ハエでエタノールの感度を測定するために簡単

1。暴露室を作成するカミソリの刃を使用して半分にバイアルのプラグをカット。また、綿球を使用してください。 ハエがログイン立ち往生しないように滑らかな表面を作るために食品のバイアルの底に、バイアルのプラグの半分、または綿のボールをプッシュ複数の曝露チャンバーを作る場合、バイアルのプラグと食品が各チャンバー内の同じ容積を取ることを確認してください。バイアルの側面のマークはこれを容易にすることができます。 2。ハエを公開酵母のない通常の餌をバイアルに露出する前に1つ性別、年齢1-5日、一日の8ハエを集める。 実験者が実際に使用される遺伝子型/株に盲検化されるように、コード内でラベルを付けます。 タップして、曝露チャンバー8つのハエを移す。麻酔しないでください。 それは簡単に見えるように200プルーフのエタノールに食品染料、例えば、アシッドブルー9、少量のを追加。 0.5mlのエタノールとコートはバイアルのプラグの下部、または綿ボール、。 露出のバイアル瓶にエタノールのプラグを差し込みます。アルコールは、バイアルに、ではなくバイアルの壁の方を向いていることを確認してください。 カウントアップタイマーを開始します。 3。記録エタノール誘発性の中毒タイマーが開始された後、各分には、ハエを驚愕し、10秒のためにそれらを観察するためにベンチに暴露室をタップします。 毎分固定ハエの数を記録。ハエは、彼らが自分の背中から降りることができない場合は、1つの場所に残っている、または急速に全体の10秒の観測期間を通じて、その翼を振動さ固定です。これらのハエの大多数は急速な翼の運動の期間の間静止しているので、後者のハエは、静止とみなされます。ハエは、彼らが自分の背中から降りるとの距離および/またはバイアルの壁まで歩くことができれば静止していないです。 4つ以上のハエが固定として記録されるときの露光試験が終了しています。 ハエを破棄し、後で再利用するために暴露室の空気を外に出して。 4。 50％の鎮静に時間を決定する 50％の鎮静（ST50）までの期間は、8ハエの4つは静止したままエタノールの暴露の開始後の時間です。これは、次のように決定されます。 次のいずれかの操作を正確に4ハエが静止している最初の測定分。 または：以下つ以上のハエ（Y1）は1時点（分X）、そして次の測定時点においてつ以上（Y2）（X +1分）、式を使用して線形補間ST50で静止している場合： ST50 =（4 – Y1）/（Y2 – Y1）+ X 5。許容範囲を決定するために露出を繰り返してハエを公開あなたの実験で使用されている野生型の対照株のST50（重量）を決定します。 前述のようにエタノールにハエの実験群を公開。 彼らのST50（1）を測定しますが、時間2倍ST50（重量）に達するまで公開し続ける。 バックの空の食品用バイアルにハエを移し、4時間保持する。 ハエを再公開し、露出2のST50（2）を決定する。 許容範囲を決定する X100 – （1 ST50（2）/ ST50（1））のような％の許容誤差を計算する。 6。代表的な結果： ここに示されている、我々は遺伝子型と投与量あたりのハエの6-8バイアルで得られたいくつかの代表的な結果は次のとおりです。あなたの標準誤差が大幅に大きい場合、体系的な問題が可能性が発生しました。エタノールは、曝露チャンバーに直面する、とチャンバーが同じボリュームであることを確認してください。 野生型の図1。用量反応曲線は、エタノールの増加割合にさらさハエ。ハエの八バイアルは、投与量及び性別ごとに暴露された。用量間ST50が増加し、エタノールの投与量（P <0.001）で有意に減少する男性と女性のハエは、（P> 0.22、2ウェイANOVA）各用量で同じST50を示す。過密ボトルの便を運行する航空会社はノートでは、健康なボトルのものより大幅に小さくすることができ、このサイズの違いは、ST50に影響を与える可能性があります。 15から20人の女性と種子各ボトルは、ボトルごとに最適な幼虫の密度を得るために1-2日間敷設。 図2 90％、または100％エタノールのいずれかにハエを公開するにはmutation2白ウサギ（P <0.001、2ウェイANOVA）によって引き起こされる前述のエタノール耐性を再現。 図3：4時間回復の間隔を隔て、100％エタノールに露出を繰り返し、秒露光（P <0.001、対応のあるtの後にST50の大幅な増加を引き起こす- テスト）。ハエが最初に暴露（そのNAのVE ST50倍に相当）中に24分間暴露されたことに注意してください。短い時間（12分）のための暴露は、再暴露（データは示さず）によりST50の著しい増加を引き起こさなかった。