الفحص في المختبر من الالتصاق الجرثومي على الخلايا الظهارية الثدييات
Summary
هذا البروتوكول هو بسيط مقايسة التصاق البكتيريا التي تتكون في عد الأرقام من مستعمرة بكتيرية تشكيل الوحدات التي انضمت على الخلايا المستنبتة. درس مستقل للadhesin للمقايسة وقوية ، وتستخدم العديد من الاختلافات في معظم المختبرات تعمل على المرضية البكتيرية.
Abstract
تسبب الالتهابات ، ويجب أن البكتيريا تستعمر المضيفة لهم. التعبير عن مسببات الأمراض البكتيرية الجزيئات المختلفة أو هياكل قادرة على تعزيز مرفق لاستضافة الخلايا 1. هذه التفاعلات تعتمد على adhesins مع مستقبلات سطح الخلية المضيفة أو البروتينات القابلة للذوبان ، بوصفها جسرا بين البكتيريا والمضيف. التصاق هو خطوة أولى حاسمة قبل الغزو و / أو إفراز السموم ، وبالتالي فإنه يعد حدثا رئيسيا للدراسة في المرضية البكتيرية. علاوة على ذلك ، انضمت البكتيريا كثيرا ما تدفع بشكل رائع صقل الاستجابات الخلوية ، والدراسات التي وضعن في ميدان 2 'الميكروبيولوجيا الخلوية. المقايسات قوية لالتصاق البكتيريا في الخلايا المضيفة وغزوهم بالتالي تلعب دورا رئيسيا في الدراسات المرضية البكتيرية ومنذ فترة طويلة استخدمت في العديد من المختبرات الرائدة 3،4. وتمارس هذه المقايسات الآن من قبل معظم المختبرات تعمل على المرضية البكتيرية.
هنا ، نحن تصف مقايسة التقيد القياسية توضح مساهمة من adhesin محددة. نستخدم سلالة القولونية 2787 5 ، سلالة الإنسان معربا عن Adhesin شاحنة نقل سيارات شارك في الانضمام منتشر (AIDA). كعنصر تحكم ، ونحن نستخدم سلالة طافرة تفتقر إلى الجين عايدة ، 2787Δ عايدة (F. بيرثيوم وMourez M. ، غير منشورة) ، وسلالة والمختبرات التجارية E. القولونية ، C600 (نيو إنجلاند Biolabs). وتترك هذه البكتيريا على الانضمام إلى الخلايا من يشيع استخدامها HEP – 2 خط الخلايا الظهارية البشرية. وقد تم هذا الاختبار على نطاق واسع أقل صفها قبل 6.
Protocol
Discussion
يصف هذا البروتوكول معيارا مقايسة التقيد البكتيرية التي يمكن تعديلها لدراسة الغزو (مثل استخدام الجنتاميسين حماية مقايسة 3). عد من وحدات تشكيل مستعمرة يسمح الكمي ، وذلك بالمقارنة مع الأساليب التي تعتمد على تقنيات التصوير القياسية تحت المجهر ، مثل تلطيخ بالغيمزا….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم العمل في المختبرات من المؤلفين من المنح المقدمة من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث وكندا ، والمعاهد الكندية للأبحاث الصحية ، وبرنامج كراسي البحث كندا. معتمد من قبل JL الزمالة من ديفوار جروب القطعة الموسيقية Membranaires Protéines قصر (GEPROM) من خلال التمويل من ان فون بحوث دي سانتي دو كيبيك.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
Referências
- Kline, K. A. Bacterial adhesins in host-microbe interactions. Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).
- Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. Cellular microbiology emerging. Science. 271, 315-315 (1996).
- Elsinghorst, E. A. Measurement of invasion by gentamicin resistance. Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).
- Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).
- Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).
- Benz, I., Schmidt, M. A. Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli. Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).
- Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I). J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).
- Jacques, M., Paradis, S. E. Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae. FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).
- Auger, E. Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells. Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).
- Jacques, M. Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence. Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).
- Nataro, J. P., Kaper, J. B. Diarrheagenic Escherichia coli. Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).
- Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors. Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).
