Nervo Óptico um modelo murino de lesão por esmagamento Estudo de Sobrevivência de células da retina Gânglio
Summary
Este protocolo mostra como retrogradamente rótulo células ganglionares da retina, e como posteriormente fazer uma lesão por esmagamento do nervo óptico, a fim de analisar a sobrevivência das células ganglionares da retina e apoptose. É um modelo de doença experimental para diferentes tipos de neuropatia óptica, incluindo glaucoma.
Abstract
Lesão do nervo óptico pode levar à degeneração axonal, seguido de uma morte gradual de células ganglionares da retina (RGCs), o que resulta em perda de visão irreversível. Exemplos de tais doenças em humanos incluem neuropatia óptica traumática e degeneração do nervo óptico no glaucoma. É caracterizada por alterações típicas na cabeça do nervo óptico, degeneração progressiva do nervo óptico e perda de células ganglionares da retina, se não controlada, levando à perda de visão e cegueira.
O esmagamento do nervo óptico (ONC) modelo do rato é um modelo de lesão importante doença experimental de neuropatia óptica traumática, glaucoma, etc Neste modelo, a lesão por esmagamento do nervo óptico leva a gradual da retina apoptose de células ganglionares. Este modelo de doença pode ser usado para estudar os processos gerais e aos mecanismos de morte neuronal e sobrevivência, que é essencial para o desenvolvimento de medidas terapêuticas. Além disso, as abordagens farmacológica e molecular pode ser utilizada neste modelo para identificar e testar o potencial terapêutico reagentes para tratar diferentes tipos de neuropatia óptica.
Aqui, fornecemos uma demonstração passo a passo (I) rotulagem de base retrógrada das células ganglionares da retina (RGCs) no dia 1, (II) lesão por esmagamento do nervo óptico no dia 4, (III) Colheita da retina e analisar a sobrevivência RGC no dia 11, e (IV) Resultado Representante.
Protocol
Discussion
O nervo óptico modelo de lesão por esmagamento murino é útil para estudar o processo de morte RGC e sobrevivência. Este modelo é também muitas vezes utilizado para investigar os efeitos de diferentes reagentes e genes na apoptose RGC e sobrevivência. Uma vantagem deste modelo é que ele tem um alto grau de reprodutibilidade, com variações mínimas.
No entanto, cuidados especiais são necessários vários passos neste modelo. Em primeiro lugar, ao fazer a lesão por esmagamento do n…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nossa pesquisa é apoiada pelo Programa de Pesquisa Intramural do, NIH National Eye Institute.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic apparatus | ASI Instruments | SAS-4100 | ||
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS | ||
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003-12 | ||
| Scalpel Blades #15 | Fine Science Tools | 10015-00 | ||
| Microdrill | Fine Science Tools | 18000-17 | ||
| Suture needle | Fine Science Tools | 12050-03 | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 16144-13 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 | ||
| Hamilton syringe | Hamilton Company | 88400 | ||
| Gauze sponges | Office Depot | 674889 | ||
| Fluorochrome | Sigma | 39286 | ||
| Alcohol | Sigma | 459844 | 70% | |
| H2O2 | Sigma | H3410 | 3% |
Referências
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21, 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).
- Li, Y. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).
- Tang, Z. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).
- Gustmann, S., Dunker, N. In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture. J Vis Exp. , (2010).
- Franklin, K., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
