小鼠视网膜神经节细胞的转染在体内电穿孔
Summary
我们展示一个<em>在体内</em>电转染视网膜神经节细胞（RGC的）和其他类型的细胞在出生后的小鼠的年龄广泛视网膜的单件或小簇协议。标签和基因操纵产后视网膜神经节细胞的能力<em>在体内</em>是一个发展研究的有力工具。
Abstract
研资局的预测中脑的针对性和细化，是一种流行和强大的模型系统，研究开发过程中神经连接的形式如何精确的模式。在小鼠实验中，retinofugal预测被安排在一个地形的方式和形式眼特定层在外侧膝状体，丘脑和上丘（SC）的（dLGN）。 retinofugal预测这些精确的模式的发展通常被标记RGC的人口与荧光染料和示踪剂，如辣根过氧化物酶 1-4研究。但是，这些方法都太粗到个别研资局轴突乔木形态的发展变化，是视网膜地图形成的基础上提供的洞察力。他们也不会允许的视网膜神经节细胞的遗传操作。
近日，电已成为一个有效的方法提供精确的时间和空间控制带电分子传递到视网膜5-11。当前视网膜电协议不允许基因操纵和跟踪retinofugal预测产后小鼠的视网膜神经节细胞的单件或小集群。有人认为，产后体内电穿孔是不是一个可行的方法转染视网膜神经节细胞，因为标签的效率极其低下，因而需要针对胚胎研资局祖细胞发生分化和增殖 6时的年龄。
在这个视频中，我们描述了在体内的基因靶向给药，均有产品，以及出生后小鼠视网膜神经节细胞的荧光右旋糖酐电协议。这种技术提供了一种经济有效，快速参与神经系统发育的几个方面，包括轴突回缩的候选基因的高效筛选和比较容易的平台，分支，层压，再生和突触形成电路开发的各个阶段。总之，我们在这里描述的一种有价值的工具将提供潜在的感官地图发展的分子机制的进一步了解。
Protocol
Discussion
在这个视频中， 我们证明在体内电协议，结果在与编码荧光蛋白质的DNA的结构，产后的小鼠视网膜神经细胞的单个或小群的标签。小群dLGN和SC荧光标记的研资局预测再现类似的投影模式，以前的研究使用亲油性染料研资局的标签，这表明电不干扰正常的研资局轴突乔木细化。我们利用这个协议在单一和不同的小鼠模型的视网膜神经节细胞组与正常，扰乱视觉地图水平的分析视网膜的地图。…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
pCAG gapEGFP质粒是博士S.麦康奈尔（斯坦福大学，加利福尼亚州）的礼物。 pCAG – tdTomato质粒博士M.费勒（伯克利分校，加利福尼亚州）的礼物。我们感谢爱德华Ruthazer博士建议使用一个单细胞标记和安妮Schohl验证两个质粒的Cre / loxP位技术支持战略的试点研究和Crair实验室成员（蒙特利尔，QC）的两个质粒战略。 R01 MH62639（MC），美国国立卫生研究院R01 EY015788（MC）和美国国立卫生研究院P30 EY000785（MC）的支持。
Materials
| Materials | Company | Catalog number |
|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11252-20 |
| Electrical Stimulator | Grass Instruments | Model S4 |
| Oscilloscope | Agilent | Model 54621A |
| Audio monitor | Grass Instruments | Model AM8B |
| Puller | Sutter Instruments | Model P-97 |
| Vannas Scissors a | World Precision Instruments | 14003 |
| Micro Scissors b | Ted Pella | 1347 |
| Dumont AA Forceps c | Fine Science Tools | 11210-20 |
| Nanoinject II System | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| Glass Pipettes | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Foot pedal | Drummond Scientific | 3-000-026 |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M3516 |
| DiI | Invitrogen | D-383 |
| N,N-Dimethylformamide | Sigma | D4551 |
Referências
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