'animal que possible, par exemple sous la animaux en cage ou au-dessus de la zone, banc expérimental en laboratoire, par exemple ou un tapis roulant. Il est recommandé que la configuration correcte du système de transmission de données d'enregistrement et être vérifié en faisant un bref examen des mesures en temps réel en mode d'échantillonnage en continu. Une fois les données ont été recueillies et stockées, elles peuvent être tracéTed, répertoriés et analysés pour une variété de différents paramètres en utilisant le programme d'analyse. Détails de la configuration du système d'enregistrement (par exemple la définition de l'échantillonnage operandi), et le logiciel d'analyse (par exemple pour les paramètres de la fréquence cardiaque variabilité, PQ intervalle et l'intervalle QT établi à partir de biopotentiel / ECG courbes) peuvent être trouvées dans les manuels du fabricant. Conseils utiles pour la planification biométrique et les méthodes statistiques utiles pour l'acquisition des données télémétriques et d'interprétation sont publiés par ailleurs 3. 5. Les résultats représentatifs: Un schéma d'ensemble de la procédure décrite est montré dans la figure 1. La position de l'émetteur implanté, y compris l'emplacement des électrodes pour obtenir biopotentiels du coeur (un ECG) est montré dans la figure 2. Exemples de données brutes à partir des courbes de court terme biopotentiel (un ECG) et la fréquence cardiaque à long terme, la température centrale du corps et des enregistrements de l'activité locomotrice de la personnesouris sont donnés dans la Figure 3 et Figure 4, respectivement. La figure 5 donne un exemple des données publiées à partir des mesures à long terme dans des groupes de souris après une expérience. Plusieurs autres paramètres peuvent être établies à partir des courbes biopotentiels. Exemples de présentation des paramètres cardiaques variabilité des taux de 5, l'intervalle QT et PQ intervalle de 10, 11 sont publiés par ailleurs. Tableau 1. Etat général et de surveillance de la santé la feuille de données. Cliquez ici pour télécharger la fiche. Ce modèle facilite le suivi de l'état général d'une souris individu et la santé. L'examen de base de l'apparence d'un animal, la posture et le comportement spontané, ainsi que la détermination du poids corporel et la consommation d'aliments et d'eau doit être établi avant la chirurgie d'implantation une fois par jour pendant 3 jours. Comparaison du dosage de base avec ceux obtenuspar jour pendant 10 jours après la chirurgie permettent d'évaluer la progression de la récupération post-opératoire. En outre, les soins post-opératoires et de traitement de la douleur sont bien documentés dans la forme d'un dossier médical. Instructions sur les paramètres humains sont donnés afin de faciliter les décisions à savoir si une souris doit être sacrifiée pour éviter des souffrances inutiles si l'animal ne répond pas aux critères pour une récupération rapide après l'implantation. Figure 1. Horaire de l'établissement émetteur télémétrique-souris porteuses. Ordre chronologique des procédures relatives à l'implantation d'un émetteur montrant les points de temps au cours de laquelle une souris peut être utilisée pour des expériences et l'acquisition de données. Figure 2. Radiographie / croquis montrant l'emplacement de l'Telemet implantéTransmetteur ry. Le corps de l'émetteur est placé dans la cavité abdominale. Le fil positif est formé dans une boucle de fil et fixes à la pointe du sternum avec des sutures. Le plomb est négative tunnel sous-cutané du thorax à la nuque et fixe comme une boucle de fil entre les muscles directement à côté de la trachée. La radiographie est tirée de la publication par les auteurs précédents en 9 animaux de laboratoire. Figure 3. Biopotentiel courbes. Raw impression des courbes de l'ECG d'un plomb de la souris conscient et d'un même animal sous anesthésie par inhalation avec le sévoflurane. La fréquence cardiaque est calculée automatiquement par le système de télémétrie. La séquence de 3 secondes enregistrées sous anesthésie indique une fréquence cardiaque de 440 bpm. La courbe enregistrée chez la souris montre consciente une fréquence cardiaque de 660 bpm, qui s'inscrit dans la fourchette prévue de la fréquence cardiaque pendant le modeTaux des activités physiques comme le toilettage ou de manger. De courbes ECG biopotentiel / un-plomb, les paramètres de fréquence cardiaque variabilité, l'intervalle entre les battements, et PQ et l'intervalle QT peut être établie avec l'utilisation des logiciels du fabricant. Figure 4. Les données brutes provenant mesures à long terme chez la souris saines et malades. Fréquence cardiaque (bpm), la température centrale du corps (° C) et l'activité locomotrice (chiffres) sont mesurées alors que les souris sont logés individuellement dans leur cage sans aucune perturbation des procédures de l'homme ou expérimentales. La fréquence cardiaque est enregistrée pendant 30 secondes toutes les 5 minutes (fréquence d'échantillonnage à 1000 Hz). Température centrale du corps est échantillonné pendant 10 secondes toutes les 5 minutes. L'activité locomotrice est enregistrée en continu et stockés à 5 minutes d'intervalle. Points de données de cinq minutes sont tracées pour les 6,5 jours. Les mesures télémétriques sont enregistrées à partir de trois souris avec différentsconditions corporelles. La souris saines montre un rythme circadien clairs avec des hausses normales des valeurs physiologiques et le comportement de l'activité locomotrice pendant la nuit (la nuit) de phase. En revanche, après une chirurgie majeure, la fréquence cardiaque est augmenté, en particulier dans la phase de la lumière du jour, et l'activité locomotrice est déprimé. Le troisième souris souffraient de maladies chroniques de sa tumeur du rythme circadien du rythme cardiaque et la température centrale du corps apparaît aplati, et l'activité locomotrice est diminuée. Données représentatives de la fréquence cardiaque (valeurs normales et après une chirurgie majeure) sont extraites de la publication par les auteurs précédents Altex 12. Figure 5. Exemple de présentation des résultats de mesures de télémétrie à long terme après une expérience. Le chiffre est tiré de la publication par les auteurs précédents en 1 les animaux de laboratoire. Comme une expérience exemplaire, un isofl de 50 minutesL'anesthésie Urane ou sévoflurane a été exécuté. L'impact à long terme de l'anesthésie sur la fréquence cardiaque, température corporelle et l'activité locomotrice après que les animaux étaient éveillés a été comparée. En utilisant 16 émetteurs implantés souris, les données télémétriques ont été enregistrés dans huit souris par anesthésie tandis que les animaux ont été logés individuellement et autorisés à errer librement dans leurs cages à domicile. Pour l'analyse des effets de salle de réveil à long terme, nous avons pris en compte que les valeurs varient fortement au cours d'un cycle de 24 h puisque les souris sont actifs surtout la nuit. Par conséquent, les moyennes des valeurs télémétrique pour chaque animal ont été calculés séparément pour la nuit (12 h d'obscurité) et le jour (12 h de lumière) phases. Des valeurs normales d'un individu ont été établies par des moyens de calcul à partir des trois jours avant l'anesthésie. Pour chaque jour après l'anesthésie, la moyenne de la phase d'obscurité et de lumière a été comparée à des valeurs normales de l'individu, résultant en des valeurs delta. Ainsi, les valeurs du delta représentent l'écart par rapport aux valeurs normales (établies avantà l'anesthésie) à la correspondante de 12 h jour et la nuit. Colonnes représentent la moyenne de huit souris; barres indiquent l'écart type. Les astérisques indiquent la significativité à P ≤ 0,05 (One-analyse de la variance pour la comparaison des moyennes de groupe à chacun des quatre jours après l'anesthésie avec des valeurs normales).