Het testen van oppervlakte-expressie van receptoren Chemosensory in heterologe cellen

De levendige wereld van geuren is erkend door het gevoel van reukzin. Reukzin bij muizen wordt gemedieerd door een repertoire van ongeveer 1200 G-eiwit gekoppelde receptoren (GPCR's) ^1, die verondersteld dat vluchtige odorant moleculen binden en het omzetten van de extracellulaire signaal om in een intracellulaire signaal door koppeling met G-eiwit Gαolf. Binding van de geurstoffen aan de receptoren wordt beschouwd als een combinatorische regel, dat is een geurstof, kan binden verschillende receptoren en een receptor kan verschillende geurstoffen te binden in verschillende mate ² te volgen. Biochemische, signalering en ligand binding studies zijn geschikt uitgevoerd voor de meeste GPCR's met behulp van heterologe cellen. Maar van heterologe cellen gebruiken voor de studie van odorant receptoren, was uitgesloten voor een lange tijd geleden op transfectie ze niet exporteren naar de oppervlakte. Saito et al. hebben aangetoond dat een membraan passeren Receptor Transport Protein (RTP) familie begeleiders verhoogde expressie zien in de olfactorische sensorische neuronen en treden op als begeleiders om het verkeer odorant receptoren aan de oppervlakte in heterologe cellen, bij gelijktijdige samen getransfecteerd ^3. Voor het uitvoeren van biochemische assays voor het gebruik van heterologe receptoren cellen, moet men eerst nagaan of de receptor vertoont robuuste oppervlakte-expressie in de cel lijn. Dit kan worden getest door overexpressie van de receptoren met de begeleider RTP1S, gevolgd door live-cell kleuring om fluorescent label het extracellulaire domein of een tag in het extracellulaire domein exclusief. Hier laten we zien een protocol voor het uitvoeren van live cell vlekken die kunnen worden gebruikt om de geurstof receptoren gemakkelijk te detecteren op het oppervlak van HEK293T cellen. Daarnaast kan het ook worden gebruikt om de analyse voor oppervlakte-expressie van andere chemosensory receptoren of GPCR's.