Evaluación de los comportamientos de interacción social

1. Equipos y sala de preparación: El aparato de la sociabilidad Crawley y preferencia por la prueba de novedad social está compuesto por una rectangular, de tres cámaras caja. Cada cámara es de 19 x 45 cm y los muros divisorios están hechas de plexiglás transparente, con una sección central abierta, que permite el libre acceso a cada cámara. Utilizar dos de copa idénticos, alambre de contenedores con tapas removibles que lo suficientemente grande para un solo ratón. Estos se colocan verticalmente en el interior del aparato, uno en cada cámara lateral, y contendrá el ratón ingenuo / desconocido. Cada contenedor está formado por cables de metal para permitir el intercambio de aire entre el interior y el exterior del cilindro, pero lo suficientemente pequeño como para evitar las interacciones físico directo entre un animal en su interior con una en el exterior. Las pruebas de comportamiento se debe realizar 09 a.m.-06:00 pm. Iluminación general habitación es de 650 lux. Emplean a 6,0 Observer (Noldus) programa (o una alternativa adecuada) para controlar y registrar la observación y el seguimiento de los parámetros mencionados en el apartado 4.3. Después de cada ensayo, limpiar todas las cámaras con el 70% de etanol (entre los ratones) y luego con Clidox 01:05:01 (entre las jaulas) para evitar el sesgo de recordatorio olfatorio y para asegurar una buena desinfección, respectivamente. La persona que hace la observación tiene que ser por lo menos 2 metros de distancia del aparato. 2. Animal de preparación: Casa tres-cinco ratones por jaula en una habitación con un 12 horas de luz / oscuridad ciclo (luces a las 7:00 am) con acceso ad libitum al alimento y agua, de acuerdo con las normas y los requisitos de orientación del Comité local de Cuidado de Animales y protocolos. La transferencia de todas las jaulas de ratones en la habitación del comportamiento 30 minutos antes de la primera prueba comienza. Hay dos clases de ratón necesarios para este experimento, uno que actúa como un control, ingenua o "unfamiliarized" de los animales y que es el sujeto de la prueba. Para el control del ratón un ratón del mismo origen (por lo general C57BL6), edad (por lo general de 8-12 semanas de edad), sexo y peso, sin ningún contacto previo (no de camada) con el ratón tema. Dos ratones de control se requieren por experimento, una se utiliza para la sesión I y otro para la sesión II. Los ratones de control puede utilizar el mismo entre los ensayos. 3. Habituación (adaptación): Aislar a los compartimentos de derecha e izquierda mediante el uso de los muros de plexiglás división. Lugar vacío vasos de contención de alambre en el centro de la cámara de derecha e izquierda (uno por cada sitio). Coloque el ratón sujeto en el centro de la cámara intermedia de adaptación. Habituarse durante 5 minutos. 4. Aspecto de afiliación social de la prueba (sesión I): Coloque uno de los ratones de control ("Stranger 1") dentro de un vaso de contención de alambre que se encuentra en una de las cámaras laterales. La colocación de un extraño en el lado derecho o izquierdo de la cámara está alterado sistemáticamente entre los ensayos. Remover los muros entre los compartimentos, para permitir el acceso libre para el ratón con sujeción a explorar cada una de las tres cámaras. Inmediatamente, comienza el seguimiento y registro de los siguientes parámetros: la duración y la Número de acciones (activos) los contactos entre el ratón y el tema de vivienda taza de contención o no la vivienda un extraño un ratón, por cada cámara individualmente. El contacto directo entre el ratón y el tema de la copa de contención, o estiramiento del cuerpo del ratón en un área sujeta 5.3 cm alrededor de la taza se cuenta como un contacto activo; la duración y la número de conductas de otros sujetos con el ratón en cada compartimiento, como el senderismo, la auto-preparación, falta de movimientos del cuerpo durante más de 5 segundos ("congelación"), así como un comportamiento inusual, como saltar, comportamiento repetitivo, etc; la duración y la número de entradas a cada compartimento. El ratón es considerado en la cámara cuando la cabeza y cuatro patas han entrado en la cámara. La duración de la sesión que está a 10 minutos. 5. Sociales Novedad / preferencia de sesión de la prueba (Sesión II): Lugar a un ratón segundo control ("Stranger 2") dentro de una taza de alambre de contención idénticos en la cámara el lado opuesto (que había estado vacío durante la Sesión I). Monitorear los mismos parámetros descritos en el apartado 4.3, diferenciando los comportamientos entre los sujetos del ratón en la presencia de un extraño en comparación con el extraño 2. La duración de la sesión II es de 10 minutos. 