Caracterización de los mecanismos de resistencia Herbívoro: salivazo en Brachiaria Spp. como ejemplo

1. Plantas Esquejes solo tallo de las plantas maduras se usan como unidades experimentales. Los esquejes se cortan a 10 cm para asegurar la uniformidad del material de siembra. Para prevenir la contaminación por patógenos de las plantas, los cortes se lavan en una solución de hipoclorito de sodio al 3% durante 2 minutos y luego enjuagar con agua del grifo thoughroughly. Cada corte se siembra en ca. 36 g de suelo estéril en un tubo cilíndrico de PVC (5,3 cm de diámetro exterior de 6,5 cm de altura) sellado en el extremo inferior con un vaso de plástico y cubierto con un manguito de PVC. El corte se mantiene en su lugar por un anillo de espuma colocada en la abertura central del buje. Las plantas son fertilizados y regados según sea necesario para mantener la humedad adecuada del suelo. Las plantas crecen durante un mes antes de ser cuestionado por los insectos, lo que permite el desarrollo de raíces superficiales, que sirven como lugares de alimentación de las ninfas del salivazo raíz de alimentación del xilema. Tubos de PVC con estacas enraizadas se invierten durante 8 días antes de la infestación para estimular aún más el crecimiento de las raíces superficiales, parte de ajustar las diferencias inherentes a la arquitectura de las raíces. Este paso requiere de una fuente artificial de luz, que nos ofrecen para el día 24 ha. Para evitar escapes de confusión de los herbívoros con resistencia a los herbívoros, de cada planta se reproduce con raíces superficiales pocas o ninguna inversión después de este tratamiento son eliminados del experimento. Esta eliminación debe ser poco frecuente, no conduce a la eliminación del genotipo que representan. 2. Los insectos Salivazo adultos son recogidos en el campo, identificaron a las especies, e introdujeron a las jaulas de oviposición en el que se proporcionan follaje de brachiariagrasses susceptibles a alimentarse. Las hembras ponen sus huevos en el suelo contenido en una bandeja de poca profundidad extraíble colocada en el fondo de las jaulas. Después de varios días, la tierra está suspendida en el agua y pasa a través de una serie de tamices (42, 60 y malla 150) para recoger los huevos. La suspensión del material tamizado en una solución salina al 30% hace que los óvulos maduros para flotar, dejando tras de óvulos inmaduros y cualquier materia orgánica residual. Para prevenir la contaminación por agentes patógenos de insectos, los huevos son desinfectados en una solución de hipoclorito de sodio al 0,5% durante 5 minutos y luego enjuagar con agua destilada. Cada planta (unidad experimental) está infestada en la superficie del suelo con seis huevos maduros. Sólo los óvulos maduros cerca de la eclosión se seleccionan para las infestaciones. Se los puede identificar por la presencia de dos puntos rojos en su parte anterior, que corresponde a los ojos de los insectos, marcas de color rosa en su parte posterior, correspondiente al abdomen del insecto, y un opérculo totalmente expandido. El éxito de eclosión se confirma cuatro días más tarde, momento en el que cualquier huevo sin eclosionar se sustituye por un salivazo recién nacido de nuestra colonia. Las plantas están dispuestos en un diseño de bloques completos al azar con seis repeticiones por genotipo. 3. Evaluaciones El experimento se evalúa ca. 30 días después de la infestación (tiempos exactos varían dependiendo de las especies de insectos estudiados). Los daños se califica en una escala de 1 a 5 visual, donde 1 corresponde a ningún daño visible y 5 corresponde a una planta muerta (Figura 1). Daños a las plantas de puntuación proporciona una estimación de la tolerancia. Figura 1. Daños escala utilizada para evaluar la tolerancia al salivazo herbivoría en Brachiaria spp. 1 = sin daño detectable, 2 = 0-25% hojas necróticas, 3 = 25-50% de hojas necróticas, 4 = 50-75% de hojas necróticas y 5 = 75-100% de hojas necróticas. La supervivencia del insecto se evaluó contando los insectos o bien llegar a su estadio final o el estado adulto (Figura 2). La puntuación para la supervivencia del insecto se ofrece una estimación de la antibiosis. Figura 2. Salivazo desarrollo de primer estadio (izquierda) a la edad adulta (derecha). Insectos sólo llega por lo menos en su estadio final (flechas) en la fecha de evaluación se consideran como "sobrevivientes". 4. Los resultados representativos Los resultados de un ensayo de híbridos de Brachiaria representante de la detección de resistencia a la reducta salivazo Aeneolamia se presentan en la Figura 3. Figura 3. Los resultados de detección híbridos de Brachiaria resistentes a salivazo Aeneolamia reducta. Consideramos que las plantas resistentes, si su respuesta a la herbivoría cae en la mitad inferior de esta trama. Aumenta antibiosis de derecha a izquierda y aumenta la tolerancia de arriba a abajo. Las flechas señalan nuestros cheques resistentes.