Zoledronate İnsan Periferik Kan Genişleme γδ T Hücreler
Summary
Γδ T hücreleri periferik kan mononükleer hücreleri (hücre) genişletmek için bir yöntem açıklanmıştır. Hücre-kökenli γδ T hücreleri uyarılır ve zoledronate ve interlökin-2 (IL-2) ile genişletilir. Γδ T hücrelerinin büyük ölçekli genişlemesi kanser otolog hücresel immünoterapi uygulanabilir.
Abstract
İnsan γδ T hücreleri tanımak ve stres kaynaklı antijenleri geniş bir yelpazede cevap, böylece doğuştan gelen geniş bir anti-tümör ve anti-enfektif aktivite gelişmekte olan 1, periferik kan γδ T hücrelerinin çoğunluğu Vγ9Vδ2 T hücre reseptör var . Bu hücreler, büyük doku uygunluk kompleksi-bağımsız bir şekilde antijeni tanıması ve güçlü sitolitik ve Th1 gibi efektör fonksiyonları gelişir. 1 Bu nedenle, γδ T hücrelerinin, kanser immünoterapi için cazip aday efektör hücreleri vardır. Vγ9Vδ2 T hücreleri gibi phosphoantigens cevap (E)-4-hidroksi-3-metil-ama-2-enyl pirofosfat (HMBPP), izoprenoid biyosentezi ile bakteriler sentezlenir; üretilen 2 ve izopentenil pirofosfat (IPP), mevalonata yolu 3 fizyolojik durumu ile ökaryot hücreler, IPP nontransformed hücre üretimi γδ T hücrelerinin aktivasyonu için yeterli değildir. Düzensizliği, tümör hücrelerinde mevalonata yolun IPP birikimi ve γδ T hücrelerinin aktivasyonu yol açar. 3 aminobisphosphonates (örneğin, pamidronat veya zoledronate) farnesil pirofosfat sentaz (SOP), mevalonata yolu IPP mansabında hareket eden enzim, hücre içi düzeylerini inhibe Çünkü γδ T hücreleri tanıma IPP ve sensitibity terapötik aminobisphosphonates artabilir. IPP birikimi nontransfomred hücreleri aminobisphosphonates ile γδ T hücreleri aktive ederek kanser için bize izin immünoterapi aminobisphosphonates farmakolojik ilgili bir konsantrasyon ile tümör hücrelerinin daha az verimlidir. PBMC aminobisphosphonates ile tedavi edildiklerinde 4 İlginçtir, IPP çünkü verimli, monositler birikir bu hücreler tarafından ilaç alımı. IPP antijen-sunan hücreler haline ve periferik kan Vγ9Vδ2 T hücreleri uyarmak birikir 5 Monositler 6 bu mekanizmalar dayanarak, biz γδ T hücre kültürleri zoledronate ve interlökin kullanarak büyük ölçekli genişlemesi için bir teknik geliştirdi -2 (IL-2). sentetik phosphoantigens bromohydrin pirofosfat (BrHPP) 8 ya da 2-metil-3-butenyl-1-pirofosfat (2M3B1PP) 7 γδ T hücrelerinin genişlemesi için diğer yöntemler kullanmaktadır. 9 Tüm bu yöntemlerin eski izin evlatlık immünoterapi kullanmak için γδ T hücrelerinin çok sayıda in vivo genişlemesi. Ancak, zoledronate sadece bir FDA onaylı piyasada bulunan reaktif. CD45RA – – Zoledronate-genişletilmiş γδ T hücreleri CD27 ekran efektör bellek fenotipi ve fonksiyonu IFN-γ üretimi tahlil 7 değerlendirilebilir.
