Belirlenmesi için 1.5 Saat Usulü Enterococcus Türler
Summary
In situ hibridizasyon tayininde floresan bir Peptid Nükleik Asit (PNA BALIK) kullanarak bir pozitif kan kültürü, Enterococcus faecalis ve diğer Enterococcus türleri doğrudan tanımlanması için hızlı bir protokoldür.
Abstract
Enterokoklar E. ile bakteriyemi yaygın bir nedenidir. faecalis, E. faecium baskın tür . Çünkü E. ampisilin ve vankomisine direnç faecalis, E. faecium direnci hala yaygın karşılaştırıldığında, enterokok türler arasındaki farklılaşmayı sağlayan hızlı testlerin geliştirilmesi, uygun tedavi ve direnç gözetim için önemlidir. E. faecalis OE PNA FISH testinin (AdvanDx, Woburn, MA) in situ hibridizasyon formatında türe özgü bir floresan peptid nükleik asit (PNA) problar kullanır ve 1,5 saat ve türe özgü önemli bilgiler veren potansiyel sonuçlarını bir süre sunuyor tedavi. Çok Merkezli 1.5 saatlik E. performansını değerlendirmek için çalışmalar yapıldı faecalis / OE PNA BALIK prosedürü orijinal 2,5 saat metodlara ve pozitif kan kültürü şişesi doğrudan enterokokların belirlenmesi için standart bakteriyoloji yöntemlerine göre.
Protocol
Discussion
E. enterococcus faecalis / OE PNA FISH testinin standart kültür yöntemleri daha 2-3 gün önce kimlik sağlayabilir. Tayini için kısaltılmış bir prosedür (1.5 hourr), antimikrobiyal tedavi ve hasta sonucu daha iyi bir yaklaşım için kullanılabilecek hızlı bir şekilde tespit sağlar. Bunu desteklemek için bir çalışmada Forrest ve ark. (6) tarafından yapıldı. 2005 yılından itibaren birbirini takip eden iki yıl içinde mikrobiyoloji laboratuvarına konvansiyonel mikrobiyolojik yöntemlerle kan kültürü şişeleri büyüyen ve 2006 yılında E. ekleyerek çiftleri ve zincirleri Gram pozitif koklar tespit faecalis / OE PNA BALIK. Buna ek olarak kurumları antimikrobiyal ekibi (AMT) tarafından geliştirilen bir tedavi algoritması zamanında laboratuvar tarafından oluşturulan PNA BALIK verileri etkin bir şekilde kullanmak. Değerlendirilir Primer sonuç, kan kültürü zaman önce etkili antimikrobiyal tedavi uygulanması çizmek ve PNA BALIK laboratuarlar iş akışı içine tesis sonra oldu. Hastalık, hasta konumu ve ampirik antimikrobiyal tedavi şiddeti ölçüldü. Bakteriyemi enterokok elde edilen 224 hasta hastane ile toplam 129 ve 95 PNA BALIK dönemde müdahale öncesi dönemde değerlendirildi. PNA BALIK E. tespit geleneksel kültürlerin (1.1 vs 4.1 gün, p <0.001) daha önce faecalis 3 gün. PNA BALIK medyan 2.3 gün önce E. faecium tespit (1.1 vs 3.4 gün, p <0.001) ve etkili bir tedavi (1.3 ve 3.1 gün, p <0.001) başlatarak için zaman içinde istatistiksel olarak anlamlı bir azalma ile ilişkili ve 30 gün azaldı mortalite (% 26 vs% 45, p = 0.04). Bu grup sonucuna E. AMT bir tedavi algoritması ile birlikte faecalis / OE PNA FISH testinin elde edilen hastane ile bakteriyemi E. faecium hastalar için uygun ampirik antimikrobiyal tedavinin erken başlamasına yol açmıştır .
- Etiketleri ve reaktifler üzerinde yazılı olan son kullanma tarihleri, herhangi bir şekilde değiştirilmiş olmamalıdır sonra Reaktifler kullanılmamalıdır. Bunlar kullanılmadığı zaman buzdolabında kalmalıdır veya onlar potens kaybedebilirsiniz.