6. Análisis estadístico: Al utilizar el programa de Origen 6.0 (o una alternativa adecuada) analizan los siguientes parámetros, utilizando los datos registrados: el número total de contactos y duración total de los contactos entre los memorandos de entendimiento experimentale y vacío de contención frente a la taza o vaso extraño vivienda 1 (en la sesión I), o entre el ratón experimental y la taza de la vivienda 1 vs extraño Extraño 2 (en la sesión II); la duración media por contacto; número total y la duración de otras conductas (congelación, la auto-preparación, caminar) el tiempo total invertido por el tema del ratón en cada compartimento. Analizar las diferencias significativas para cada uno de los parámetros antes mencionados, mediante la comparación de los grupos: "Vacíos" de la Copa de contención frente a "Stranger 1" para un tipo salvaje (WT) sujeto "Vacíos" de contención frente a la taza "Stranger 1" para el ratón experimental (por ejemplo, un golpe de gracia, el ratón transgénico o tratadas con el medicamento, etc.) "Extraño un" vs "Stranger 2" para un tema PESO "Extraño un" vs "Stranger 2" para el ratón experimental (octavos de final, transgénicos, o tratadas con el medicamento, etc.) Presentar cada conjunto de datos de los parámetros antes mencionados, como la Sesión I: temas WT y experimental; Sesión II: WT y los sujetos de experimentación, como se muestra en la Figura 1 (A y B) y 2 (A y B), respectivamente. También es recomendable tener en cuenta otros parámetros, que ayudan en la estandarización de esta prueba, tales como la experiencia previa en el reconocimiento de patrones específicos de comportamiento del ratón, como la inhalación, el aseo, roce, lucha, de montaje, que puede ser en gran parte dependiente en la observación subjetiva y personal . La persona que actúa como el grabador de los parámetros de comportamiento durante la prueba debe ser ciega a las condiciones de genotipo o de tratamiento, y esta información decodificada después. 7. Los resultados representativos: Un ejemplo de los dos pasos de la prueba de la interacción social se muestra en las figuras 1 y 2. La primera sesión de la prueba permite la estimación de pertenencia social y la motivación del ratón tema. En esta parte de la prueba, el ratón extraño fue encerrado en una taza de alambre circular que permite ponerse en contacto la nariz, pero impidió que los enfrentamientos entre los ratones. Estas condiciones garantizan que los enfoques sociales son iniciadas por el sujeto y el ratón son sólo de investigación, sin contacto físico directo. El ratón tiene la opción de pasar más tiempo alrededor de la taza de contención que contiene el ratón extraño o para evitar cualquier contacto por móvil en el compartimento con la taza vacía. Otros parámetros, como el número de contactos individuales, se puede utilizar en más de duración pasó cerca del ratón extraño. Por lo general, un animal silvestre a pasar mucho más tiempo en el compartimiento con un extraño en comparación con el compartimiento con el vaso vacío (fig. 1A), lo que indica la sociabilidad normal, la motivación social y la afiliación. En ratones knockout GSK-3α, por ejemplo, no hay diferencias significativas entre el tiempo pasado con la taza vacía en comparación con la copa que contiene un extraño (fig. 1B), lo que indica la sociabilidad alterada en estos modelos animales 6. La segunda sesión de la prueba está diseñada para calcular la novedad social y la memoria social. En esta parte, el ratón tiene un tema de libre elección entre los primeros, ya investigados, el ratón desconocido (Extraño 1), y un ratón de la novela familiar (Extraño 2). Por lo general, un animal PESO recuerda su contacto previo con un extraño, y, en esta sesión, tiende a pasar más tiempo con el ratón recién encontrado (Extraño 2), lo que indica la memoria intacta social y predilección por las experiencias nuevas (Figura 2A). A diferencia de ratones de tipo salvaje, la GSK-3α animales mutantes no muestran preferencia por la cámara que contiene un ratón recién introducidos (Extraño 2) en una cámara que contiene un ratón ya familiar (Extraño 1) en la sesión II (Figura 2B). Comportamiento indiferente de los ratones KO en esta prueba es un indicador de la motivación social y la disminución de la novedad. . Figura 1 Sesión I: la afiliación social y la sociabilidad. La duración media del tiempo (± SEM) en la cámara con el extranjero ("lado extraño") en comparación con la cámara opuesta ("el lado vacío"). A diferencia de los machos WT (A), KO (B) los animales no demuestran una preferencia por la proximidad social por el gasto mismo tiempo en ambas cámaras. *** P ≤ 0,0001 en el grupo de WT. Figura 2 Sesión II:. Memoria social y la novedad. La duración media de tiempo (± SEM) en la cámara con el ratón desconocido desde la fase de sociabilidad ("Stranger 1") y en la cámara opuesta, con un nuevo ratón desconocido ("Stranger 2"). A diferencia de los machos WT (A), KO (B) los animales no demuestran una preferencia por la novedad social, el gasto mismo tiempo en ambas cámaras. *** P ≤ 0,0001 en el grupo de WT.