Bewertung der sozialen Interaktion Behaviors

1. Geräte und Room Set Up: Die Vorrichtung zur Crawley der Geselligkeit und Präferenz für soziale Neuheit Test ist ein rechteckiges, Drei-Kammer-Box zusammen. Jede Kammer ist 19 x 45 cm und die Trennwände sind aus durchsichtigem Plexiglas, mit einem offenen Mittelteil, der den freien Zugang zu jeder Kammer ermöglicht. Verwenden Sie zwei identische, Draht topfartige mit abnehmbaren Deckeln, die groß genug für einen einzigen Mausklick zu halten. Diese sind vertikal innerhalb der Vorrichtung, eine in jeder Kammer platziert und wird die naive / ungewohnten Maus enthalten. Jeder Behälter ist aus Metall Drähte zusammen, um für den Luftaustausch zwischen Innen-und Außenseite des Zylinders, aber klein genug, um zu verhindern direkten physikalischen Interaktionen zwischen einem Tier auf der Innenseite mit einem auf der Außenseite zu ermöglichen. Behavioral Tests sollten zwischen 9:00 Uhr durchgeführt werden und 06.00 Uhr. Allgemeine Raumbeleuchtung ist 650 lux. Beschäftigen Observer 6,0 (Noldus) Programm (oder eine geeignete Alternative) zu überwachen und aufzuzeichnen die Beobachtung und Follow-up-Parameter, in Abschnitt 4.3 erwähnt. Nach jedem Versuch, sauber alle Kammern mit 70% Ethanol (zwischen Mäusen) und dann mit Clidox 01.05.01 (zwischen den Käfigen), um olfaktorische Cue Bias zu vermeiden und um eine ordnungsgemäße Desinfektion zu gewährleisten, bzw.. Die Person, die die Beobachtung macht muss mindestens 2 Meter von dem Gerät sein. 2. Tierische Zubereitung: Haus drei vor fünf Mäuse pro Käfig in einem Zimmer mit einem 12 Stunden Licht / Dunkel-Zyklus (Licht an um 7:00 Uhr) mit ad libitum Zugang zu Futter und Wasser, nach den Normen und Anforderungen der lokalen Animal Care Committee Leitlinien und Protokolle. Übertragen Sie alle Käfige mit Mäusen in die Verhaltens-Raum 30 Minuten vor der ersten Verhandlung beginnt. Es gibt zwei Klassen von Maus für dieses Experiment benötigt, eine, die als Kontrolle, naiv oder "unfamiliarized" Tier und eine, die der Proband wird, wirkt. Für die Steuerung der Maus mit einer Maus aus dem gleichen Hintergrund (in der Regel C57BL6), Alter (in der Regel 8-12 Wochen alt), Geschlecht und Gewicht, ohne vorherige Kontaktaufnahme (nicht Geschwister) mit dem Thema Maus. Zwei Kontroll-Mäusen benötigt werden pro Experiment, eine für Session I und ein weiteres für Session II verwendet wird. Die gleiche Kontrolle Mäuse können zwischen Studien verwendet werden. 3. Habituation (Anpassung): Isolieren Sie die rechte und linke Fächer durch die trennende Wände aus Plexiglas. Leeren Draht Containment Becher in der Mitte des rechten und linken Kammer (eine pro Seite). Legen Sie das Thema mit der Maus in der Mitte der mittleren Kammer für die Anpassung. Gewöhnen für 5 Minuten. 