Évaluation des comportements d'interaction sociale

1. Équipement et salle Set Up: L'appareil pour la sociabilité de Crawley et de la préférence pour le test de nouveauté sociale est composée une forme rectangulaire, trois chambres boîte. Chaque chambre est de 19 x 45 cm et les cloisons sont faites de plexiglas clair, avec une section du milieu ouvert, ce qui permet d'accéder gratuitement à chaque chambre. Utilisez deux identiques, en forme de coupe fil de contenants munis de couvercles amovibles qui assez grand pour contenir une seule souris. Ces derniers sont placés verticalement à l'intérieur de l'appareil, un dans chaque chambre latérale, et contiendra la souris naïve / inconnu. Chaque conteneur est composé de fils métalliques pour permettre l'échange d'air entre l'intérieur et l'extérieur du cylindre, mais suffisamment petits pour empêcher les interactions physiques directes entre un animal à l'intérieur d'une seule à l'extérieur. Tests comportementaux devraient être effectuées 09h00-18h00. Éclairage de la pièce générale est 650 lux. Employer 6,0 Observateur (Noldus) programme (ou une alternative appropriée) pour surveiller et enregistrer l'observation et le suivi des paramètres, mentionné dans la section 4.3. Après chaque essai, nettoyer toutes les chambres avec de l'éthanol à 70% (entre la souris), puis avec Clidox 01:05:01 (entre les cages) pour éviter toute partialité cue olfactif et pour assurer une désinfection adéquate, respectivement. La personne qui fait l'observation doit être d'au moins 2 mètres de l'appareil. 2. Préparation des animaux: Maison de trois à cinq souris par cage dans une pièce avec un 12 h cycle lumière / obscurité (lumières à 07h00) avec un accès ad libitum à la nourriture et l'eau, conformément aux normes et aux exigences des directives animaux comité local de soins et de protocoles. Transférer toutes les cages contenant des souris dans la salle de comportement 30 minutes avant le premier essai commence. Il ya deux classes de souris requis pour cette expérience, celui qui agit comme un contrôle, naïf ou "unfamiliarized« animal et celui qui fait l'objet de test. Pour le contrôle de la souris utiliser une souris de la même origine (généralement C57BL6), l'âge (habituellement 8-12 semaines), le sexe et le poids, sans aucun contact préalable (pas la même portée) avec la souris l'objet. Deux souris témoins sont nécessaires par expérience, on est utilisée pour la session I et un autre pour la session II. Les souris de contrôle peuvent être utilisées, entre les essais. 3. L'accoutumance (adaptation): Isoler les compartiments droite et à gauche en utilisant les murs en plexiglas de démarcation. Place vide tasses de confinement métallique au milieu de la chambre à droite et à gauche (un pour chaque site). Placez la souris soumises au centre de la chambre du milieu pour l'adaptation. S'habituer pendant 5 minutes. 4. Aspect appartenance sociale de l'essai (session I): Placez l'une des souris de contrôle ("Stranger 1") à l'intérieur d'une tasse de confinement métallique qui se trouve dans l'une des chambres latérales. Le placement de Stranger 1 dans le côté droit ou gauche de la chambre est systématiquement changé entre les essais. Retirez les murs entre les compartiments, afin de permettre un libre accès pour la souris soumise à explorer chacune des trois chambres. Immédiatement, commencer à surveiller et enregistrer les paramètres suivants: la durée et nombre de directs (actif) les contacts entre la souris et le logement sous réserve de la Coupe de confinement ou de ne pas le logement de l'étranger une souris, pour chaque chambre individuelle. Le contact direct entre la souris soumises et la coupe de confinement, ou étirement du corps de la souris dans une zone soumise 3-5 cm autour de la tasse est compté comme un contact actif; la durée et nombre d'autres comportements par la souris soumises dans chaque compartiment, y compris la marche, l'auto-toilettage, absence de mouvements du corps pour plus de 5 secondes (le «gel»), ainsi que des comportements inhabituels, comme le saut, les comportements répétitifs, etc; la durée et nombre d'entrées à chaque compartiment. La souris est considéré comme étant dans la chambre lorsque sa tête et quatre pattes sont entrés dans la chambre. La durée de la session I est de 10 minutes. 5. Nouveauté sociale / préférence session de l'épreuve (session II): Placez un contrôle de la souris seconde ("Stranger 2") à l'intérieur une tasse de confinement fils identiques dans la chambre de l'autre côté (qui avait été vide durant la Session I). Surveiller les mêmes paramètres décrits en 4.3, la différenciation des comportements entre la souris soumises à la présence de Stranger 1 par rapport à Stranger 2. La durée de la session II est à 10 minutes. 