الثقافة السابقين فيفو من خلايا الإنسان الأولية قناة فالوب طلائي
Summary
قناة فالوب (FT) آخذة في الظهور كموقع بديل المنشأ لسرطان المبيض المصلي (SOC). هذا البروتوكول يصف طريقة جديدة لعزل و<em> خارج الحي</em> الثقافة من الخلايا الظهارية قناة فالوب. يلخص هذا النظام<em> في الجسم الحي</em> ظهارة ويسمح للدراسة المرضية SOC.
Abstract
طلائي سرطان المبيض هو السبب الرئيسي لوفيات السرطان في النساء في الولايات المتحدة. على النقيض من سرطانات النساء محددة أخرى ، مثل سرطان الثدي والرحم ، حيث انخفضت معدلات الوفيات في السنوات الأخيرة ، ظلت معدلات المبيض علاج السرطان دون تغيير نسبيا خلال العقدين الماضيين 1. هذا يرجع إلى حد كبير إلى عدم وجود أدوات الفحص المناسبة للكشف عن المرض مرحلة مبكرة حيث الجراحة والعلاج الكيميائي هي الأكثر فعالية 2 ، 3. ونتيجة لذلك ، ومعظم المرضى يعانون من مرض الحاضر مرحلة متقدمة والمشاركة في البطن منتشر. ويزيد من تعقيد هذه من حقيقة أن سرطان المبيض هو مرض غير متجانسة مع أنواع فرعية متعددة نسيجية 4 ، 5. سرطان المبيض المصلي (SOC) هو الاكثر شيوعا النوع الفرعي والعدوانية والشكل في أغلب الأحيان ترتبط طفرات في جينات BRCA. النماذج التجريبية الحالية في هذا المجال تنطوي على استخدام خطوط الخلايا السرطانية ونماذج الماوس إلى فهم أفضل للبدء الأحداث الجينية والمرضية للمرض 6 ، 7. مؤخرا ، ظهرت قناة فالوب كموقع رواية عن أصل شركة نفط الجنوب ، مع قناة فالوب (FT) الخلايا الطلائية الإفرازية (FTSEC) باعتبارها الخلية المقترحة من أصل 8 و 9. لا يوجد حاليا أي خطوط الخلايا أو أنظمة الثقافة المتاحة للدراسة أو ظهارة FT FTSEC و. نحن هنا وصف فيفو السابقين رواية نظام الثقافة حيث يتم استزراع الخلايا الأولية FT الظهارية البشرية بطريقة تحافظ على فن العمارة ، قطبية ، نمط ظاهري مناعي ، وردا على الضغوطات الفيزيولوجية والسامة. هذا النموذج فيفو السابقين يوفر أداة مفيدة لدراسة SOC ، والسماح لفهم أفضل للكيفية التي يمكن أن تنشأ الأورام من هذا النسيج ، والآليات التي تشارك في بدء الورم والتقدم.
Protocol
Discussion
التعرف على FT كموقع مرشح من أصل لشركة نفط الجنوب يتيح الفرصة لإجراء البحوث الأساسية وتهدف إلى فك رموز متعدية آليات ربط عوامل الخطر المعروفة والفعلي لعملية مسرطنة مصلي. هذه هي حاسمة لتطوير نظم نموذج الانقياد التي سوف تمكننا من بدء اختبار فرضية أن FTSEC خلية المنشأ للسرطان الحوض مصلي. ثقافة فيفو السابقين نموذج الموصوفة هنا هو نظام الرواية التي تسمح للعزلة وشارك الثقافة من إفرازي FT مهدبة الخلايا الأولية وبطريقة تحافظ على مورفولوجيا وبيولوجيا ظهارة FT الأصلي. باستخدام هذا النظام ، ونحن في الآونة الأخيرة تميزت secretome هذا ظهارة ، وكيف يستجيب لظهارة الميكانيكية وإصابة 10 سمية جينية. يتميز التبويض ، وهو عامل خطر رئيسي المرتبطة تكون الأورام المبيض ، من خلال مزيج من إصابات الأنسجة وسطاء التهابات ، وعوامل النمو والهرمونات 11. ويمكن استخدام هذا النظام لدراسة تأثير وجود الوسط التبييض على الاستجابة وقابلية إفرازية وخلايا مهدبة. بالإضافة ، يمكن دراسة تأثير أنواع الخلايا الأخرى (أي التهابات الخلايا) للسماح لفهم أفضل للأحداث التي تدفع الخلايا من نوع المفاضلة والعوامل التي تساهم في تحويل هذه الخلايا الورمية. وقد وصفت نماذج مماثلة في الأنسجة الأخرى حيث ظهارة الاستقطاب موجودا. على سبيل المثال ، في الثقافات الاستقطاب الأساسي للظهارة المسالك الهوائية ، تم تقييم تأثير heregulin على نمو الخلية واستجابة لإصابة 12 الخلوية. هذه الأنواع من الأنظمة نموذج توفير وسيلة جديدة ومفيدة لدراسة المبادرة والمرضية للأورام التي تنشأ من الأنسجة الطلائية ، وهذا أمر له أهمية حاسمة في الأنسجة مثل FT التي لا يوجد فيها خطوط الخلايا الموجودة حاليا ، وحيث هناك كبير ضرورة تحديد المسارات الرئيسية ووضع استراتيجيات العلاج الرواية.