Een Optic Nerve Crush letsel muismodel om retinale ganglion cel Survival Study
Summary
Dit protocol laat zien hoe retrogradely label retinale ganglioncellen, en hoe nadien tot een oogzenuw crush om retinale ganglion cel overleving en apoptose te analyseren. Het is een experimenteel ziekte model voor verschillende typen van optische neuropathie, zoals glaucoom.
Abstract
Schade aan de oogzenuw kan leiden tot axonale degeneratie, gevolgd door een langzame dood van retinale ganglioncellen (RGC), wat resulteert in onomkeerbaar verlies van het gezichtsvermogen. Voorbeelden van dergelijke ziekten bij de mens onder andere traumatische optische neuropathie en de oogzenuw degeneratie bij glaucoom. Het wordt gekenmerkt door typische veranderingen in de oogzenuw kop, vooruitstrevende optische zenuw degeneratie, en het verlies van retinale ganglioncellen, zo ongecontroleerd, wat leidt tot verlies van gezichtsvermogen en blindheid.
De oogzenuw verpletteren (ONC) letsel muis model is een belangrijk model voor de ziekte experimenteel traumatische optische neuropathie, glaucoom, etc. In dit model, de crush schade aan de oogzenuw leidt tot een geleidelijke retinale ganglioncellen apoptose. Deze ziekte model kan gebruikt worden om de algemene processen en mechanismen van neuronale dood en overleving, die essentieel is voor de ontwikkeling van therapeutische maatregelen te bestuderen. Daarnaast kunnen farmacologische en moleculaire benaderingen worden gebruikt in dit model te identificeren en testen van potentiële therapeutische reagentia voor verschillende soorten optische neuropathie behandelen.
Hier bieden wij een stap voor stap demonstratie van (I) Baseline retrograde etikettering van retinale ganglioncellen (RGC) op dag 1, (II) Optische zenuw crush op dag 4, (III) Oogst de retinae en analyseren RGC overleving na dag 11, en (IV) Representatieve resultaat.
Protocol
Discussion
De oogzenuw verpletteren letsel muis model is nuttig om het proces van het RGC dood en overleving te bestuderen. Dit model wordt ook vaak gebruikt om de effecten van verschillende reagentia en genen op RGC apoptose en overleving te onderzoeken. Een voordeel van dit model is dat het een hoge mate van reproduceerbaarheid met minimale variaties heeft.
Echter, is speciale zorg vereist in een aantal stappen in dit model. Eerste, bij het maken van de oogzenuw te verpletteren blessure, is het essen…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ons onderzoek wordt ondersteund door de Intramurale Research Program van de NIH, National Eye Institute.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
Referências
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
