Una procedura 1,5 ore per l'identificazione di Enterococcus Specie Direttamente da emocolture
Summary
Un protocollo rapido per l'identificazione diretta di Enterococcus faecalis ed Enterococcus altre specie da una emocoltura positiva con un Peptide Nucleic Acid test di ibridizzazione fluorescente in situ (FISH PNA).
Abstract
Gli enterococchi sono una causa comune di batteriemia con E. faecalis è la specie predominante seguito da E. faecium. Perché la resistenza alla ampicillina e vancomicina in E. faecalis è ancora raro in confronto alla resistenza in E. faecium, lo sviluppo di test rapidi consentono la differenziazione tra le specie enterococchi è importante per la terapia appropriata e sorveglianza della resistenza. La E. faecalis OE saggio PESCE PNA (AdvanDx, Woburn, MA) utilizza specie-specifico acido nucleico del peptide (PNA) delle sonde in una fluorescenza de formato ibridazione in situ ed offre un tempo per i risultati di 1,5 ore e il potenziale di fornire informazioni importanti per le specie-specifiche trattamento. Studi multicentrici sono stati condotti per valutare le prestazioni del 1,5 ore E. faecalis / OE procedimento FISH PNA rispetto alla originaria procedura di test 2,5 ore e di batteriologia metodi standard per l'identificazione degli enterococchi direttamente da una bottiglia positiva cultura del sangue.
Protocol
Discussion
La E. faecalis / OE saggio FISH PNA per enterococco può fornire l'identificazione 2-3 giorni prima di metodi di coltura tradizionali. La procedura abbreviata per il test (1,5 hourr) fornisce una rapida identificazione che può essere utilizzato per un migliore approccio alla terapia antimicrobica e la prognosi del paziente. Uno studio a sostegno di questa è stata eseguita da Forrest, et al. (6). Oltre due anni consecutivi a partire dal 2005 il laboratorio di microbiologia identificato cocchi Gram-positivi in coppie e catene in crescita in bottiglie di emocoltura con metodi microbiologici tradizionali e nel 2006, aggiungendo la E. faecalis / OE PNA FISH. Inoltre, un algoritmo di trattamento sviluppato dal team istituzioni antimicrobici (AMT) di utilizzare efficacemente i dati PESCE ANP generati dal laboratorio in modo tempestivo. L'outcome primario valutato era giunto il momento di emocoltura attingere per l'attuazione di un'efficace terapia antibiotica prima e dopo PESCE PNA è stato istituito nel flusso di lavoro dei laboratori. Gravità della malattia, la posizione del paziente e la terapia antimicrobica empirica sono stati misurati. Un totale di 224 pazienti con batteriemia enterococciche acquisite in ospedale sono stati valutati con 129 nel periodo pre-intervento e 95 nel periodo PESCE PNA. PESCE PNA identificato E. faecalis 3 giorni prima di culture tradizionali (1,1 vs 4,1 giorni, p <0,001). PESCE PNA identificato E. faecium in media 2,3 giorni prima (1,1 vs 3,4 giorni, p <0,001) ed era associata a una riduzione statisticamente significativa nel tempo di iniziare la terapia efficace (1,3 vs 3,1 giorni, p <0,001) e una diminuzione 30 giorni mortalità (26% vs 45%, p = 0,04). Questo gruppo ha concluso che la E. faecalis / OE saggio PESCE PNA in combinazione con un algoritmo di trattamento AMT ha portato nelle precedenti l'inizio di una appropriata terapia antimicrobica empirica per i pazienti con acquisite in ospedale E. faecium batteriemia.
- I reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza stampata sulle etichette e reagenti non deve essere modificato in alcun modo. Dovrebbero rimanere in frigorifero quando non in uso o che potrebbero perdere potenza.
- Bottiglie cultura del sangue devono essere miscelati prima del campionamento.
- E 'importante non permettere che la punta del flacone contagocce di toccare uno striscio di sangue, perché questo potrebbe causare la contaminazione crociata di materiale tra le diapositive, o causare la contaminazione del reagente.
- Assicurarsi che il bagno d'acqua e il blocco di riscaldamento sono mantenuti alla temperatura costante di 55 ° C.
- Non utilizzare filtri diversi da quelli del filtro Dual Band o colori non sarà chiaramente discernere.
- Non utilizzare vetrini da microscopio diversi preparati microscopici o ibridazione non si verificherà.
- E 'importante che il microscopio sta funzionando correttamente. Assicurarsi che il bulbo microscopio è approvato entro il numero di ore di utilizzo.
- Alcune rare le specie Enterococcus non vengono rilevati dalla sonda di PNA ibridare le specie Enterococcus altri, come ad esempio E. asinii, E.dispar, E. haemoperoxidus, E. cecorum, E. columbae, saccharolyticus E., E. solitarius ed E . sulfuree.
- Moraviensis E. è identificato come E. faecalis a causa di similarità di sequenza.
- Alcuni ceppi di Streptococcus anginosus produrre una fluorescenza verde falso positivo a causa di somiglianze sequenza.
- VersaTREK bottiglie cultura del sangue non sono state valutate nel corso degli studi clinici. Le prestazioni per rilevare E. Enterococcus faecalis ed altre spp. con bottiglie di emocoltura VersaTREK è sconosciuta.
- Falsi positivi autofluorescenza verde può verificarsi se uno standard FITC filtro viene utilizzato al posto del filtro Dual Band.
- Risultati falsi negativi possono verificarsi raramente a causa della crescita misti o causa di un errore nella tecnica di analisi.
- Il tipo e la condizione della strumentazione utilizzata influenzerà l'aspetto visivo dell'immagine ottenuta. La fluorescenza può varydue al tipo di microscopio impiegato, della fonte di luce e il livello di rRNA nelle cellule
- Isolamento su terreni solidi è necessario per differenziare la crescita mescolato con altri organismi e di identificare emocolture positive ottenendo un risultato negativo.
- Il prodotto non è stato convalidato con campioni diversi da emocolture.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli studi sono stati sponsorizzati da AdvanDx.
Materials
Reagents
E. faecalis/OE PNA FISH is comprised of the following kit components:
- Fixation Solution Fixation Solution 3 mL phosphate-buffered saline with detergent.
- E. faecalis/OE PNA E. faecalis/OE PNA 1.5 mL PNA probes in hybridization. solution. Contains 30% formamide.
- 60x Wash Solution 60x Wash Solution 50 mL Tris-buffered saline with detergent
- Mounting Medium Mounting Medium 3 mL photobleaching inhibitor in Glycerol
- Quality control slides
- AdvanDX
Referências
- Oliveira, K., Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Haase, G., Weber-Heynemann, J., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Stender, H. Rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures by dual color fluorescence in situ hybridization using PNA probes. , (2002).
- Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Oliveira, K., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Johansen, J. T., Procop, G. W., Wilson, D., Padilla, E., Gonzalez, V., Stender, H. Multicenter evaluation of E. faecalis PNA FISH for rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures. , (2003).
- Rausei, V., Youssef, E., Morgan, M. Direct identification of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Candida albicans from blood cultures using fluorescence in situ hybridization with nucleic acid probes. , (2005).
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- Johnson, J. K., Roberts, A. A., Forrest, G. N., Lincalis, D. P., Venezia, R. A. Rapid Identification of Enterococcus Species in Positive Blood Cultures with Therapeutic Implications. , (2006).