4. Social Affiliation Aspekt der Test (Session I): Legen Sie eine der Kontroll-Mäuse ("Stranger 1") in einem Draht Containment Tasse, die in einem der Nebenräume befindet. Die Platzierung von Stranger 1 in der linken oder rechten Seite der Kammer wird systematisch zwischen Studien verändert. Entfernen Sie die Wände zwischen den Kammern, zur Gewährleistung des freien Zugangs für das Thema Maus an jeden der drei Kammern zu erkunden. Sofort beginnen die Überwachung und Aufzeichnung der folgenden Parameter: Dauer und Anzahl der direkten (aktiv) Kontakte zwischen dem Subjekt Maus und die Eindämmung Topfgehäuse oder nicht Gehäuse the Stranger 1 Maus, für jede Kammer einzeln. Der direkte Kontakt zwischen dem Subjekt Maus und die Eindämmung Tasse oder Dehnung der Körper des Subjekts mit der Maus in einem Bereich 3-5 cm rund um die Tasse als aktiver Kontakt gezählt wird; Dauer und Reihe anderer Verhaltensweisen durch den Gegenstand mit der Maus in jedes Abteil, darunter Wandern, Selbst-Pflege, Fehlen von Körperbewegungen für mehr als 5 Sekunden ("Einfrieren"), sowie ungewöhnliches Verhalten, wie Springen, repetitive Verhaltensweisen, etc; Dauer und Anzahl der Einträge zu jedem Fach. Die Maus ist als in der Kammer sein, wenn sein Kopf und vier Pfoten in die Kammer eingegeben haben. Die Dauer der Sitzung, die ich in 10 Minuten. 5. Social Novelty / Präferenz Session der Test (Session II): Platzieren Sie ein zweites Kontroll-Maus ("Stranger 2") in einer identischen Draht Containment Tasse in der gegenüberliegenden Seite Kammer (das war während der Session I leer). Überwachen Sie die gleichen Parameter wie unter 4.3 beschrieben, die Differenzierung der Verhaltensweisen zwischen Motiv Maus in Gegenwart von Fremden 1 verglichen mit Fremden 2. Die Dauer der Sitzung II beträgt 10 Minuten. 6. Statistische Analyse: Durch die Verwendung der Origin 6.0-Programm (oder eine geeignete Alternative) analysieren die folgenden Parameter mit Hilfe der aufgezeichneten Daten: die Gesamtzahl der Kontakte und Gesamtdauer von Kontakten zwischen experimentellen mouse und leere Containment Tasse vs oder Topfgehäuse Fremder 1 (in Session I), oder zwischen experimentellen Maus und dem Topfgehäuse Fremder 1 vs Fremder 2 (in Session II); durchschnittliche Dauer pro Kontakt; Gesamtzahl und die Dauer der andere Verhaltensweisen (Einfrieren, Selbst-Pflege, zu Fuß) Gesamtzeit vom Subjekt Maus in jede Kammer verbracht. Analysieren Sie die wesentlichen Unterschiede für jede der genannten Parameter, durch den Vergleich der Gruppen: "Empty" Containment Tasse vs "Stranger 1" für einen Wildtyp (WT) unterliegen "Empty" Containment Tasse vs "Stranger 1" für die experimentelle Maus (z. B. ein Knockout, transgene oder medikamentös behandelten Maus, etc.). "Stranger 1" vs "Stranger 2" für einen WT Thema "Stranger 1" vs "Stranger 2" für die experimentelle Maus (KO, transgene, oder medikamentös behandelt, etc.). Präsentieren Sie jeden Datensatz der oben genannten Parameter wie Session I: WT und Versuchspersonen; Session II: WT und Versuchspersonen, wie in Abbildung 1 dargestellt (A und B) und 2 (A und B) bzw.. Es ist auch ratsam zu berücksichtigen andere Parameter, die bei der Standardisierung dieser Test helfen, wie vorherige Erfahrung in der Erkennung spezifischer Maus Verhaltensmuster, wie zB Schnupfen, Putzen, Scheuern, Kampf, Montage, die ganz wesentlich davon abhängen subjektive persönliche Beobachtung kann . Die Person, die als die Schreiber der Verhaltensparameter während des Tests sollte blind sein, um dem Genotyp oder der Behandlungsweise und diese Informationen dekodiert danach. 