Protocol
Discussion
Burada sunulan yöntem PBMC γδ T hücrelerinin verimli genişleme sağlar. γδ T hücrelerinin etkinleştirilmesi ve geliştirilmesi zoledronate ve IL-2 sitokin üretim ve sitotoksisiteye yansıyan tam efektör fonksiyonları, geliştirmek. Bildirilmiştir sentetik phosphoantigens bromohydrin pirofosfat (BrHPP) ve 2-metil-3-butenyl-1-pirofosfat (2M3B1PP) γδ T hücreleri genişletmek, ancak ticari olarak mevcut değildir. Buna karşılık, zoledronate zaten Zometa gibi klinik uygulamalar için lisanslıdır. Bu nede…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| ZOMETA | Novartis Pharma K. K | zoledronate | |
| PROLEUKIN | Novartis Pharmaceuticals | human recombinant IL-2 | |
| BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with Sodium Heparin | BD | 362753 | |
| RPMI1640 | Invitrogen | 21870-076 | |
| ALyS203- medium | Cell Science & Technology Institute | 0301-7 | |
| OpTmizer | Invitrogen | 0080022SA | |
| brefeldin A | Sigma | B5936-200UL | |
| phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma | P1585-1MG | |
| ionomycin | Sigma | 13909-1ML | |
| IntraPrep | BECKMAN COULTER | A07803 | |
| anti-human CD3-FITC or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07746 FITC A07749 PE/Cy5 |
|
| anti-human CD4-ECD | BECKMAN COULTER | 6604727 | |
| anti-human CD8-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607011 | |
| anti-human CD14-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07765 | |
| anti-human CD19-PE | BECKMAN COULTER | A07769 | |
| anti-human CD45-ECD | BECKMAN COULTER | A07784 | |
| anti-human CD56-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07789 | |
| anti-human TCRαβ-PE | BECKMAN COULTER | A39499 | |
| anti-human TCR Vγ9-FITC | BECKMAN COULTER | IM1463 | |
| anti-human CD27-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607107 | |
| anti-human CD45RA-ECD | BECKMAN COULTER | IM2711 | |
| anti-human CD69-PE | BD | 555531 | |
| anti-human NKG2D-PE | BECKMAN COULTER | A08934 | |
| Anti-humal IFNγ-PE | BECKMAN COULTER | IM2717U | |
| Mouse IgG1 isotype control-PE | BECKMAN COULTER | A07796 | |
| Mouse IgG1 isotype control-ECD or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07797 A07798 |
Referências
- Bonneville, M., O’Brien, R. L., Born, W. K. γ T cell effector functions: a blend of innate programming and acquired plasticity. Nat Rev Immunol. 10, 467-478 (2010).
- Hintz, M. Identification of (E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl pyrophosphate as a major activator for human γδ T cells in Escherichia coli. FEBS Lett. 509, 317-322 (2001).
- Gober, H. J. Human T cell receptor γδ cells recognize endogenous mevalonate metabolites in tumor cells. J Exp Med. 197, 163-168 (2003).
- Kabelitz, D., Wesch, D., He, W. Perspectives of gammadelta T cells in tumor immunology. Cancer Res. 67, 5-8 (2007).
- Roelofs, A. J. Peripheral blood monocytes are responsible for gammadelta T cell activation induced by zoledronic acid through accumulation of IPP/DMAPP. Br J Haematol. 144, 245-250 (2009).
- Dieli, F. Induction of γδ T-lymphocyte effector functions by bisphosphonate zoledronic acid in cancer patients in vivo. Blood. 102, 2310-2311 (2003).
- Kondo, M. Zoledronate facilitates large-scale ex vivo expansion of functional γδ T cells from cancer patients for use in adoptive immunotherapy. Cytotherapy. 10, 842-856 (2008).
- Espinosa, E. Chemical synthesis and biological activity of bromohydrin pyrophosphate, a potent stimulator of human γδ T cells. J Biol Chem. 276, 18337-18344 (2001).
- Kobayashi, H. Safety profile and anti-tumor effects of adoptive immunotherapy using γδ T cells against advanced renal cell carcinoma: a pilot study. Cancer Immunol Immunother. 56, 469-476 (2007).
- Murali-Krishna, K. Counting antigen-specific CD8 T cells: a reevaluation of bystander activation during viral infection. Immunity. 8, 177-187 (1998).
- Sato, K. Impact of culture medium on the expansion of T cells for immunotherapy. Cytotherapy. 11, 936-946 (2009).
- Abe, Y. Clinical and immunological evaluation of zoledronate-activated Vγ9 γδT-cell-based immunotherapy for patients with multiple myeloma. Exp Hematol. 37, 956-968 (2009).
- Nakajima, J. A phase I study of adoptive immunotherapy for recurrent non-small-cell lung cancer patients with autologous γδ T cells. Eur J Cardiothorac Surg. 37, 1191-1197 (2010).
