運動誘発性リンパ球のアポトーシスの決定のための指先穿刺の採血方法
Summary
運動は免疫細胞にアポトーシスを誘導することが可能です。様々な測定の制限は特に事前評価への血液サンプルを分離し、治療に必要な時間の量に関連する、があります。が示され、運動誘発性リンパ球アポトーシスの解析のための迅速かつ低侵襲です。
Abstract
運動は免疫細胞にアポトーシスを誘導可能な生理的刺激です。これまでに、様々な制限は特に事前の細胞死の評価に血液サンプルを分離し、治療に必要な時間の量に関連する、この現象の計測と同定されている。このため、それは免疫細胞のアポトーシスに報告された増加は、システム上の運動の実際の効果に貢献し、または時間と最終的にこの測定を得るために必要な処理の反射であることができるかどうかを判断するのは困難である。この記事では、運動誘発性リンパ球のアポトーシスの解析のための迅速かつ低侵襲の手順を示しています。他の技術とは異なり、全血は検体を入手した時点で直ちに抗体のパネルに追加されます。潜伏期間の後、赤血球を溶解し、試料は、分析する準備が整いましたされています。指先穿刺のサンプリング手順の使用は、必要な血液量が減少し、被験者に不快感を最小限に抑えることができます。
Protocol
1。フィンガースティック採血全血のコレクションは、通常、ベースラインの測定（通常10〜15分座って休息の後）のため、運動では、次の中や直後、および運動後の期間を通じて安静時に取得されます（一般的には1-3時間からの停止後運動）。 普遍的予防策を使用して、最初の70％イソプロピルアルコールで指先を消毒する。 次に、穿刺自動化されたランセットまたは?…
Discussion
低侵襲サンプルの収集手順とその後の分析は、運動誘発性のリンパ球のアポトーシスの初期および後期段階の両方の分析のために示されている。それは明らかに壊死、およびアポトーシスとなっていない細胞を、除外することも可能です。この手順では、中、および直後に運動した後、前に、複数の時点での肘前部からの侵襲的な静脈穿刺に伴う欠点や不快感を克服し、または運動の期間中?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、ケンタッキー州西部大学の学部奨学金委員会から新学部のグラントによってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
Referências
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Tags
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Navalta, J., McFarlin, B., Simpson, R., Fedor, E., Kell, H., Lyons, S., Arnett, S., Schafer, M. Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis. J. Vis. Exp. (48), e2595, doi:10.3791/2595 (2011).