7. Repräsentative Ergebnisse: Ein Beispiel für die beiden Stufen der sozialen Interaktion Test ist in den Abbildungen 1 und 2 dargestellt. Die erste Sitzung des Tests erlaubt die Abschätzung der sozialen Zugehörigkeit und die Motivation des Themas mit der Maus. In diesem Teil des Tests war der Fremde mit der Maus in einen kreisförmigen Draht Tasse, die Nase kontaktieren erlaubt eingeschlossen, sondern verhindert Kämpfe zwischen Mäusen. Diese Bedingungen gewährleisten, dass soziale Ansätze durch das Subjekt Maus sind initiiert und werden Untersuchungskommission nur, ohne direkten physischen Kontakt. Die Maus hat die Wahl, um mehr Zeit um die Eindämmung Tasse mit dem Fremden Maus verbringen oder einen Kontakt, indem Sie das Fach mit den leeren Becher zu vermeiden. Andere Parameter wie Anzahl der einzelnen Kontakte, können ergänzend zum Dauer verwendet werden verbrachten in der Nähe des Fremden Maus. Typischerweise wird ein Wildtyp-Tier deutlich mehr Zeit in das Fach zu verbringen mit Fremden 1 im Vergleich zu den Fach mit leeren Becher (Abbildung 1A), was darauf hinweist normalen Geselligkeit, soziale Motivation und Zugehörigkeit. In GSK-3α-Knockout-Mäusen, zum Beispiel, gibt es keine signifikanten Unterschiede zwischen der Zeit, mit leeren Becher ausgegeben, verglichen mit der Tasse mit Fremden 1 (Abbildung 1B), was darauf hinweist beeinträchtigt Geselligkeit in diesen tierischen Modell 6. Die zweite Sitzung des Tests ist so konzipiert, soziale Neuheit und soziales Gedächtnis zu schätzen. In diesem Teil ist das Thema der Maus eine freie Wahl zwischen dem ersten, bereits untersucht, ungewohnte Maus (Stranger 1), und ein Roman nicht vertraut mit der Maus (Stranger 2). Normalerweise erinnert sich an einen WT Tier seine früheren Kontakt mit Fremden 1, und in dieser Sitzung, neigt dazu, mehr Zeit mit dem neu aufgetretenen Maus (Stranger 2) verbringen, was darauf hinweist intaktes soziales Gedächtnis und die Vorliebe für neue Erfahrungen (Abbildung 2A). Im Gegensatz zu Wildtyp-Mäusen, tun GSK-3α mutierten Tiere nicht eine Präferenz für die Kammer mit einem neu eingeführten Maus (Stranger 2) über eine Kammer mit einem inzwischen bekannten Maus (Stranger 1) in Sitzung II (Abbildung 2B). Gleichgültig Verhalten der KO-Mäuse in diesem Test ist ein Hinweis auf verminderte soziale Motivation und Neuheit. . Abbildung 1 Session I: Soziale Zugehörigkeit und Geselligkeit. Mittlere Länge der Zeit (± SEM) in der Kammer mit dem Fremden ("Fremder Seite") im Vergleich zu den anderen Kammer ("leere Seite"). Im Gegensatz zu WT Männer (A), nicht KO (B) Tiere eine Vorliebe für soziale Nähe von Ausgaben gleichzeitig in beiden Kammern zu demonstrieren. *** P ≤ 0,0001 im WT-Gruppe. Abbildung 2 Session II:. Social-Speicher und Neuheit. Die mittlere Dauer der Zeit (± SEM) in die Kammer mit dem ungewohnten Maus aus der Geselligkeit Phase ("Stranger 1") und in der gegenüberliegenden Kammer mit einer neuen unbekannten Maus ("Stranger 2"). Im Gegensatz zu WT Männer (A), nicht KO (B) Tiere eine Vorliebe für soziale Neuheit von Ausgaben gleichzeitig in beiden Kammern zu demonstrieren. *** P ≤ 0,0001 im WT-Gruppe.