M細胞による細菌の取り込みを評価するパイエル板腸管ループアッセイを連結したマウスのアプリケーション

私たちの腸の内側には共生細菌の膨大な数で生息しています。消化管の粘膜表面は、継続的に、時には病原体にさらされています。腸管関連リンパ組織（GALT）は、これらの微生物^1、2への粘膜免疫応答の誘導に重要な役割を果たす。粘膜免疫応答を開始するには、粘膜の抗原は、パイエル板などの組織リンパ濾胞に上皮バリアを介して腸管内腔から運ばれている必要があります。この抗原のトランスは、特殊な上皮M細胞^3、4によって媒介される。 M細胞は積極的に高分子や微生物を貪食非定型上皮細胞である。樹状細胞（DC）とマクロファージ、分解のためにリソソームへの標的抗原とは異なり、M細胞は主に内部化された抗原をtranscytose。 M細胞を介してこの積極的な高分子のトランスサイトーシスは、基盤となる組織リンパ濾胞に抗原を提供dは、抗原特異的粘膜免疫応答を開始するために不可欠であると考えられている。しかし、M細胞がこの抗原取り込みを促進する分子機構はほとんど不明です。我々は以前、特に腸の中のM細胞の頂端部細胞膜上に発現する糖タンパク質2（GP2）は、 大腸菌やサルモネラ血清型ネズミチフス菌（S.ネズミチフス菌を含む共生と病原性腸内細菌のサブセットのためのtranscytotic受容体として機能することを報告している）、FimH、細菌の外膜⁵上のI型線毛の成分を認識すること。ここで、我々は、マウスのパイエル板腸管ループアッセイのアプリケーションM細胞による細菌の取り込みを評価するための方法を提示する。このメソッドは、以前に^6,7を説明したマウス腸管ループアッセイの改良版です。改良点は以下のとおりである：1。イソフルランは、麻酔剤として使用した。 2。約1cm結紮腸管ループincludINGパイエル板が設置されました。 3。 M細胞に取り込ま細菌は、蛍光の蛍光標識試薬によってまたは緑色蛍光タンパク質（GFP）などの過剰発現蛍光タンパク質で標識した。 4。パイエル板を覆う濾胞関連上皮におけるM細胞は、抗GP2抗体でホールマウントimmunostainigにより検出した。 5。 M細胞による蛍光細菌のトランスは、共焦点顕微鏡分析により観察した。マウスパイエル板腸管ループアッセイは、どのようなM細胞によってtranscytosed共生や病原性細菌の答えを供給することができる、とM細胞を介して粘膜免疫系を刺激する方法の分子機構を理解するのにつながる可能性があります。