6. Analyse statistique: En utilisant l'origine programme 6.0 (ou une alternative appropriée) d'analyser les paramètres suivants, en utilisant les données enregistrées: le nombre total de contacts et de durée totale de contacts entre les protocoles d'entente expérimentalee et vide de confinement ou de Coupe vs Stranger logements (1 tasse en session I), ou entre la souris expérimentales et le boîtier de la Coupe Stranger Stranger 1 vs 2 (en session II); La durée moyenne par contact; nombre total et la durée des autres comportements (congélation, l'auto-toilettage, marche) temps total passé par les souris soumises dans chaque compartiment. Analyser les différences significatives pour chacun des paramètres précités, en comparant les groupes: "Vide" tasse de confinement vs «Stranger 1" pour un type sauvage (WT) sous réserve "Vide" de confinement de la Coupe vs «Stranger 1" pour la souris expérimentales (par exemple un KO, souris transgéniques ou traités par le médicament, etc.) "Stranger 1" vs "Stranger 2" pour un sujet WT "Stranger 1" vs "Stranger 2" pour la souris expérimentales (knock-out, transgéniques ou traités par le médicament, etc.) Présent à chaque ensemble de données sur les paramètres précités que Séance I: sujets WT et expérimentales; Session II: WT et les sujets expérimentaux, comme le montre la figure 1 (A et B) et 2 (A et B), respectivement. Il est également conseillé de prendre en considération d'autres paramètres, ce qui aide à normaliser ce test, comme l'expérience préalable dans la reconnaissance des modèles de souris spécifiques de comportement, comme renifler, le toilettage, le frottement, la lutte, de montage, qui peut être largement tributaire de l'observation personnelle subjective . La personne qui agit en tant que l'enregistreur des paramètres de comportement durant l'essai doivent être aveugles aux conditions du génotype ou de traitement, et cette information décodée par la suite. 7. Les résultats représentatifs: Un exemple de ces deux étapes du test de l'interaction sociale est montré dans les figures 1 et 2. La première session de l'épreuve permet d'estimer l'appartenance sociale et la motivation de la souris soumises. Dans cette partie du test, la souris étranger était enfermé dans une tasse de fil circulaire qui a permis de contact du nez, mais a empêché les combats entre les souris. Ces conditions garantissent que les approches sociales sont initiées par la souris soumises et sont d'enquête seulement, sans contact physique direct. La souris a le choix de passer plus de temps autour de la tasse de confinement contenant la souris étranger ou à éviter tout contact en se déplaçant vers le compartiment avec la tasse vide. D'autres paramètres, tels que le nombre de contacts individuels, peuvent être utilisées dans supplémentaire à durée passée à proximité de la souris étranger. Typiquement, un animal de type sauvage passeront beaucoup plus de temps dans le compartiment avec Stranger 1 par rapport au compartiment avec tasse vide (figure 1A), indiquant la sociabilité normale, la motivation sociale et l'affiliation. Chez les souris KO GSK-3α, par exemple, il n'ya pas de différences significatives entre le temps passé avec tasse vide par rapport à la coupelle contenant une inconnue (figure 1B), indiquant la sociabilité réduite dans ces modèle 6 animaux. La deuxième session de l'épreuve est destinée à estimer la nouveauté sociale et de la mémoire sociale. Dans cette partie, la souris soumises a un libre choix entre le premier, déjà étudié, souris familier (Stranger 1), et une nouvelle souris familier (Stranger 2). Habituellement, un animal WT rappelle son contact antérieur avec Stranger 1, et, dans cette session, a tendance à passer plus de temps avec la souris nouvellement rencontrées (Stranger 2), indiquant intacte la mémoire sociale et la prédilection pour des expériences nouvelles (figure 2A). Contrairement souris de type sauvage, la GSK-3α animaux mutants ne montrent pas leur préférence pour la chambre contenant une souris nouvellement introduites (Stranger 2) sur une chambre contenant une souris désormais familier (Stranger 1) dans la session II (figure 2B). Indifférent comportements des souris KO pour ce test est révélateur de la motivation sociale a diminué et la nouveauté. . Session figure 1 I: l'affiliation sociale et la sociabilité. La durée moyenne du temps (± SEM) dans la chambre avec l'étranger («côté étranger") par rapport à la chambre en face («côté vide"). Contrairement mâles WT (A), KO (B) les animaux échoué à démontrer une préférence pour la proximité sociale par les dépenses en même temps dans les deux chambres. *** P ≤ 0,0001 dans le groupe WT. Figure 2 Séance II:. La mémoire sociale et la nouveauté. La durée moyenne du temps (± SEM) dans la chambre avec la souris familier de la phase de sociabilité («Stranger 1") et dans la chambre face à une nouvelle souris familier («Stranger 2"). Contrairement mâles WT (A), KO (B) les animaux échoué à démontrer une préférence pour la nouveauté sociale par les dépenses en même temps dans les deux chambres. *** P ≤ 0,0001 dans le groupe WT.