- Kan kültürü şişeleri örnekleme önce karıştırılması gerekmektedir.
- Bu malzeme slaytlar arasındaki çapraz kontaminasyon neden, ya da reaktif kontaminasyona neden olabilir çünkü kan yaymasında damlalıklı şişe ucu dokunmak için izin vermemesi için önemlidir.
- Su banyosu ve ısıtma bloğu sabit bir 55 ° C'de muhafaza edilir emin olun.
- Dual Band Filtresi veya renkler açıkça ayırt olmayacaktır dışında filtre kullanmayın.
- Mikroskop Slaytlar veya hibridizasyon olmayacağına dışında mikroskop lamı kullanmayın.
- Mikroskop düzgün çalıştığını önemlidir. Mikroskop ampul kullanımı için saat onaylanmış sayısı içinde olduğundan emin olun.
- Bazı nadir meydana gelen Enterococcus türleri, E. asinii, E.dispar, E. haemoperoxidus, E. cecorum, E. columbae, E. saccharolyticus, E. solitariusa ve E gibi diğer Enterococcus türleri, literatürde PNA probu tarafından tespit edilmez . kükürtlü.
- E. moraviensis E. olarak tanımlanır dizisi benzerlikleri nedeniyle faecalis.
- Streptococcus anginosus bazı suşları dizisi benzerlikleri nedeniyle, sahte bir yeşil olumlu floresan üretir .
- VersaTREK kan kültürü şişeleri klinik çalışmalar sırasında değerlendirilir değildi. E. algılamak için performans faecalis ve diğer Enterococcus spp. VersaTREK kan kültürü şişeleri ile bilinmemektedir.
- Yanlış pozitif yeşil otofloresans standart bir FITC filtresi Dual Band Filtresi yerine kullanılması durumunda ortaya çıkabilir.
- Yanlış negatif sonuçlar nadiren karışık büyüme nedeniyle veya tahlil tekniği hata nedeniyle oluşabilir.
- Kullanılan enstrümantasyon tipine ve durumuna, elde edilen görüntünün görünümünü etkiler. Floresan kullanılan mikroskop, ışık kaynağı ve hücrelerde rRNA düzeyi varydue olabilir
- Katı ortam izolasyonu, diğer organizmalar ile karışık bir büyüme ayırt etmek ve negatif sonuç veren pozitif kan kültürleri tanımlamak için ihtiyaç vardır.
- Ürün, kan kültürlerinden başka örnekler ile geçerli olmamıştır.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Çalışmalar AdvanDx tarafından desteklenen edildi.
Materials
Reagents
E. faecalis/OE PNA FISH is comprised of the following kit components:
- Fixation Solution Fixation Solution 3 mL phosphate-buffered saline with detergent.
- E. faecalis/OE PNA E. faecalis/OE PNA 1.5 mL PNA probes in hybridization. solution. Contains 30% formamide.
- 60x Wash Solution 60x Wash Solution 50 mL Tris-buffered saline with detergent
- Mounting Medium Mounting Medium 3 mL photobleaching inhibitor in Glycerol
- Quality control slides
- AdvanDX
Referências
- Oliveira, K., Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Haase, G., Weber-Heynemann, J., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Stender, H. Rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures by dual color fluorescence in situ hybridization using PNA probes. , (2002).
- Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Oliveira, K., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Johansen, J. T., Procop, G. W., Wilson, D., Padilla, E., Gonzalez, V., Stender, H. Multicenter evaluation of E. faecalis PNA FISH for rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures. , (2003).
- Rausei, V., Youssef, E., Morgan, M. Direct identification of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Candida albicans from blood cultures using fluorescence in situ hybridization with nucleic acid probes. , (2005).
- Novak-Weekley, S. M., LaForga, M., Carey, L., Frazier, L. Validation of S. aureus PNA FISH, E. faecalis PNA FISH & C. albicans PNA FISH for Rapid Identification of Positive Blood Culture Bottles. , (2006).
- Johnson, J. K., Roberts, A. A., Forrest, G. N., Lincalis, D. P., Venezia, R. A. Rapid Identification of Enterococcus Species in Positive Blood Cultures with Therapeutic Implications. , (2006).