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر أعضاء هيئة التدريس والزملاء والمقيمين ومساعدي الأطباء من مستشفى بريجهام للنساء ، وقسم أمراض الأنسجة لصنع المتاحة لهذه الدراسات. وأيد هذا العمل عن طريق منح بحثية من معهد السرطان المعاهد الوطنية للصحة / الوطني (P50 CA105009 ، K08 CA108748 ، CA152990 U01) ، وصندوق أبحاث السرطان المبيض ، يجوز كاي مؤسسة نوفارتيس للادوية ، وروبرت وديبورا الصندوق أولا ، راندي وجويل سرطان المبيض كاتلر بحث الصندوق ، مارشا ريفكين الخيرية — جائزة باحث علمي ، [أكر] — جورج وباتريسيا Sehl زمالة أبحاث الوراثة للكشف عن سرطان ، وزمالة الأطباء الأميركية للطب في إسرائيل — كلير وايمانويل G. روزنبلات مؤسسة المنح.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Collagen from human placenta (Bornstein and Traub Type IV) | Sigma | C7521 | ||
| DMEM:F12 media | Cellgro | 15-090-CV | ||
| Ultroser G | Crescent Chemical Company | 67042 | Add 20 ml of DMEM:F12 to stock bottle and use 10mls per 500 ml of media (2% final concentration) | |
| Pen Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
| BD Primaria culture plates | BD Bioscience | 353802 | ||
| 24 well Transwell Permeable supports | Corning (Costar) | 3470 | Clear, 6.5 mm insert, 0.4 μm pore size, treated polyester | |
| MEM (Minimal Essential Media) | Cellgro | 10-010-CV | ||
| Pronase | Roche | 11459643001 | ||
| DNAse | Sigma | DN25 | ||
| Sall2 antibody | Dr T. Benjamin, Harvard | Gift | 1:20 dilution | |
| Pax8 antibody | Proteintech | 10336-1-AP | 1: 1000 dilution |
Referências
- Jemal, A., Siegel, R., Xu, J., Ward, E. Cancer statistics. CA Cancer J. Clin. 60, 277-300 (2010).
- Markman, M., Walker, J. L. Intraperitoneal chemotherapy of ovarian cancer: a review, with a focus on practical aspects of treatment. J. Clin. Oncol. 24, 988-994 (2006).
- Liu, J., Matulonis, U. A. New advances in ovarian cancer. Oncology (Williston Park). 24, 721-728 (2010).
- Cannistra, S. A. Cancer of the ovary. N. Engl. J. Med. 351, 2519-2529 (2004).
- Kurman, R. J., Shih, I. M. The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory. Am. J. Surg. Pathol. 34, 433-443 (2010).
- Fong, M. Y., Kakar, S. S. Ovarian cancer mouse models: a summary of current models and their limitations. J Ovarian Res. 2, 12-12 (2009).
- Shan, W., Liu, J. Epithelial ovarian cancer: focus on genetics and animal models. Cell Cycle. 8, 731-735 (2009).
- Levanon, K., Crum, C. P., Drapkin, R. New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact. J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).
- Karst, A. M., Drapkin, R. Ovarian cancer pathogenesis: a model in evolution. J Oncol. 2010, 932371-932371 (2010).
- Levanon, K., Ng, V., Piao, H. Y., Zhang, Y., Chang, M. C., Roh, M. H., Kindelberger, D. W., Hirsch, M. S., Crum, C. P., Marto, J. A., Drapkin, R. Primary ex vivo cultures of human fallopian tube epithelium as a model for serous ovarian carcinogenesis. Oncogene. 25, 1103-1113 (2010).
- Landen, C. N., Birrer, M. J., Sood, A. K. Early events in the pathogenesis of epithelial ovarian cancer. J. Clin. Oncol. 26, 995-1005 (2008).
- Vermeer, P. D., Einwalter, L. A., Moninger, T. O., Rokhlina, T., Kern, J. A., Zabner, J., Welsh, M. J. Segregation of receptor and ligand regulates activation of epithelial growth factor receptor. Nature. 422, 322-326 (2003).
