Выделение функциональных сердечно иммунных клеток
Summary
Этот метод выделения функциональных иммунных клеток из сердца представляет собой альтернативу обычным методам коллагеназы пищеварение, что приводит к нежелательной активации иммунной клетки, в результате чего снизилась чувствительность этих клеток. Наш метод изоляции дает функциональной сердечной клетки иммунной системы, избегая проблем, связанных с ферментативного пищеварения.
Abstract
Сердечные клетки иммунной системы приобретают интерес к роли, которую они играют в патологический ремоделирования во многих сердечных заболеваний 1-5 Эти клетки иммунной системы, в том числе тучные клетки, Т-клетки и макрофаги;. Хранение и различных биологически активных медиаторов, включая цитокины и протеазы, такие как триптазы. 6-8 Эти посредники было показано, что ключевую роль в метаболизме внеклеточной матрицы, активизируя матричных металлопротеиназ или причинение коллагена накопления модулирующей функции сердечных фибробластов. 9-11 Тем не менее, имеющиеся методы для выделения сердечной клетки иммунной системы имеют было проблематично, поскольку они используют бактериальные коллагеназы переваривать ткани миокарда. Этот метод вызывает активацию иммунных клеток и, следовательно, потеря функции. Например, сердечные тучные клетки становятся значительно менее чувствительны к соединениям, которые вызывают дегрануляцию 12. Поэтому мы разработали методику, которая позволяет тОн изоляции функциональных сердечных клеток иммунной которые привели бы к более глубокому пониманию роли этих клеток в сердечной болезни. 13, 14
Этот метод требует знакомства с анатомического расположения мечевидного отростка крысы, подмышечной впадины и серповидной связки, и перикарда сердца. Эти ориентиры важны для увеличения успеха процедуры и обеспечить более высокую доходность сердечных клеток иммунной системы. Эти изолированные иммунные клетки сердечной затем могут быть использованы для характеристики функциональности, фенотип, зрелость и совместное культуры эксперименты с другими сердечными клетками, чтобы получить лучшее понимание их взаимодействия.
Protocol
Discussion
Этот метод выделения сердечной клетки иммунной системы дает возможность анализа их функции, фенотип, и зрелость без нежелательных активации, который обычно происходит во время традиционного ферментативную технику изоляции пищеварения. Среднее общее число клеток, полученных с помощь…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана UNCF-Мерк Высшей научно-исследовательский диссертации стипендий (JLM), Национальный институт сердца, легких и крови институт грантов RO1-HL-62228 (JSJ) и RO1-HL-073 990 (JSJ).
Materials
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
| Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
| HEPES | Sigma | H3784 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
| 250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
| 12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
| 10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
| Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| 3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
| Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
| Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
| Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
| 10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
| 15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
| Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
| Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |
Referências
- Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).
- Brower, G. L., Janicki, J. S. Pharmacologic inhibition of mast cell degranulation prevents left ventricular remodeling induced by chronic volume overload in rats. Journal of Cardiac Failure. 11, 548-556 (2005).
- Chancey, A. L., Brower, G. L., Janicki, J. S. Cardiac mast cell-mediated activation of gelatinase and alteration of ventricular diastolic function. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 282, H2152-H2158 (2002).
- Levick, S. P., Gardner, J. D., Holland, M., Hauer-Jensen, M., Janicki, J. S., Brower, G. L. Protection from adverse myocardial remodeling secondary to chronic volume overload in mast cell deficient rats. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43, 56-61 (2008).
- Levick, S. P., McLarty, J. L., Murray, D. B., Freeman, R. M., Carver, W. E., Brower, G. L. Cardiac Mast Cells Mediate Left Ventricular Fibrosis in the Hypertensive Rat. Hypertension. 53, 1041-1047 (2009).
- Batista, M. L., Santos, R. V., Cunha, L. M., Mattos, K., Oliveira, E. M., Seelander, M. C. Changes in the pro-inflammatory cytokine production and peritoneal macrophage function in rats with chronic heart failure. Cytokine. 34, 284-290 (2006).
- Galli, S. J., Tsai, M. Mast Cells: Versatile regulator of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis. Journal of Dermatological Science. 49, 7-19 (2008).
- Yndestad, A., Holm, A. M., Muller, F., Simonsen, S., Froland, S. S., Gullested, L. Enhanced expression of inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with chronic heart failure. Cardiovasc. Res. 60, 141-146 (2003).
- Bozkurt, B., Kribbs, S. B., Clubb, F. J., Michael, L. H., Didenko, V. V., Hornsby, P. J. Pathophysiologically Relevant Concentrations of Tumor Necrosis Factor-ɑ Promote Progressive Left Ventricular Dysfunction and Remodeling in Rats. Circulation. 97, 1382-1391 (1998).
- Frangogiannis, N. G., Lindsey, M. L., Michael, L. H., Youker, K. A., Bressler, R. B., Mendoza, L. H. Resident Cardiac Mast Cells Degranulate and Release Preformed TNF-ɑ, Initiating the Cytokine Cascade in Experimental Canine Myocardial Ischemia/Reperfusion. Circulation. 98, 699-710 (1998).
- Jobe, L. J., Melendez, G. C., Levick, S. P., Du, Y., Brower, G. L., Janicki, J. S. TNF-α inhibition attenuates adverse myocardial remodeling in a rat model of volume overload. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1462-H1468 (2009).
- Forman, M. F., Brower, G. L., Janicki, J. S. Spontaneous histamine secretion during isolation of rat cardiac mast cells. Inflammation Research. 53, 453-457 (2004).
- Levick, S. P., Murray, D. B., Janicki, J. S., Brower, G. L. Sympathetic nervous system modulation of inflammation and remodeling in the hypertensive heart. Hypertension. 55, 270-276 (2010).
- Morgan, L., Levick, S., Voloshenyuk, T., Murray, D., Forman, M., Brower, G. A novel technique for isolating functional mast cells from the heart. Inflammation Research. 57, 241-246 (2008).
