1,5 час порядок идентификации Enterococcus Виды Непосредственно из культуры крови
Summary
Быстрый протокол для непосредственной идентификации Enterococcus фекальный и другие виды Enterococcus с положительной культуры крови с использованием пептидов нуклеиновых кислот флуоресцентного анализа на месте гибридизация (FISH ПНА).
Abstract
Энтерококки являются частой причиной бактериемии с Е. фекальный быть доминирующих видов следуют E. faecium. Потому что устойчивость к ампициллину и ванкомицину в E. фекальный еще необычного по сравнению с сопротивлением в E. faecium, развитие экспресс-тестов позволяет дифференциации между видами энтерококков имеет важное значение для соответствующей терапии и сопротивления наблюдения. E. фекальный OE ПНА FISH анализа (AdvanDx, Woburn, MA) использует видоспецифические пептидных нуклеиновых кислот (ПНК) зондов в флуоресценции на месте формате гибридизации и предлагает время результаты 1,5 часа и потенциальных предоставления важной информации для видоспецифические лечение. Многоцентровое исследования проводились для оценки производительности 1,5 часа E. фекальный / OE ПНА FISH процедуры по сравнению с оригинальной 2,5 часа процедура анализа и стандартные методы бактериологии для идентификации энтерококков прямо из бутылки положительные культуры крови.
Protocol
Discussion
E. фекальный / OE ПНА FISH анализ для энтерококков может обеспечить идентификацию 2-3 дней раньше, чем стандартные методы культуры. Укороченной процедуре анализа (1,5 hourr) обеспечивает быструю идентификацию, которая может быть использована для лучшего подхода к антибактериальной терапии и пациента результат. Одно из исследований в поддержку этого была выполнена Форрест, и др.. (6). В течение двух лет подряд, начиная с 2005 года микробиологической лаборатории определили грамположительных кокков в пары и цепи, растущих в бутылках посев крови обычными микробиологическими методами и в 2006 году, добавив Е. фекальный / OE ПНА FISH. Кроме лечения алгоритма, разработанного специалистами учреждений антимикробных команды (AMT), чтобы эффективно использовать FISH ПНА данные, полученные в лаборатории в своевременной манере. Первичная оценка результата было время от посева крови привлечь к реализации эффективной антибактериальной терапии до и после ПНА FISH была учреждена в рабочий процесс лабораторий. Тяжесть болезни пациента местоположение и эмпирической антибактериальной терапии были измерены. Общей сложности 224 пациентов с больницы приобрели энтерококков бактериемии были оценены с 129 в до вмешательства период и 95 в период FISH ПНА. ПНА FISH определены E. фекальный 3 дня раньше, чем обычных культур (1,1 против 4,1 дней, р <0,001). ПНА FISH определены E. faecium среднем 2,3 дня раньше (1,1 против 3,4 дней, р <0,001) и был связан со статистически существенное сокращение времени начала эффективной терапии (1,3 против 3,1 дней, р <0,001) и сократились на 30 день смертности (26% против 45%, р = 0,04). Это группа пришла к выводу, что E. фекальный / OE ПНА FISH анализа в сочетании с AMT алгоритм лечения привели к более ранним началом соответствующей эмпирической антибактериальной терапии у пациентов с больницы приобрели E. faecium бактериемии.
- Реагенты не следует использовать после даты истечения срока действия напечатаны на этикетках и реагенты не должны быть изменены в любом случае. Они должны находиться в холодильнике, когда не используется, или они могут потерять потенцию.
- Кровь бутылки культуры нуждаются в смешанных до отбора проб.
- Важно, чтобы не допустить наконечник флакона на ощупь мазке крови, потому что это может стать причиной перекрестного загрязнения материала между слайдами, или вызвать загрязнение реагента.
- Убедитесь, что водяной бане и отопления блока поддерживается при постоянной температуре 55 ° C.
- Не используйте фильтры, кроме двойного Фильтр полосы или цвета не будут четко различить.
- Не используйте предметные стекла, кроме микроскопа слайды или гибридизации не произойдет.
- Очень важно, чтобы микроскоп работает нормально. Убедитесь, что лампа микроскопа в рамках утвержденного количества часов для использования.
- Некоторые редкие встречающиеся виды Enterococcus не обнаруживаются зонда ПНА гибридизации с другими видами Enterococcus, таких как E. asinii, E.dispar, Е. haemoperoxidus, Е. cecorum, Е. columbae, Е. saccharolyticus, Е. solitarius и Е . сернистого.
- Е. moraviensis определяется как E. фекальный из-за последовательности сходство.
- Некоторые штаммы Streptococcus anginosus производить ложные положительные зеленый флуоресценции из-за последовательности сходство.
- VersaTREK бутылки посев крови не были оценены во время клинических исследований. Производительность для обнаружения E. фекальный и других Enterococcus sрр. с бутылками VersaTREK посева крови неизвестны.
- Ложное срабатывание зеленый аутофлюоресценция может произойти, если стандартные FITC фильтр используется вместо двойного фильтра Band.
- Ложные отрицательные результаты могут часто возникать из-за смешанных роста или из-за ошибки в анализе техники.
- Типа и состояния приборы, используемые будет влиять на внешний вид изображения получены. Флуоресценции может varydue на тип микроскопа работу, источник света и уровень РНК в клетках
- Изоляция на твердых средах необходимо дифференцировать смешанные роста с другими организмами и выявления положительных культур крови приносит отрицательный результат.
- Продукт не был подтвержден в образцах крови, чем другие культуры.
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Исследования были авторами которого AdvanDx.
Materials
Reagents
E. faecalis/OE PNA FISH is comprised of the following kit components:
- Fixation Solution Fixation Solution 3 mL phosphate-buffered saline with detergent.
- E. faecalis/OE PNA E. faecalis/OE PNA 1.5 mL PNA probes in hybridization. solution. Contains 30% formamide.
- 60x Wash Solution 60x Wash Solution 50 mL Tris-buffered saline with detergent
- Mounting Medium Mounting Medium 3 mL photobleaching inhibitor in Glycerol
- Quality control slides
- AdvanDX
Referências
- Oliveira, K., Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Haase, G., Weber-Heynemann, J., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Stender, H. Rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures by dual color fluorescence in situ hybridization using PNA probes. , (2002).
- Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Oliveira, K., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Johansen, J. T., Procop, G. W., Wilson, D., Padilla, E., Gonzalez, V., Stender, H. Multicenter evaluation of E. faecalis PNA FISH for rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures. , (2003).
- Rausei, V., Youssef, E., Morgan, M. Direct identification of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Candida albicans from blood cultures using fluorescence in situ hybridization with nucleic acid probes. , (2005).
- Novak-Weekley, S. M., LaForga, M., Carey, L., Frazier, L. Validation of S. aureus PNA FISH, E. faecalis PNA FISH & C. albicans PNA FISH for Rapid Identification of Positive Blood Culture Bottles. , (2006).
- Johnson, J. K., Roberts, A. A., Forrest, G. N., Lincalis, D. P., Venezia, R. A. Rapid Identification of Enterococcus Species in Positive Blood Cultures with Therapeutic Implications. , (2006).
